Способ определения степени повреждения клеток

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕПЕНИ ПОВРЕЙЩЕНИЯ КЛЕТОК путем добавления к биологическому материалу раствора спинового зонда, содержащего 2,2,6,6-тетраметш1-4-оксопиперидин-t-оксил и хлористый никель с последующей регистрацией величины сигнала электроиного парамагнитного резонанса, отличающийся тем, что, с целью определения повреждения субклеточных органелл, раствор спинового зонда добавляют 5 раз в отношении 1:20 с экспозицией 1-2 мин.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (}9) (Ill

33 48

SD 4

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

Il0 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИИ И ОТКРЫТИЙ (21) 3617464/28-13 (22) 11.07.83. (46) 30.11.85. Бюл. 9 44 (71) Институт проблем криобиологии и криомедицины АН УССР (72) О.А. Нардид, В.И. Загнойко, В.А. Моисеев и В.И. Луговои (53) 6 12.014(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

У 1049808, кл. С 01 N 33/48, 1983. (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕПЕНИ

ПОВРЕЖДЕНИЯ КЛЕТОК путем добавления к биологическому материалу раствора спинового зонда, содержащего 2,2,6,6-тетраметнл-4-оксопиперидин-1-оксил и хлористый никель с последующей регистрацией величины сигнала электронного парамагнитного резонанса, о т— л и ч а ю шийся тем, что, с целью определения повреждения субкле-точных органелл, раствор спинового: зонда добавляют 5 раз в отношении

1:20 с экспозицией 1-2 мин.

Составитель Н. Гуляева

Редактор С. Лисина Техред А.Ач

Корректор А. Обручар

Заказ 7409/48 Тираж 896 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.,д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение относится к криоби- ологии, в частности к способам определения повреждений клеток.

Цель изобретения — определение повреждения субклеточных органелл.

Пример. В стеклянную ампулу ввели 0,4 мл суспензии лизосом.

Сюда же при постоянном перемешивании, с экспозицией по времени после каждого добавления в 1 мии, добавляли дискретно по 20 мкл 0 1 мл раствора, содержащего 10- М спинового занда и 1М NiCl . Добавки производили пять раз. Наблюдали спектр ЭПР . от радикалов, находящихся в цитозоле лизосом (компоненты 1 ) и радикалов, находящихся в мембранах лизосом (компоненты 1 ). Быстрое замораживание полученной суспензии до 77 К с последующим быстрым отогревом до комнатной температуры

195246 2 приводило к падению интенсивности сигнала с компонентами 1 на ЗОХ, что свидетельствовало о нарушении проницаемости мембран 30Х субклеточных органелл. Сохранение интенсивности сигнала с компонентами

1 свидетельствует о том, что на рушение проницаемости мембран происходит путем образования пор, про10 ницаемых для ионов никеля. Если исследуемый раствор готовить согласно известному способу, .то сигнал ЭПР от него не наблюдается. Это объясняется тем, что резкое увели15 чение концентрации соли в суспензии органелл приводит к разрушению их мембранных структур, и спиновый зонд становится доступным для пара1 магнитных ионов МР, что вызывает

2О уширение спектра ЭПР от зонда до необнаружения уже в исходном состоянии.