Способ идентификации ингибиторов @ -амилаз

Авторы патента:

СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ШГИБИТОРОВ ci-АМИЛАЗ путем фракционирования белков в гелях с использованием пластины полиакриламидного геля, содержащей крахмал, о -амилазу и.буфер с рН, отличным от оптимального, инкубации геля в буфере при оптимальных значениях рН и температуры с последующей окраской иодом, отличающийс я тем, что, с целью повьшения разрешающей способности способа, фракционирование проводят в гелях, не содержащих крахмала й -амилазы, затем накладывают на разделяющими гель гельреплику , содержащий крахмал и (З -амилазу , и выдерживают в течение 3090 мин. (Л С

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУбЛИК

„„SU(„) 3 375967 (51)4 С ) 2 Q 1/40 гОсудА ственный комитет сссР по делАм изобРетений и ОткРытий

Г ..;," „* (q

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ::, „ц

И ABTGPCHGMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21 ) 3618458/28-1 3 (22) 08.07.83 (45) 30.08.85. Бюл. № 32 (72) А.В.Конарев (71) Всесоюзный ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский институт защиты растений (53) 577.154.31(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

¹ 969720, кл. С 12 О 1/40, 1982. (54) (57) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ИНГИБИТОРОВ К-АМИЛАЗ путем фракционирования белков в гелях с использованием пластины полиакриламидного геля, содержащей крахмал, о(вЂ” амилазу и буфер с рН, отличным от оптимального, инкубации геля в буфере при оптимальных значениях рН и температуры с последующей окраской иодом, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения разрешающей способности способа, фракционирование проводят в гелях, не содержащих крахмала с -амилазы, затем накладывают на разделяющий гель гельреплику, содержащий крахмал и с -амилазу, и выдерживают в течение 3090 мин.

1175967

Составитель Н. Гуляева

Техред С.Мигунова Корректор М.Пожо

Редактор Л.Пчелинская

Заказ 5312/30

Тираж 525 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, M-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение относится к биохимии растений и может быть использовано для защиты растений, в общей биохимии и биохимии пищеварения, генетивЂ” ке и селекции растений. 5

Цель изобретения вЂ” повышение разрешающей способности способа.

Пример. Идентификация ингибиторов 4.-амилаэы мучного хрущака. 10

10 мг муки пшеницы или другого знака заливают 0,2 мл Z M мочевины и оставляют на 18 ч при 4 С. Экстракцию проводят в лунках пластмассовой кассеты, предназначенной для 60 об- 15 разцов. Кассету помещают в термостат на 20 мин при 80 С, Раствор белка о наносят на пластину разделяющего тела при помощи полосок фильтровальной бумаги 5- 3 мм, впитавших по 3 мкл gp экстракта. На одной пластине разделяющего геля анализируют одновременно

40 образцов. Гель содержит 5,87. акриламида, 0,25Х метиленбисакриламида, 1Ж амфолин ("ВКВ") рН 5-8 и 2 М 2 мочевину. Для приготовления геля размером 240-120 ° 1 мм к 30 мл дегазированного раствора добавляют 30 мкл

ТЕМЕДа и 1,5 мл раствора рибофлавина (4 мг на 100 мл). Разделяющий гель помещают на охлаждающую пластину прибора Мультифор" или другого прибора подобного типа. В качестве электродов служат бумажные полоски, 1 смоченные 0,1 М NaOH (катод ) и 0,5 M фосфорной кислоты с (),1 М глутаминовой кислотой (анод j. Разделение ведут 2 ч при напряжении 1800 В, после чего удаляют электродные полоски и на разделяющий гель накладывают гель-реплику следующего состава 5,8Х акриламид, 0,257. метиленбисакриламид, 2 М мочевины, буфера рН 8,3, содержащего 0,0074 M трис и 0,057 M глицина, 0,17. крахмала и о -амилаэ мучного хрущака в концентрации, достаточной для разрушения всего крахмала в геле за

30 мин при оптимальных условиях.

Размер геля 240 120.2 мм. Разделяющий гель и гель вЂ репли находятся в контакте 30 мин при 20 С, после о чего гель-реплику помещают в ацетатный буфер рН 5,4, содержащий 0,1 М

NaCl и 0,001 М СаС1 2. Гель инкубируют в буфере при 37 С. За степенью разрушения крахмала следят, отрезая небольшие участки с краев геля и помещая их в раствор иода.

Когда эти участки начинают приобретать оранжевую окраску, гель-реплику заливают раствором иода (100 мг иода и 500 мг иодистого калия на 0,5 л воды ). Зоны, содержащие ингибиторы 2-амилазы насекомого, окрашиваются в синий цвет.

Гель фотографируют на фотопленку в проходящем свете. Окрашенные пластины геля могут храниться в растворе иода несколько недель.

Способ идентификации ингибиторов @ -амилаз

Способ количественного определения активности сс-амилазы в биологических жидкостях // 396036

Способ определения активности цитолитических ферментов // 150808

Способ оценки ферментативной активности дрожжей // 2229126

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к микробиологии пищевых производств

Способ определения @ -амилазы // 1212332

Способ идентификации лектинов // 1571070

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к биохимии растений, и может быть использовано в биохимии иммунитета растений и патогенам и в медицинской биохимии для идентификации компонентов лектинов в спектрах белков

Способ определения токсичности зернопродуктов и комбикормов // 1641888

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в кормопроизводстве, в частности в определении токсичности зерна, различных продуктов его переработки, комбинированных кормов, пораженных И зобретеиие относится к биотехнологии и может быть использовано в области кормопроизводства, в частности в определении токсичности зерна, различных продуктов его переработки, комбинированных кормов, пораженных микроскопическими грибами и содержащих их токсические метаболиты (микотоксииы)

Способ идентификации ингибиторов гидролаз // 1648979

Изобретение относится к энзимологии и биотехнологии и может использоваться в биохимии растений и животных, в частности в работах по биохимии иммунитета растений к вредным организмам, а также в медицинской биохимии для идентификации ингибиторов индивидуальных компонентов сложных смесей гидролаз

Способ определения "картофельной" болезни хлеба // 2519107

Изобретение относится к области пищевой промышленности и предназначено для выявления «картофельной» болезни хлеба. Способ включает выпекание хлеба и отбор проб мякиша от свежевыпеченного хлеба и хлеба, инкубированного при 37°C в течение 16-20 ч. Готовят водные экстракты бактериальной альфа-амилазы из отобранных проб мякиша хлеба с дальнейшей фильтрацией экстрактов. После этого определяют в них разжижающую активность (РА) по скорости разжижения крахмала альфа-амилазой на приборе для определения числа падения. Величину РА определяют по формуле где РА - разжижающая активность, %; ЧПк - число падения крахмала с экстрактом хлеба после выпечки, с; ЧПi - число падения крахмала с экстрактом хранившегося хлеба, с. Способ позволяет точно обнаружить «картофельную» болезнь на 8-12 ч ранее появления ее первых органолептических признаков в хлебе. 1 ил., 1 табл., 1 пр.

Способ диагностики урогенитального трихомониаза // 2639452

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, паразитологии, венерологии, медицинской микробиологии, гематологии, и может быть использовано для диагностики урогенитального трихомониаза. Способ диагностики урогенитального трихомониаза включает забор периферической крови, ее пробоподготовку и ферментативное разрушение форменных элементов периферической крови путем добавления к пробе крови ферментативного препарата протеолитического действия Вобэнзим однократно в виде 0,1-0,5%-ного водного раствора в соотношении 1:1. Далее через 6-12 часов с момента применения ферментативного препарата проводят изготовление мазков и их микроскопическое исследование на выявление трихомонад. Изобретение обеспечивает существенное сокращение длительности проведения лабораторной диагностики трихомониаза из крови, повышение точности диагностики трихомониаза за счет более полного лизиса форменных элементов периферической крови и уменьшение расхода ферментативного препарата. 3 пр.