Способ получения сисомицина и штамм @ @ @ 1/109-продуцент сисомицина

 

1. Способ получения сисомицина путем культивирования штамма - продуцента вида Micromonospora в аэробных условиях в питательной среде, содержащей источники углерода и азота и минеральные соли, с последующим вьщелением целевого продукта в виде основания из культуральной жидкости , при необходимости очисткой его и переводом в соль, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта в качестве продуцента используют штамм Micromonospora rosea SI/109 MNG 00182 и культивирование проводят В ферментационной питательной среде, содержащей, г/л воды: Соевая мука 40 Пептон или гидролизат казеина 10 Картофельный или кукурузный крахмал 10-50 Глюкоза5 Углекислый кальций 4 Гептагидрат сернокислого магния2 I Тептагидрат сернокис (Л шого железа0,2 Гексагидрат азотнокислого кобальта 0,0008 Пальмовое масло 2. 2. .Способ поп., отличающийся тем, что питательная среда дополнительно содержит декстрин или растворимьш крахмал в количестве 20-25 г/л воды. 3.Способ поп.1,отличающ и и с я тем, что сисомицин - основание переводят в сернокислую соль сисомицина. 4.Штамм Micromonospora rosea SI/109, MNG 00182 (Венгерская национальная коллекция, Будапешт) - продуцент сисомицина.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

15И4 С )2 P 1/04(С 12 P )/04, ГОСУДА СТ ЕНН) )й HOMHTET GCOP.

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTHA

У 4

Ф(., ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ, " .=»"1. „

10-50

4 (21) 2877856/28-13 (22) 05.02.80 (31) Сl †19 (32) 06.02.79 (33) ЕБ (46) 23. 12.85. Бюл. №- 47 (71) Хиноин Дьедьсер еш Ведьесети

Термекек Дьяра РТ (HU) (72) Иштван Гадо, Антониа Йеккель, Дьердь Свобода, Миклош Яраи, Шандор

Пиукових и Шандор Иштван (HU) (53) 615.779.93 (088.8) (56) Патент США № 3907771, кл. 260-210, 1979.

Патент США ¹ 3956068, кл.196-96, 1979.

Патент США № 3832286, кл.195-80, 1978.

Ф (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СИСОМИЦИНА

И UITAMM MICROMONOSPORA ROSE@ Sl /109ПРОДУЦЕНТ СИСОМИЦИНА. (57) 1. Способ получения сисомицина путем культивирования штамма — продуцента вида Мдсготпопозрога в аэробных условиях в питательной среде, содержащей источники углерода и азота и минеральные соли, с последующим выделением целевого продукта в виде основания из культуральной жидкости, при необходимости очисткой его и переводом в соль, о т л и— ч а ю шийся тем, что, с целью (I9lSU(Ill 1 2ОО 54 А повышения выхода целевого продукта в качестве продуцента используют штамм Micromonospora rosea Sl/109

MNG O0)82 и культивирование проводят в ферментационной питательной среде, содержащей, г/л воды:

Соевая мука 40

Пептон или гидролизат казеина 10

Картофельный или кукурузный крахмал

Глюкоза

Углекислый кальций

Гептагидрат сернокислого магния 2 Гептагидрат сернокислого железа 0,2

Гексагидрат азотнокислого кобальта 0,0008

Пальмовое масло 2.

2. Способ по п.l о т л и ч а юшийся тем, что питательная среда дополнительно содержит декстрин или растворимый крахмал в количестве 20-25 г/л воды.

3.Способ по п.l, о т л и ч а юшийся тем, что сисомицин — основание переводят в сернокислую соль сисомицина.

4.Штамм Micromonospora rosea

SI/109, MNG 00182 (Венгерская национальная коллекция, Будапешт) - продуцент сисомицина.

1200854

45 теля.

Изобретеш е относится к микробиологической промьшшенности, в част ности к производству антибиотиков.

Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта.

Штамм Micromonospora rosea Sl/109.характеризуется следующими признаками.

Культурально-морфологические признаки. Макроскопическое наблюдение IO-дневной культуры, выращенной при 37 С на среде Чапека, показывает удовлетворительное развитие, отсутствие образования воздушного мице— лия, образование выпуклых нормальных круглых оранжево-желтовато-черных колоний, отсутствие растворимого пигмента.

При микроскопическом наблюдении обнаруживаются длинные разветвленные нормальные нити без разделительной перегородки, диаметр 0,5 М, споры круглые до яйцеобразных расположены в простых спорангиях диаметром ! — 1,5М .

Пептон — железо — агар. Рост слабый, цвет грязно-желтый, немного серый; небольной споровый слой; растворимый пигмент отсутствует.

Агар Эмерсона. Рост слабый. !в

2 колоний, оранжевые, светлые, слегка коричневые.

Глюкоза — оранжевый экстракт агар. Рост удовлетворительный, цвет ярко-оранжевый, слегка черный, колонии сильно сморщеные.

Питательный агар. Рост удовлетворительный, цвет колоний ярко-оранжевый, слегка черный.

Агар Чапека. Рост удовлетворительный, цвет ярко- оранжевый, затем черный.

Агар Беннетта. Рост удовлетворительный, цвет слабо-оранжевый, слегка коричневый, образует растворимый пигмент.

Ломтики картофеля (с карбонатом кальция и без него). Рост в следах, цвет оранжевый.

Физико-биохимические признаки. о

Хорошо растет при 28-37 С и не разо вивается при 44 С. Усвоение углеводов проверка на среде, содержащей

0,57 дрожжевого экстракта, 17. источника углерода, 0,17 САСО>, 1,57 агара и дистиллированную воду). Усваивает ксилозу, фруктозу, глюкозу, 5 !

О !

30 сахарозу, крахмал, рибозу; хуже усваивает галактозу, рафинозу, дульцит; плохо усваивает арабинозу, рамноз5, лактозу, ма|пьит, инозит.

Ассимиляция азота 1определение на среде, содержащей 1Е-ную глюкозу, 1,57, агара, дистиллированную воду) .

Хорошо усваивает 0,57 — ный дрожжевой экстракт, 17, †ны N — 7, †ам, посредственно — 17.-ít:té аспарагин, плохо — 17-ную глутаминовую кислоту и 17 ный нитрат аммония.

Желатин, молоко, и крахмал гидрализует. Нитрат в нитрит восстанавливает. Максимальная со евая допус— тимость для натрий хлорида 27.

Пример !. Цо мл, содержащему 10 — 10 клеток штамма 5 1/109, 6 хранившегося при -20 1,, вносят в серию колб емкостью 3000 мл, каждая из которых содержит 800 мл стерильной среды, содержащей триптона (Oxoid) 5 г, соевой муки 10 г, растворимого крахмала 20 г, глюкозы 1 г, карбоната кальция 2 г, водо— проводной воды до !000 мл.

Культивирование проводят при 28 С в течение 3 дн при посто пп|ом перемешивании со скоростью 2бО об/мин. ! ля приготовления инокулята полученную в предыдущей стадии культуру пересеивают в 100 л стерильной среды следующего состава: соевая мука 10 г, панкреатический гидролизат казеина (по сухому весу) 5 г, картофельный крахмал 22 г, глюкоза 10 r, углекислый кальций 2 г, пальмовое масло 2 г, водопроводная вода до 1000 мл рН cpe!«t перед сте— рилизацией 7,0.

Культивирование проводят в течео ние 36-48 ч при 30 С и постоянном перемешивании со скорость|о 400 об/мин и скорости аэрации 1/1 V /V. Пальмовое масло добавляют в качестве пеногаси100 л ферментационной среды следующего состава, г: соевая мука

40, пептон 10, картофельный крахмал 10, декстрин 25, глюкоза 5, углекислый кальций 4, гептагидрат сернокислого Магния 2, гептагидрат сернокислого железа 0,2, гексагидрат азот— нокислого кобальта 0,0008, пальмовое масло 2, водопроводная вода до 1, инокулируют 10 л инокулятора.

Ферментацию проводят при перемешиваСоставитель Г. Смирнова

Редактор Т.Кугрышева Техред А, Бабинец Корректор В.Синицкая

Заказ 7880/63 Тираж 524 Подписное

ВНИИГ!И Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий!

13035, Москва, >Н-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

3 12 нии со скоростью 400 об/мин в течение 1 ч при !21 С, давлении 1,3о

1,4 атм, скорости аэрации 1/1 Ч /Y рН ферментационной среды до стерилизации 8,0; ферментацию ведут в ферментаторе из нержавеющей стали.

Продукция антибиотика начинается с 35-40 ч ферментации и достигает максимума к 110-120 ч. Время окончания ферментации устанавливают турбилиметрическим способом.

В конце ферментации общая активность культуральной жидкости составляет 650 Е/мл в пересчете на стандарт сисомицина (1E соответствует активности 1 мкг стандарта сисомицинового> основания по отношению к стафилококку эпидермидиса; определение проводилось методом диффузии в агар).

Пример 2. Полученный по примеру 1 инокулят в количестве 100 л

3 вносят в 1 м ферментационной среды следующего состава, г: соевая мука 40, панкреатический гидролизат казеина (по сухому весу) 10, кукурузный крахмал 50, глюкоза 5, угле00854 4 кислый кальций 4, гептагидрат сернокислого магния 2, гептагидрат сернокислого железа 0,2, гексагидрат азот нокислого кобальта 0,0008, пальмовое масло 2, водопроводная вода до до 1 л. рН среды перед стерилизацией 8,0.

Стерилизацию среды, перемешивание и аэрацию культуральной жидкости про-! б водят согласно примеру 1.

Общая активность культуральной жидкости составляет 680 Е/мл. 15 г выделенного чистого основания растворяют в 60 мл дистиллированной воды и с помощью 5 н, раствора серной кислоты устанавливают pH = 4,3.

Раствор перемешивают с 1,5 г активированного угля в течение 30 мин и фильтруют через фильтр Зейтуа.

2п Фильтр трижды промывают деионизированной водой по 5 мл и объединенные фильтраты при перемешивании выливают в 1 л метанола. После охлаждения осадок отфильтровывают, промывают труды по 50 мл метанолом и суо, шат в вакууме при 50 С. Получают

22 r сернокислой соли сисомицина.