Способ определения противовоспалительной активности

 

Изобретение относится к экспериментальной фармакологии, может быть использовано для скрининга противовоспалительных веществ, обладающих гепатотропной активностью. Цель изобретения - повышение точности способа путем использования в качестве агента, вызывающего воспаление, зимозана и оценки противовоспалительных свойств. Для этого зимозандрожжевой полисахарид из Saccharomyces cerevisiae в 0,85%-ном растворе NaCl вводят подопытным животным (мы , шам) внутривенно после его предварительной гомогенизации. Забой осуществляют путем декапитации через 2,5, 9,15 и 21 сут после введения зимозана - кусочки печени фиксируют в смеси Карнуа, заливают в парафин к делают срезы толщиной 5 мкм, которые окрашивают гематоксилин-зозином. В печени через 2 сут после введения зимозана образуются мононуклеарные инфильтраты , занимающие 3-5% площади среза печени, через 5 сут площадь с инфильтратами - 20-25%, они четко выражены. Пик инфильтрации - на 9-е сут, площадь ее 30-35%, после чего идет обратный процесс. Испытуемый I препарат вводят в живой организм в фармакологической дозе за 2 ч до, (Л через 2 ч после или через 5 сут после введения зимозана. Антивоспалительные свойства вещества оценивают по торможению наступления мононуклеарной инфильтрации в первом и втором случаях и по снижению уровня инфильтрахщи на 6-9 сут в третьем случае.

СС(ОЗ СОЕЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) (51) 4 С 0 N 33 48.I

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3741381/28-14 (22) 2 1.05.84 (46) 23.11.86. Бюл. 9 43 (71) Институт клинической и экспериментальной медицины СО АМН СССР (72) Д.Н.Маянский и B.È.Ùåðáàêoâ (53) 616,36-002(088.8) (56) Чернух А.М..Воспаление. — M.

19?9, с. 381-382. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ (57) Изобретение относится к экспериментальной фармакологии, может бьгть использовано для скриниг(га противовоспалительных веществ, обладающих гепатотропной активностью. Цель изобретения — повышение точности способа путем использования в качестве агента, вызывающего воспаление, зимозана и оценки противовоспалительных свойств. Для этого зимозандрожжевой полисахарид из Saccharomyces cerevisiae в 0,857-ном растворе

NaCI вводят подопытным животным (мы,шам) внутривенно после его предварительной гомогенизации. Забой осуществляют путем декапитации через 2,5, 9,15 и 21 сут после введения зимозана — кусочки печени фикСируют в смеси Карнуа, заливают в парафин и делают срезы толщиной 5 мкм, которые окрашивают гематоксилин-зозином. В печени через 2 сут после введения зи-мозана образуются мононуклеарные инфильтраты, занимающие 3-57 площади среза печени, через 5 сут площадь с инфильтратами — 20-25Х они четко выражены. Пик инфильтрации — на 9-е сут, площадь ее 30-357, после чего идет обратный процесс. Испьггуемый препарат вводят в живой организм в фармакологической дозе за 2 ч до, через 2 ч после или через 5 сут после введения зимозана. Антивоспалительные свойства вещества оценивают по торможению наступления мононуклеарной инфильтрации в первом и втором случаях и по снижению уровня инфильтрации на 6-9 сут в третьем случае.

1 12

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для скрининга противовоспалительных веществ, обладающих гепатотропной активностью.

1(ель изобретения — повышение точности способа для оценки гепатотропных средств за счет использования в качестве агента, вызывающего воспаление, зимозана и оценки противовоспалительных свойств по степени торможения мононуклеарной инфильтрации.

Способ осуществляется следующим образом.

Зимозан — дрожжевой полисахарид

H3 Saccharomyces cerevisiae в дозе от 0,02 до 2 мг в 0,5 мл 0,857-ный

NaCI на мышь линии (СВАхС57В1} Р весом 18-22 г вводят внутривенно после его предварительной гомогениэации. Забой осуществляется путем декапитации через 2,5,9,15 и 21 сут после введения эимозана. Кусочки печени фиксируются в смеси Карнуа, заливаются в парафин, после чего делают срезы толщиной 5 мкм, которые окрашивают гематоксилин-зоэином.

Через 2 сут после внутривенного введения эимоэана в печени образуются мононуклеарные инфильтраты, занимающие 3-57 площади среза печени. Через

5 сут площадь, занимаемая ими, составляет 20-257 площади среза печени.

В это время мононуклеарные инфильтраты четко выражены, имеют очерченные границы. Пик мононуклеарной инфильтрации приходится на 9-е сут, когда площадь, занимаемая мононуклеарными инфильтратами, составляет 30-35Х после чего происходит постепенное обратное развитие процесса. Морфологическая картина, наблюдаемая на срезах печени после введения эимозана, идентична морфологической картине мезенхимально-воспалительного синдрома, развивающегося при вирусном гепатите. Морфометрия площади, занимаемой мононуклеарными инфильтратами, осуществляется по Автандилову Г.Г. в 50 полях зрения.

Испытуемый препарат вводят в живой организм в фармакологической дозе за 2 ч до, через 2 ч после или через 5 сут после введения зимоэана.

Антивоспалительные свойства вещества оценивают по торможению наступления мононуклеарной инфильтрации в первом

72246 3

5

l5

40 и втором случаях и по снижению уровня инфильтрации на 6-9-е сут в третьем случае.

Пример 1. Вопытемышивесом 20 r линии (CBAxC57B1} F внутрибрюшинно вводят стандартный препарат гидрокортизона в дозе 1,25 мг/10 г массы тела, т.е. в среднем на мьппь вводится 2,5 мг гидрокортизона. Через 2 ч вводят эимоэан в дозе

1 мг/10 г массы тела, в среднем 2 мг на мьппь в 0,5 мл 0,857. NaCf. Через

2 сут мышей забивают путем декапитации; забирают кусочки печени, фиксируют в смеси Карнуа, заливают в парафин. Срезы толщиной 5 мкм окрашивают гематоксилин-эозиноми исследуют на наличие мононуклеарных инфильтратов.

В этом случае мононуклеарные инфильтраты не обнаруживаются. Контролем служат мьппи той же линии, которым вместо гидрокортизона вводится

0,857.- NaCf и зимоэан по той же схеме, что и в опыте. В контроле мононуклеарные инфильтраты занимают .

3-5Х площади среза печени. Другой:. контрольной группе мьппей вводят трлько гидрокортизон, в печени инфильтратов не обнаруживают. По отсутствию мононуклеарных инфильтратов в печени у мьппей, получающих зимоэан чеРез

2 ч после введения гидрокортизона, заключают, что гидрокортизон оказывает антивоспалительное действие.

Пример 2. Гидрокортизон, введенный через 2 ч .после введения зимозана, при аналогичных условиях, описанных в примере 1, также оказывает антивоспалительное действие, т.е. мононуклеарные инфильтраты в печени через 2 сут отсутствуют.

Пример 3. Гидрокортизон вводят через 5 сут после введения зимозана, т.е. на фоне выраженной мононуклеарной инфильтрации. Забой животных осуществляют через 1,2,3 и

4 сут после введения гидрокортизона.

В контроле вводят 0,5 мл 0,857-ного

NaC7. через 5 сут после введения эимозана. В опыте введение гидрокортизона приводит к обратному развитию мононуклеарной инфильтрации в первые же сутки после его введения, в то время как в контроле она продолжает нарастать до 9 сут после введения зимозана. По обратному развитию мононуклеарной инфильтрации,.не достигшей своего пика, заключают, что гид1272

Составитель Л.Пашук

Редактор А.Коэориз Техред А.Кравчук . Корректор Е.Сирохман

Заказ 6333/43 Тираж 778 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений.и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическ9е предприятие, r.Ужгород, ул.Проектная, 4 рокортизон оказывает антивоспалительное действие.

Использование предлагаемого способа для скрининга гепатотропных препаратов для оценки их антивоспалительных свойств обеспечивает по сравнению с известным способом для скри.нинга антивоспалительных веществ на модели карагинанового воспаления следующие преимущества: способ более 10 достоверен, так как включенная в способ эимозановая модель обеспечивает развитие воспалительного процесса в печени, ближе воспроизводит реальную ситуацию, развивающуюся при t5 вирусном гепатите, поскольку воспроизводит один из главных морфологических признаков вирусного гепатита, каким является мононуклеарная инфильтрация. Кроме того, предлагае- 20 мый способ прост в исполнении и для

246 4 количественной оценки воспалительного процесса.

Формула изобретения

Способ определения противовоспалительной активности путем введения животным вещества, вызывающего воспаление, с последующим введением испытуемого вещества, взятием пунктата

° очага воспаления и оценкой противовоспалительной активности испытуемого вещества по степени торможения

1клеточнои инфильтрации, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью повышения точности способа для оценки гепатотропных средств, в качестве агента, вызывающего воспаление, используют зимозан, а противовоспалительные свойства оценивают по степени торможения мононуклеарной инфильтрации.