Способ количественного определения активности сс-амилазы в биологических жидкостях

Авторы патента:

Иностранцы Бернхард Клейн , Рональд Лой Серсн Соединенные Штаты Америки

C12Q1/40 - амилазу

Союз созетских

Социалистических

Республик.

396036

Зависимый от патента МвЂ”

М. Кл. G Oln 33 16

Заявлено 19Х111.1969 (№ 1362001/23-4}

Приоритет 19.И11 1968, ¹ 753748, США

Оп бликовано 28Х111.1973. Бюллетень № 35

Государственный комитет

Совета Министров СССР оа делам изооретений и открытиЙ

УДЫ 543 9 078(088 8) Дата опубликования описа|3ия 31.1.1974

Иностранцы

Бернхард Клейн и Рональд Лой Серси (Соединенные Штаты Америки) Иностранная фирма

«Ф. Хоффманн Ля Рош и Ко, АГ» (Швейцария) Авторы изобретения

Заявитель

СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ с(-А(т1ИЛАЗЫ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ

Изобретение относится к аналитической химии фермеI!TOB, а именно к спосооам кол|1чсствспиогÎ определения активности амилазы, содержащейся в биологических ?кидкостях. 0

Известен способ количественного определен.lя якт:.i li!0cT :1 амилазы Б 1!екот01?ых 0110:IОГИ И СК(!Х ?КИДКОСТЯХ ПРИ ПОМОЩИ ДИНИТ(?0c B. I II ö. Ië 0 130É к! |сл О 1 ы дл Я Оп 1?едел еи и Я кол |1чсства Г Î cT(111313(!èÂ IOùèõ Гp? пп, Освооож 10 дающихся при гидрол:|зе крахмала, катал:Iзируемом амилазой. Однако, при проведении способа необходимо строго соблюдать услоБи", фермсптативпого расщепл-!;!:!. крахмала, вследств .!с этого точность определения недо- 15 статочпо высока.

Для повышения точ||ости анализа предлагается способ количественного определения активности и-амилазы в биологических жидкостях, заключающийся в то;I, что водоперя- 20 створимый !(031!:.лекс водораствор,loco реак|ивиогÎ краси iс. я с содержа|цим амилозу

Бсщсство:11 Б Бодиоъl фосфатиом б (1?ере 110двергают эизиматпческому действию исследуемой биологической жидкости в присутствии 25 катал:|затора, например хлорида щелочного металла, с последующим срависп||см цвета полученной ?кидкости со стандартом.

Процесс:келятельно вести ир;! рН 6,9вЂ”

7,1 и при темпс?атуре 37 вЂ” 40=С, а в качестве ко м и. 1 е ко а р с а к T 1! Б н О Г О 1(р а с и те;1 |1 11(I I 0;1 b 3 0Вать комплc|(c, краситсл|иl ая 1(ол! ИOlicllòа которого прсдставляст сооой молохлортрияз!Пи с аитрахипопдис льфопатпым заместителем.

При определении якт:IBHocò!I (x-амилазы водонерастворимый комплсч(с реактивного красителя, напр||мер Li |оакрона блестяще-cllнего гЗС(А (рсактивпого синего 2) ||ли Цибакропа блсстящс-оранжевого GF (реактивного оранжевого 5), с содержащим ямилазу материало:,I, суспендируют в водном растворе нейтрального фосф".òiloão буфсра при рН

6,9 вЂ” 7,1 и хлор;|да щело:i!101 0 мстялла. сусг.:сизию нагревают до 37 вЂ” 40"С, вводят анализ(11?мсм;!О Iipoo? би(?логи l(c|сои ?кпдкости чер 3 15 .чин реакцию остапавливгпот,п|бо путем попижс| ия, либо повышения pII.

Получс;п(ую смесь разбавляют 130zoii, центри(руп|руют и интенсивность окраски центрифугата сопоставляют с окраской стандартной пробы, 396036

Предмет изобретения

Составитель С. Хованская

Текред 3. Тараненко Корректор Л, Царькова

Редактор О. Кузнецова

Заказ 12524/13 Изд, № 975 Тираж 755 Подиисное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Ж-35, Раушская нао., д. 4/5

Малоярославецкая городская типография Калужского областного управления издательств, полиграфии и книжной торговли

Изготовление красильного крахмального комплекса.

А. 10 г Цибакропа блестяще-синего ЕЗДА в 1 л воды прибавляют к суспензии

100 г амилозы в 1 л воды при 50 С и при 5 пе1ремешивания. Потом медленно и при перемешивании вводят втечение 30 мин 200 z безводного сульфата натрия, затем 150 мл 10%ного раствора тринатрийфосфата. Для прохождения реакции реакционную смесь пере- 10 мешивают 75 мин при 50 С.

Полученную суспензию перемешивают в течение ночи при комнатной температуре, вводят в центрифугу и центр и фуги руют

20 мин при 2500 вЂ” 3000 об/мин. Полученное 15 тве1рдое вещество промывают, егце раз центрифугируют и сушат.

Таким образом получают синий порош„;иобразный материал, представляющий собой один комплекс амилозы и Цибакрона бле- 20 стяще-синего гЗСзА, содержащий в амилозе приблизительно 7 вЂ” 10 ч. сахара на молекулу красителя.

Б. Употребляя вместо Цибакрона блестяще-синего F3GA в качестве красителя Циба- 25 крон блестяще-оранжевый GE, поступают согласно пункту А и получают оранжевый порошковидный материал, представляющий собой один комплекс амилозы и Цибакрона блестяще-оранжевого GE, содержащий в ами- 30 лозе 7 вЂ” 10 ч. сахара на молекулу красителя.

Пример. Определение активности и-амилазы.

В колбе Эрленмейера на 25 мл суспендируют 200 мг комплекса реактивного ра- 35 сителя с амилозой в 4,5 мл 0,04 М раствора фосфатного буфера (рН 7,0), содержащего

0,05 моль хлорида натрия, суспензию нагревают до 40 С. К нагретой суспензии прибавляют 0,1 вЂ” 0,4 мл исследуемой пробы биоло- 40 гической жидкости, например экстракта поджелудочной железы свиньи, и через 15 мин

1 мл 2-амино-2-метилпропанола-1 или 2 мл 1 и. уксусной кислоты, после чего смесь разбавляют водой до 10 мл и центрифугпруют.

Измеряют оптическую плотность центрифугата по отношению к раствору стандартной пробы. Стандартную пробу готовят по описанным данным, причем вместо пробы анализируемой жидкости используют 0,4 мл воды.

Калибровочную кривую строят путем из мерения оптической плотности растворов краоителей, содержащих 100 вЂ” 400 мкг красителя в 10 мл. В случае красителя реактивного синего 2измерения выполняют при б25нм, а в случае красителя реактивного оранжевого 5 при 490 нм. Активность амилазы выражают в количестве красителя в миллиграммах, освобождаемом 1 мл анализируемой пробы.

1. Способ количественного определения активности а-амилазы в биологических жидкостях, отличающийся тем, что, с целью повышения точности анализа, водонерастворимый комплекс водорастворимого реактивного красителя с содержащим амилозу веществом и водном фосфатном буфере подвергают энзиматическому действию исследуемой биологической жидкости в присутствии катализатора, например хлорида щелочного металла, с последующим сравнением цвета полученной жидкости со стандартом.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что при определении активности а-амилазы процесс ведут при рН 6,9 вЂ” 7,1 и температуре

37 вЂ” 40 С.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве комплекса реактивного красителя используют комплекс, красильная компонента которого представляет собой монохлортриазин с антрахинондисульфонатным заместителем.

Способ количественного определения активности сс-амилазы в биологических жидкостях

Способ оценки ферментативной активности дрожжей // 2229126

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к микробиологии пищевых производств

Способ идентификации ингибиторов l-амилаз // 969720

Способ идентификации ингибиторов @ -амилаз // 1175967

Способ определения @ -амилазы // 1212332

Способ идентификации лектинов // 1571070

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к биохимии растений, и может быть использовано в биохимии иммунитета растений и патогенам и в медицинской биохимии для идентификации компонентов лектинов в спектрах белков

Способ определения токсичности зернопродуктов и комбикормов // 1641888

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в кормопроизводстве, в частности в определении токсичности зерна, различных продуктов его переработки, комбинированных кормов, пораженных И зобретеиие относится к биотехнологии и может быть использовано в области кормопроизводства, в частности в определении токсичности зерна, различных продуктов его переработки, комбинированных кормов, пораженных микроскопическими грибами и содержащих их токсические метаболиты (микотоксииы)

Способ идентификации ингибиторов гидролаз // 1648979

Изобретение относится к энзимологии и биотехнологии и может использоваться в биохимии растений и животных, в частности в работах по биохимии иммунитета растений к вредным организмам, а также в медицинской биохимии для идентификации ингибиторов индивидуальных компонентов сложных смесей гидролаз

Способ определения "картофельной" болезни хлеба // 2519107

Изобретение относится к области пищевой промышленности и предназначено для выявления «картофельной» болезни хлеба. Способ включает выпекание хлеба и отбор проб мякиша от свежевыпеченного хлеба и хлеба, инкубированного при 37°C в течение 16-20 ч. Готовят водные экстракты бактериальной альфа-амилазы из отобранных проб мякиша хлеба с дальнейшей фильтрацией экстрактов. После этого определяют в них разжижающую активность (РА) по скорости разжижения крахмала альфа-амилазой на приборе для определения числа падения. Величину РА определяют по формуле где РА - разжижающая активность, %; ЧПк - число падения крахмала с экстрактом хлеба после выпечки, с; ЧПi - число падения крахмала с экстрактом хранившегося хлеба, с. Способ позволяет точно обнаружить «картофельную» болезнь на 8-12 ч ранее появления ее первых органолептических признаков в хлебе. 1 ил., 1 табл., 1 пр.

Способ диагностики урогенитального трихомониаза // 2639452

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, паразитологии, венерологии, медицинской микробиологии, гематологии, и может быть использовано для диагностики урогенитального трихомониаза. Способ диагностики урогенитального трихомониаза включает забор периферической крови, ее пробоподготовку и ферментативное разрушение форменных элементов периферической крови путем добавления к пробе крови ферментативного препарата протеолитического действия Вобэнзим однократно в виде 0,1-0,5%-ного водного раствора в соотношении 1:1. Далее через 6-12 часов с момента применения ферментативного препарата проводят изготовление мазков и их микроскопическое исследование на выявление трихомонад. Изобретение обеспечивает существенное сокращение длительности проведения лабораторной диагностики трихомониаза из крови, повышение точности диагностики трихомониаза за счет более полного лизиса форменных элементов периферической крови и уменьшение расхода ферментативного препарата. 3 пр.