Способ определения повреждения паренхимы печени

 

Изобретение относится к меди- . дине, а именно к способам диагностики тяжести гепатоделлюлярных повреждений при острых и хронических заболеваниях печени, и может применяться в клинической и экспериментальной гепатологии. Целью изобретения является повьшение точности способа. Для измерения ТМФД- и цитохром-с-оксидазной активности забирают кусочек печени и в гомогенизаторе Даунса получают гомогенат в среде сахарозы. ЭДТА и трисбуфера (рН 7,6-7,8). Отношение ткани печени и среды составляет 1:2 масса/объем. Полярографический анализ проводят со стандартным платиновым электродом Кларка закрытого типа. В полярографическую кювету объемом 1,1 мл с трис-НС1-буфером ( с) вносят полученный гомогенат в расчете 1-2 мг белка на данный объем кюветы, записывают скорость потребления кислорода. Аналогичные записи проводят при последовательном добавлении в кювету раствора аскорбата натрия - конечная концентрация 2 мМ, ТМФД и цитохрома-с (конечная концентрация 1 мкМ и 5 мкМ, соответственно ). В полярографической кювете рассчитывают цитохром-с и ТМФД- оксидадную активности на 1 мг белка за вычетом аскорбат - зависимого потребления кислорода. Вычисляют скорость потребления тканью печени кислорода в присутствии ТМФД и цитохрома-с и в присутствии только ТМФД. Рассчитывают отношение этих двух показателей, которое в норме равно 1,9 ед. Если отношение превыгтает значение 1,9 ед., то это свидетельст- / вует о той или иной степени повреждения печени. (ТМФД-тетраметилпарафенилендиамин). о. (Л

союз советснИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН (51) 4 G 01 Л. 33/50.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОЬЮ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3860034/28-14 (22) 27.02.85 (46) 30,01.87.. Бюл. 1Ф 4 (71) Второй Московский государственный медицинский институт им. Н.И.Пирогова (72) 3.Ô.Ìàëþãèí, М.Д.Ахмедов, А.И,Вареница, И.С.Субханкулов, Л.Г.Чичуа, Т.Н,Стеценко и A.Ñ.Ìèòèí (53) 616.07(088.8) (56) К.Orawa. Adaptive response of

the liver mitochondria and its relation to hepatic functional reserve.—

Asian. Med. J., 1980, 23, Ф 7, с. 499-528. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОВРЕЖДЕНИЯ

IIAPEHXHMbl ПЕЧЕНИ (57) Изобретение относится к медицине, а именно к способам диагностики тяжести гепатоцеллюлярных повреждений при острых и хронических забо— леваниях печени, и может применяться в клинической и экспериментальной гепатологии. Целью изобретения является повышение точности способа, Для измерения ТМФД- и цитохром-с-оксидазной активности забирают кусочек

1 печени и в гомогенизаторе Даунса получают гомогенат в среде сахарозы, „„SU„„128?007 А1

ЭДТА и трисбуфера (рН 7, 6-7, 8 ) . Отношение ткани печени и среды составляет l:2 масса/объем. Полярографический анализ проводят со стандартным платиновым электродом Кларка закрытого типа. В полярографическую кювету объемом 1,1 мл с трис-НС1-буфером о (t=37 С) вносят полученный гомогенат в расчете 1-2 мг белка на данный объем кюветы, записывают скорость потребления кислорода. Аналогичные записи проводят при последовательном добавлении в кювету раствора аскорбата натрия — конечная концентрация

2 мМ, ТМФД и цитохрома-с (конечная концентрация 1 мкМ и 5 мкМ, соответственно). В полярографической кюве— те рассчитывают цитохром-с и ТМФДоксидадную активности на 1 мг белка за вычетом аскорбат — зависимого потребления кислорода. Вычисляют скорость потребления тканью печени кислорода в присутствии ТМФД и цитохрома-с и в присутствии только Т1ЮД.

Рассчитывают отношение этих двух показателей, которое в норме равно

1,9 ед. Если отношение превышает значение 1,9 ед,, то это свидетельст вует о той или иной степени повреждения печени, (ТМФД-тетраметилпарафенилендиамин).

1287007 2

Изобретение относится к медицине, а именно к способам диагностики тяжести гепатоцеллюлярных повреждений при острых и хронических заболеваниях печени, и может найти применение в клинической и экспериментальной гепатологии, Целью изобретения является повышение точности способа за счет количественной оценки повреждения ткани на основе определения скорости потребления ею кислорода в присутствии тетраметилпарафенилендиамина (ТМФД) в пробах с добавлением цитохрома-с и без него, с дальнейшим вычислением отношения первого показателя к второму, по величине которого определяют повреждение органа.

Способ осуществляют следующим образом.

Для измерения ТМФД- и цитохром-с-оксидазной активности гомогената печени забирают кусочек органа и в гомогенизаторе Даунса приготовляют гомогенат в среде, состоящей из

0,25 M сахарозы, 2 10 М ЭДТА, 0,01 M трис-НС1-буфера (рН 7,6-7,8).

Отношение ткани печени и среды составляло 1:2 масса/объем. Полярографический анализ проводят со стандартным платиновым электродом. Кларка закрытого типа. В полярографическую кювету объемом 1,1 мл с трис-НС1-буфером (т,=37 С) вносят полученный гомогенат в расчете 1-2 мг белка на данный объем кюветы. После чего записывают скорость потребления кислорода. Аналогичные записи проводят при последовательном добавлении в полярографическую кювету раствора аскорбата натрия — конеч ная концентрация 2 мМ, ТМФД и цитохрома-с (конечная концентрация

1 мкМ и 5 MKM соответственно). В полярографической кювете рассчитывали цирохром-с- и ТМФД-оксидазную активности на 1 мг белка за вычетом аскорбат-зависимого потребления кислорода. В результате анализа вычисляют скорость потребления тканью печени кислорода в присутствии ТМФД и цитохрома-с и в присутствии только одного ТМФД. Далее рассчитывают отношение этих двух показателей, которое в норме равно 1,9 ед., что соответствует 1 9 10 жизнеспособных гепатоцитов, выделенных на 1 r ткани (практически 100 . жизнеспособ ных клеток). Если отношение превы5

10 !

55 шает значение 1,9 ед., то это свидетельствует о той или иной степени повреждения печени, Примеры осуществления способа, Пример l В гомогенате печени крыс, затравленных гепатоторопным ядом СС1 в дозе 0,25 мл/100 г веса тела, измеряли ТМФД- и цитохром-соксидазные активности и их отношение (коэффициент),как это описано выше °

При исследовании через 12 ч после затравки ядом коэффициент составляет 7,2+0,05 ед., а количество жизнеспособных клеток печени в 1 г печени — 0,69 10, т.е. 36 . К

24 ч коэффициент достигает 10,9

40,4 ед. Соответственно этому снижается процент жизнеспособных гепатоцитов до 25 (0,47.10 (жизнеспот собных клеток в 1 r печени).

Пример 2. С целью создания модели механической желтухи у крыс перевязывали общий желчный проток.

Печень подвергали исследованию через

7 дней после операции, как это описано в примере У l . У этих животных коэффициент составлял 9,82+0,03 ед. при этом жизнеспособные гепатоциты составляли 24% (0,46 10 ).

Пример 3. Больная Велиханова Р.К., 41 г., диагноз: желчно-каменная болезнь. Течение заболевания неосложнвнное, жалоб в анамнезе не отмечалось, функциональные печеночные пробы без отклонений от нормы, диагноз установлен на основании рентгенологического обследования, больная оперирована в плановом порядке, Это дало основание принять коэффициент цитохром-с- и ТМФД-оксидазной активности у данной больной за относительную норму. Кусочек ткани печени весом до 1,5-2 г забирали путем краевой клиновидной резекции печени во время оперативного вмешательства.

Коэффициент определяли, как это описано в примере 1. Величина коэффициента составляла 2,5 ед., что соответствовало 95 жизнеспособных клеток.

Предлагаемый способ является высокочувствительным методом количественной оценки степени гепатоцеллюлярных повреждений, его использование позволяет ускорить получение информации о степени вовлечения органа (печени) в патологический процесс: дает возможность с объективных позиций решать вопрос о выборе методов кон!

287007

Составитель И,Емельяненко

Редактор Н. Слободяник Техред JI.Îëåéíèê

Корректор М.Демчик

Эаказ 7708/г5

Тираж 776

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписно е

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 сервативной терапии и хирургического лечения заболеваний п чени и желчных путей, острой печеночной недостаточности, оценить эффективность проводимого лечения, прогнозировать дальнейшее течение заболевания. Данный способ технически легко и быстро (в течение 20 мин) выполним, не требуется использования дорогостоящей аппаратуры, благодаря чему его целесообразно широко испольэовать в условиях клиники и эксперимента.

Формула изобретения

Способ определения повреждения паренхимы печени путем биохимическоro исследования гомогената ткани органа, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа за счет количественной оценки повреждения ткани, определяют скорость потребления ею кислорода в присутствии тетраметилпарафенилендиамина в пробах с добавлением цитохрома-с и без него, далее рассчитывают величину отношения пер— вого показателя к второму и при увеличении этого зна— чения относительно нормы on ределяют повреждение паренхи—

15 мы печени.