Способ иммобилизации клеток

 

СПОСОБ ИММОБИЛИЗАЦИИ КЛЕТОК путем смешения клеток с гелем, отличающийся тем, что, с целью удлинения сроков сохранения жизнеспособности клеток млекопитающих, взвесь клеток смешивают с водным раствором, содержащим метилцеллюлозу 0,3 - 1,5%, альгинат натрия 0,2 - 1% и галактан сульфата 0,1 - 0,5%, в соотношении 1 : (1 - 4), затем полученную смесь смешивают с коллагеном, взятым в количестве 0,3 - 1,5% от массы образуемого гелия.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для сохранения клеточных культур и выращивания клеток, нуждающихся в веществах, вырабатываемых другими клетками. Целью изобретения является удлинение сроков сохранения жизнеспособности клеток млекопитающих. П р и м е р 1. Готовят рабочий раствор, содержащий 3% метилцеллюлозы, 2% альгината натрия и 1% галактаната сульфата (карагината) в бидистиллированной воде. Флакон с раствором стерилизуют в автоклаве 30 мин при 0,5 атм. Полученный рабочий раствор смешивают в соотношении 1:1 со взвесью клеток фибробластов мыши, линии ЗТЗ, в концентрации 0,2-1˙10⁵ кл/мл смеси, ресуспендированных в двойной среде Игла, содержащей 20% фетальной сыворотки. Смешивание проводят при 10^оС. К полученной смеси добавляют 3%-ный уксусно-кислый раствор коллагена в конечной концентрации 1,5% в соотношении 1:1 и перемешивают. Гель образуется в течение 10 мин. Полученный гель с заключенными в нем фибробластами помещают в термостат при 37^оС на 7 сут. После такой инкубации наблюдают ограниченное размножение фибробластов и образование микроколоний. Затем на этом гель, содержащий в 1 см³ геля 0,2-0,5˙10⁵ клеток, помещают клетки гепатоцитов, которые культивируют обычным способом. Наблюдается сохранение живых клеток гепатоцитов в течение двух месяцев. Использование иммобилизованных клеток упрощает способ культивирования клеток, нуждающихся в продуктах жизнедеятельности других клеток, и дает возможность получения более чистой культуры. П р и м е р 2. Готовят рабочий раствор, содержащий 0,6% метилцеллюлозы, 0,4% альгината натрия и 0,2% карагината. К этому раствору в соотношении 1:1 добавляют двойную среду Игла, содержащую 30% фетальной сыворотки, в которой ресуспендируют клетки гипофиза крысят в концентрации 2˙10⁵ кл/мл среды. Смесь тщательно перемешивают, добавляют к ней 1% уксусно-кислого коллагена в соотношении 2:1 (концентрация коллагена 0,3%) и вновь перемешивают. Полученные иммобилизованные клетки используют для исследования развития клеток и образования гипофизарной ткани ин витро в трехмерном пространстве. Функционирующие клетки гипофиза наблюдали в течение двух месяцев. П р и м е р 3. Рабочий раствор готовят согласно примера 1, но ингредиенты берут в следующих соотношениях: метилцеллюлоза 0,3% альгинат натрия 0,2% и карагинат 0,1% Этот раствор смешивают в соотношении 4:1 со взвесью клеток Hela и нормальных фибробластов, приготовленной в среде Игла, содержащей 20% фетальной сыворотки, в концентрации 5˙10⁴ клеток каждого вида на 1 мл среды. К 100 мл полученной смеси добавляют 0,5 г порошка коллагена (0,5%) и тщательно перемешивают. Образование геля происходит через 5 мин. Полученный гель с иммобилизованными клетками используют для изучения роста и взаимодействия нормальных и раковых клеток в течение 4 недель. В результате иммобилизации клеток на 3-5 сут 90-100% клеток образуют микроколонии, жизнеспособные в течение 1 мес, по известному способу иммобилизованные клетки теряют жизнеспособность в течение 1-2 сут. Способ иммобилизации может быть использован также для иммобилизации микробных клеток, термочувствительных или чувствительных к полиакриламидному гелю.

Формула изобретения

СПОСОБ ИММОБИЛИЗАЦИИ КЛЕТОК путем смешения клеток с гелем, отличающийся тем, что, с целью удлинения сроков сохранения жизнеспособности клеток млекопитающих, взвесь клеток смешивают с водным раствором, содержащим метилцеллюлозу 0,3 - 1,5%, альгинат натрия 0,2 - 1% и галактан сульфата 0,1 - 0,5%, в соотношении 1 : (1 - 4), затем полученную смесь смешивают с коллагеном, взятым в количестве 0,3 - 1,5% от массы образуемого гелия.