Способ получения вакцины против таежного весенне-летнего энцефалита
.,", ф, СОЮЗ COBETCHMX
6" @ =-.=., СОЦИАЛИСТИ 4ЕСНИХ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 28548?5/28-!4 (22) 21.12.79 (31) А 9220/78 (32) 22.12.78 (33) АТ (46) 15.06.87. Бюл. ¹ 22 (71) Иммуно АГ фюр хемиш-медицинише.
Продукте (АТ) (72) Франц Хайнц, Кристиан Кунц, Йоханн Фаума и Отто Шварц (AT) (53) 615.372(088.8) (56) Патент Великобритании ¹ 14 3035,. кл. А5В, 1977.
Авторское свидетельство СССР № 660389, кл. С 12 N 7/04, 1977. (54)(57) 1.ÑÏÎÑÎÁ ПОЛУЧЕНИЛ ВАКЦИНЫ
ПРОТИВ ТАЕЖНОГО ВЕСЕННЕ-ЛЕТНЕГО 3!4ЦЕ.—
ФАЛИТА путем культивирования ьчлруса в культуре ткани эмбриональных клеток птиц, отделения вируссодержащей жидкости центрифугированием с последующим инактивированием, осветлением ее, концентрированием и о-истI Tp>f. что, с целью повьппения чистоты целевого продукта, культивировайие" осуществляют в суспензиях эмбриональ— ных клеток птиц, после осветления перед зональным ультрацентрифугированием вируссодержащую жидкость обрабатывают протамтлнсульфатом, отбирают фракции, обладающие повышенной экстинцией при 260 нм и содержащие частицы с константой седиментации в области 200 S, а разведение фракции осуществляют фосфатным буфером рН 7,6. 2.Способ по и. l, о т л и ч а ю шийся тем, что зональное ультрапентр= фугирование проводят при непре— рывпом центрифугировании с градиентом плотности сахарозы — 50i. 3.Способ по и 1, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью стабилизации целевого продукта, фракции разводят буферным раствором, содержащим О,!!. человеческого альбумина. Составитель Г. Смирнова ТехредЯ,Глущенко Корректор А.Зимокосов Редактор Е.Копча Заказ 3483 Тираж 595 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.. д, 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 3 13181 Полученные согласно предлагаемому способу вакцины отличаются незначительным содержанием протеина, не принимая во внимание добавлеHHbN человеческий альбумин. Ото содержание протеина при равном антигенном действии во много раз, по меньшей иере в 10 раз, меньше, чем в случае применяемых известных препаратов. Пример. Суспензию эмбриональ- 10 ных клеток кур в ТСМ 199 (Г1SSVF культура — среда) инфицируют ТВЛЭ-вирусом. После выдержки в течение 4 сут при 33 С содержащую вирус суспензию собирают и центрифугируют при 3000 г в течение !5 мин при 4 С отделяют клетки. К полученной суспензии вируса прибавляют формалин в таком количестве, чтобы конечное разбавление составля- 20 ло 1:2000, а затем суспензию выдерживают в течение 30 ч при 37 С и 48 ч при комнатной температуре. Затем инактивированную суспензию 25 вируса смешивают с 0,5 мг/л протаминсульфата и смесь выдерживают в течение ночи при 4 С. Образовавшийся осадок отделяют посредством центрифугирования при 10000 г в течение 30 мин при 4 С. Предварительно обработанная предлагаемым способом суспензия представляет собой исходный материал для непрерывного ультрацентрифугирования в градиенте плотности. 35 Суспензию вируса со скоростью потока 3 л/ч пропускают с помощью насоса через центрифугу, в которой в качестВр. сяхарозногo градиента плотности содержится 0-50% сахарозы в фосфатном буферном солевом растворе при рН 7,6. Объем составляет 4,5 л, время центрифугирования — 1,5 ч. После остановки центрифуги содержимое ротора выкачивают и при этом разделяют на 16 фракций по 100 мл. Для каждой от— дельной фракции определяют экстинкцию при 260 нм на спектрофотометре и удельную плотность- на рефрактометре. Пи=.îâûå фракции 10, 11 и 12 с концентрацией сахара около 40% объединяют и разбавляют до 1:10 фосфатным буферным солевым раствором при значении рН 7,6, в котором содержится 0,1% человеческого альбумина. Защитную активность препарата, по.— лученного предлагаемым способом определяют в прямом защитном опыте на мьппах. Предлагаемый исследованию препарат разбавляют (1:3, 1:9, ):27, 1:81, 1:243) и смешивают с 0,2% гидроокиси алюминия, примененной B качестве средства, усиливающего действие препарата. При применении в каждом случае 0,2 мл указаннь1х разбавленных раствопов 2 паза с промежутком в I неделю подкожно иммунизируют по 10 г мышей (весом гримерно по !О г). Через две последующие недели мышей инфици— руют )00-1000 ZI>,, ТВЛЭ-вирусом и ðàñсчитывают защитную дозу 21) по 5о методу Рида и -Мюнха после наблюдения в течение 3 недель. Защитную дозу ZD
