Способ окраски нервной ткани на гистологическом препарате

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к гистохимии, может быть прймеТнено при гистологическом исследовании срезов биологических тканей, содержащих миелиновые волокна. Цель изобретения - прокрашивание клеточных элементов в демиелинизированной ткани -за счет экспонирования биологического материала в растворе бихромата калия в разработанных временных интервалах. Кусочки нервной ткани размером 2,53 ,5 мм фиксируют в 10%-ном растворе формалина 12-48 ч, затем экспо1шруют 45-50 ч в 3%-ном растворе бихромата калия. Кусочки споласкивают в нескольких порциях бихромата калия и помещают на 24-48 ч в 1%-ный раствор осмиевой кислоты на 3%-ном растворе бикромата калия. Затем образцы промывают в течение 12-24 ч в водопро& водной воде. Далее материал в зависимости от задач исследования подвергают резке на замораживающем микротоме либо уплотняют в парафине или целлоидине. Срезы докрашивают толуидиновым синим и исследуют светооптически .

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

nD 4 G 01 N 1/30 А 61 В 1О/00

00ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ шивание клеточных элементов в демиелинизированной ткани за счет экспонирования биологического материала в растворе бихромата калия в разработанных временных интервалах. Кусочки нервной ткани размером 2,53,5 мм фиксируют в 10%-ном растворе формалина 12-48 ч, затем экспонируют

45- 50 ч в 3% — ном растворе бихромата калия. Кусочки споласкивают в нескольких порциях бихромата калия и помещают на 24-48 ч в 1%-ный раствор осмиевой кислоты на 3%-ном растворе бихромата калия. Затем образцы промывают в течение 12-24 ч в водопроводной воде, Далее материал в зави симости от задач исследования подвергают резке на замораживающем микротоме либо уплотняют в парафине или целлоидине. Срезы докранивают толуидиновым синим и исследуют светооптически.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3536152/28-12 (22) 10.01.83 (46) 30.11.86. Бюл. Р 44 (71) Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины АМН

СССР (72) М. Г. Хижняк (53) 616-0.88.8(0.89.9)(088.8) (56) Ромейс Б. Микроскопическая техника. M. ИЛ, 1953, с. 434-440.

Меркулов Г. А. Курс патогистологической техники, Л.: Медицина, 1969, с. 221. (54) СПОСОБ ОКРАСКИ НЕРВНОЙ ТКАНИ НА

ГИСТОЛОГИЧЕСКОМ ПРЕПАРАТЕ (57) Изобретение относится к области медицины, а именно к гистохимии, может быть применено при гистологическом исследовании срезов биологических тканей, содержащих миелиновые волокна. Цель изобретения — прокра„„SU, 1273769 А 1

1 12

Изобретение относится к медицине, а именно к гистохимии, и может найти применение при гистологическом исследовании срезов биологических тканей, содержащих миелиновые волокна.

Целью изобретения является прокрашивание клеточных элементов в демиелинизированной нервной ткани путем экспонирования биологического материала в растворе бихромата калия, в растворе осмиевой кислоты на бихромате калия в разработанных вре.менных интервалах.

Способ осуществляют следующим образом.

Кусочки нервной ткани размером

2,5-3,5 мм фиксируют в 10%-ном растворе формалина в течение 12-48 ч и затем экспонируют в течение 45-50 ч в 3%-ном растворе бихромата калия.

Кусочки споласкивают в нескольких порциях бихромата калия и помещают на 24-48 ч в 1%-ный раствор осмиевой кислоты на 3% — ном растворе бихромата калия °

Затем .образцы промывают в течение

12-24 ч в проточной водопроводной воде.

Далее материал в зависимости от задач исследования либо подвергают резке на замораживающем микротоме, либо уплотняют в парафине или целлоидине. Полученные срезы докрашивают толуидиновым синим и исследуют светооптически.

Пример 1. Образцы нервной ткани от животных с демиелинизирующим заболеванием нервной системы разрезают на кусочки толщиной 3,5 мм, помещают на плотную бумагу с отверстиями (наподобие перфокарты) и опускают в 10%-ный формалин на 24 ч-.

Экспонируют в течение 45 ч в 3%,ном растворе бихромата калия с ежедневной сменой раствора.

Снимают кусочки с плотной бумаги и помещают в 1%-HblfI раствор осмиевой кислоты на 3%-ном растворе бихромата калия на 24 ч в плотно закрытые банки, обернутые темной бумагой. Раствор осмиевой кислоты сливают, образцы помещают в марлю, завязывают и промывают в проточной водопроводной воде в течение 12 ч, Затем материал помещают на 15 мин в дистиллированную воду и подвергают резке на замораживающем микротоме. Толщина получаемых срезов 10-15 мкм, а при резке на криокате - 3 5-5 мкм.

73769

20 Hp и м е р 2. Кусочки нервной ткани размером 2,5 мм обрабатывают аналогично примеру 1, но время экспозиции в растворе бихромата калия

47 ч, а в растворе осмиевой кисло25 ты — 35 .ч. После этого материал обезвоживают этиловым спиртом восходящей крепости (70, 80, 90, 96, 100 ).

Время экспозиции в каждом спирте

1 сут. Затем материал помещают (не

5

Полученные срезы докрашивают на предметном стекле толуидиновым синим, дифференцируют в 96 -ном спирте, просветляют в эвкалиптовом масле, промывают в ксилоле и заключают в бальзам.

Полученные препараты исследуют под микроскопом при максимальных увеличениях с использованием иммерсии.

На препаратах видны ярко-синие ядра гематогенных макрофагов с бледно-голубой цитоплазмой, нейтрофильные гранулоциты, лимфоциты, глиальные клетки среди фрагментов дезинтегрированного миелина в виде отчетливопрослеживаемого черного цвета осмиофильной зернистости. В отдельных клетках хорошо виден фагоцитоз продуктов распада миелина. менее 2 сут) в смесь, состоящую из

40 мг сухого целлоидина, растворенного в 100 мл абсолютного спирта, 100 мл эфира и 200 г касторового масла.

Экспонирование по 45 мин в трех порциях хлороформа. Далее образцы выдерживают в течение не более 12 ч в смеси равных частей парафина и о хлороформа и экспонируют при 56 С в термостате по 1,5 ч в двух порциях парафина с последующей заливкой в парафин.

Парафиновые срезы депарафинируют и докрашивают толуидиновым синим.

На препаратах видны клеточные элементы (гематогенные и глиальные), среди которых локализуются продукты распада миелина.

Пример 3. Кусочки нервной ткани размером 3,5 мм после фиксации и экспонирования в бихромате калия в течение 50 ч, в осмиевой кислоте в течение 48 ч и промывки в проточной водопроводной воде подвергают обезвоживанию в спиртах восходящей крепости: в 70 -ном 1 ч, в 96 -ном о .ь

2 ч, в абсолютном спирте 2,5 ч, в спирт-эфире 1,5 ч. После этого матеФормула изобретения

Составитель M. Позняк

Техред Л.Сердюкова

Корректор С. UIBKMap

Редактор Л, Веселовская

Заказ 6468/39 Тираж 778

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

3 12 риал экспонируют в целлоидинах возрастающей густоты (целлоидины 1, 2, . 3) по 3-5 сут, периодически встряхивая.

Образцы нервной ткани в загустевшем целлоидине заливают в чашки Петри и после его затвердевания наклеивают на деревянные блоки, которые хранят в /О -ном спирте.

Через сутки материал подвергают резке на санном микротоме (толщина среза 4,5-5 мкм) и докрашивают целт лоидиновые срезы толуидиновым синим.

При заливке материала в целлоидин достигается наилучшее качество докрашенных гистологических препаратов: видны ярко окрашенные ядра гематогенных макрофагов и глиальных клеток с блеДно-голубой цитоплазмой и осмиефильная черного цвета, зернистость.

Способ позволяет выявить одновре менно с продуктами распада миелина клеточные элементы (лимфоциты, гематогенные макрофаги, нейтрофилоциты, эозинофилы, олигодендроциты, астроциты и микроглию), что является необходимым для излучения патогенеза демиелинизирующих заболеваний нервной системы.

73769 4

Способ значительно сокращает сро ки диагностики демиелиниэации (при целлоидиновой проводке в 2 раза, при парафиновой в 5 раз, при полу чении замороженных срезов более чем в 10 раз).

Способ может быть использован для изучения патоморфологии различных форм рассеяного склероза, а так10 же при исследовании патологических изменений в нервной системе на экспериментальных моделях профессиональных заболеваний (отравления солями свинца, бария и др.).

Способ окраски нервной ткани на гистологическом препарате путем ее

20 обработки бихроматом калия и осмиевой кислотой с последующей докраской в красителе, отличающийся тем, что, с целью прокрашивания клеточных элементов в демиелиниэирован25 ной нервной ткани, обработку бихромаl том калия проводят в течение 45-50 ч, а в осмиевой кислоте 24-48 ч, при этом докраску проводят толуидиновым синим,