Способ определения адгезивной способности холерных вибрионов

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и Может быть использовано для определения патогенности холерных вибрионов. Цель изобретения - ускорение и упрощение способа за счет изменения вида субстрата. Культуру холерного вибриона смешивают с равным объемом взвеси эритроцитов. Затем смесь инкубируют и готовят маз- ;КИ. Мазки фиксируют метиловым спиртом и окрашивают по Романовскому-Гимза или краской Лейп1ма1га. Прикрепившиеся :к эритроцитам вибрионы подсчитьтают :на 100 эритроцитах в разных полях зрения микроскопа. Определяют среднее . количество прилипших вибрионов на один эритроцит. 2

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РШ)УБЛИН (19) (И) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

H А BTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ, НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (46) 30.06.90. Еюл. У 24 (21) 3747766/28-14 (22) 30.05 ° 84 (71) Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Севера и

Дальнего Востока (72) С.Г. Саппо, Л.Я. Урбанович и В.С. Колесник (53) 576.8.093(088 ° 8) (56) Ефремов В.Е. Количественная оценка адгезии, колонизации и энтеротоксигенности холерных вибрионов у интактных и иммунизированных живот. ных. /Автореф. дис.канд., Ленинград, 1982, с. 24.

Авторское свидетельство СССР

В 1084295, кл. С 12 N 1/00, 1982. (5 l ) 5 С 12 N 1/00, С 12 Q 1/02

// (С 12 N 1/Ооу С 12 К 1:63) I (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АДГЕЗИВНОИ

СПОСОБНОСТИ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для определения патогенности холерных вибрионов. Цель изобретения — ускорение и упрощение способа эа счет изменения вида субстрата.

Культуру холерного вибриона смешивают с равным объемом взвеси эритроцитов.

Затем смесь инкубируют и готовят маз .ки. Мазки фиксируют метиловым спиртом и окрашивают по Романовскому-Гимза или краской Лейшмана. Прикрепившиеся к зритроцитам вибрионы подсчитывают на 100 зритроцитах в разных полях зрения микроскопа. Определяют среднее.количество прилипших вибрионов на один зритроцит. . (Составитель Г. Смирнова

Техред А.Кравчук Корректор И.Эрдейи

Редактор Л. Куирякова

Тираж 497 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

1l3035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д, 4/5

Заказ 2146

Проэводственно-полиграфическое предприятие„ г. Ужгород, ул. Проектная, 4

1 130610

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для характеристики патогенности холерных вибрионов.

Целью изобретения является ускоре- 5 ние и упрощение способа за счет из,менения вида субстрата.

Способ осуществляется следующим

I образом.

У кролика берут кровь из сердца, дефибринируют, фильтруют через 4 слоя стерильной марли, центрифугируют при

1000 об/мин в течение,5 мин и дважды в течение 15"20 мин центрифугированием при 2000-3000 об/мин отмывают

0,9%-ным фосфатно-буферным раствором рН 7,2. Полученные эритроциты сохраняют под слоем физиологического раствора при 4 С, >

3-часовую культуру холерного вибриона в 1%-ной пептонной воде в объеме О, 1 мл в лунке полистироловой пластинки смешивают с равным объемом

0„5-1%-ной взвеси эритроцитов с посо ледующей инкубацией смеси при 28-37 С в течение 25-40 мин и приготовлением мазков (по 2 иэ каждой лунки). Мазки фиксируют MPTHJIGBbIM cIIMpToM H течение

5 мин и окрашивают по Романовскому-Гимза краской Лейшмана или прочным зеленым с докраской азуром П.

Мазки просматривают под увеличением микроскопа в 1350 раз (объектив ,х90, масляная иммерсия, окуляр х10 на бинокулярной насадке АУ-12)„ При окраске по Романовскому-Гимза или краской Лейшмана эритроциты — розовые, а холерные вибрионы — синие;

40 при окраске прочным зеленым .эритроциты светло-зеленые, вибрионы — синие. Прикрепившиеся к эритроцитам вибрионы подсчитывают на 100 эритроцитах в разных полях зрения микроскопа.Определяют среднее количество прилипших вибрионов на 1 эритроцпт.

7 2

Пример. Бактериологическую петлю 10-часовой агаровой культуры

Vibrioeltor 563, Ината, засевают в пробирку с 1%-ной пептонной водой и инкубируют ири 37 С в течение Э ч, о

В лунках на полистироловой плас> тинке готовят смесь из равных объемов (по 0,1 мм) 3-часовой культуры вибриона на 1%-ной пептонной воде и

1%-ной взвеси зритроцитов. Пластинку о помещают в термостат при 37 С с периодическим легким покачиванием.Через, 30 мин на предметных стеклах готовят мазки, фиксируют и окрашивают.

Подсчет вибрионов проводят на 50 эритроцитах в мазках, окрашенных прочным зеленым, и на 50 эритроцитах в мазках, окрашенных по РомаиовскомуГимза или краской Лейшмана. Определяют количество ирикрепившихся вибрионов на l зритроцит. Оно составляет

5,4+0,26.

Адгезивная сгособность холерных вибрионов в зависимости от вирулентности колеблется от 2,4+0,1 до .6,0

0,2 (количество вибрионов, прикрепившихся к 1 эритроциту). . Срок ировецения исследования — око-. ло 6 ч (по известным способам — "",.ò i до 10 дней).

Ф р р и у л а и э о б р е т е и и я

Способ определения адгеэивной способности холерных вибрионов, включающий инкубирование исследуемой кульгуры с последующим ириготовлением.микроскопических препаратов и определением адгезивной способности по количеству вибрионов, прикрепившихся к субстрату, о т л и ч а ю щ и и с н тем, что, с целью ускорения ч упрощения способа, исследуемую культуру инкубируют с 0,5-1%-IIîé взвесью зритроциТов кролика, используемых в качеств= субстрата и взятых в равных объемах, в течение 25-40 мин.