Способ определения простагландинов

 

Изобретение касается аналитической химии, в частности хроматографического анализа простагландинов, и может быть использовано в медицине. биотехнологии, химии. Цель - упрощение анализа и повьппение его точности. Анализ пробы ведут зкстракцией другим растворителем 30-70 мМ раствором 4-бромацетш1бромида в хлористом метилене (объемное соотношение 1:0,42- 0,58) в присутствии хлорида трефениларсония (или фосфония) или бромида тетрапентил-(триоктил или гекснл)- аммония при их концентрации в смеси 0,63-2,5 мМ. Полученную смесь разделяют в колонне, заполненной модифицированным силикагелем в потоке подвижной фазы - смеси органического растворителя и воды (метанол - вода). Детектирование ведут при длине, волны 260 нм. Погрешность определения содержания каждоро из простагландинов до 10%. (Л 00 00 4 СП

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

А1 (19) (111 (511 4 С 01 N 30 04

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCXOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

«"» »

».";

k М »

» Щ

»» .

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3999972/31-04 (22) 02.01.86 (46) 30.08.87. Бюл. ¹ 32 (71) МГУ им. М.В. Ломоносова (72) П.В. Вржещ, С.М. Сералинова, С,Н, Бубенщикова, А.Т. Мевх, С.Д.Варфоломеев, В.К. Каграманова и Л.А.Баратова (53) 543 ° 54.42(088.8) (56) Wilson Т.W. and et. — J. Chromatogr., 1984, v. 306, р,351-357.

Fitzpatrie F.À. — Anal. Chem., 1976, ч. 48, ¹ 3, р.499-502. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОСТАГЛАНДИНОВ (57) Изобретение касается аналитической химии, в частности хроматографического анализа простагландинов, и может быть использовано в медицине, биотехнологии, химии. Цель — упрощение анализа и повышение его точности.

Анализ пробы ведут экстракцией другим растворителем 30-70 мМ раствором

4-бромацетилбромида в хлористом метилене (объемное соотношение 1:0,420,58) в присутствии хлорида трефениларсония (или фосфония) или бромида тетрапентил-(триоктил или гексил)аммония при их концентрации в смеси

0,63-2,5 мМ. Полученную смесь разделяют в колонне, заполненной модифицированным силикагелем в потоке подвижной фазы — смеси органического растворителя и воды (метанол — вода).

Детектирование ведут при длине. волны g

260 нм. Погрешность определения содержания каждого из простагландинов до

10Х.

С:

1 1334075 2

Изобретение относится к аналитической химии, в частности к способам анализа водных растворов физиологически активных соединений кислотной

I) природы — простагландинов — методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, и может быть использовано в медицинской, фармацевтической, химической промышленности и биотехноло- 10 гии.

Цель изобретения — упрощение и повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим образом. 16

К анализируемой пробе, содержащей простагландины в количестве от 30 кг до 100 мкг, прибавляют метанольный раствор тетрафениларсония или фосфония хлорида, или тетрапентил-тетра- 20 гексиламмония бромида, или триоктилметиламмония иодида (ТОМАИ), устанавливая их концентрацию в смеси 0,632,5 мМ, Из полученной смеси простагландины экстрагируют 30-70 MM раст- 26 вором 4-бромфенацилбромида в хлористом метилене. Объемное соотношение анализируемая проба — экстрагент

1:0,58-0,42. Полученный экстракт анализируют на колонке (4,6-250 мм) с сорбентом Ультрасфер-ODS {5 мкм) в потоке подвижной фазы метанол— вода (80:20 об/об) при расходе последней 1 мл/мин. Детектирование при длине волны 260 нм.

Пример 1„К 0,6 мл раствора простагландинов ПГЕ, ПГФ, ПГД

ПГА и ПГБ, растворенных в количестве по 8 мкг каждого в фосфатном или трис-НС1 буфере (50 мМ, рН 8,0), при- 10 бавляют 15 мкл 0,1 M раствора в метиноле тетрафениларсония хлорида (ТФАХ), устанавливая содержание последнего в смеси 1,6 мМ. К полученной смеси прибавляют 0,3 мл,экстрагента„ представ- 45 ляющего собой 50 мИ раствор 4-бромфенацилбромида в хлористом метилене (объемное соотношение анализируемая смесь — экстрагент 1:0,5), смесь встряхивают в течение двух мин, дают смеси расслоиться и 10 мкл органической фазы вводят в жидкостный хроматограф, снабженный колонкой с сорбентом Ультрасфер-ОВЯ зернением 5 мкм.

В качестве подвижной фазы используют смесь метанол — вода (80:20), объемный расход которой равен 1 мл/мин. Время удерживания ПГЕ 16, ПГД 17,5, ПГФ

19,5, ПГА 22,5, ПГБ — 24 мин. Погрешность определения содержания каждого из простагландинов не превышает

107..

Пример 2. К 0,,6 мл раствора

ПГЕ в трис-НС1 буфере (50 мМ, „pH 7) прибавляют растворенный в метаноле

ТФАХ, концентрация которого в полученной смеси составляет 0,63 мМ. Дальнейшее определение проводят аналогично примеру 1 с получением идентичного результата, Пример 3. В анализируемой пробе по примеру 2 концентрация ТФАХ составляет 2,5 мМ. В условиях обработки пробы, аналогичных примеру 1, получен идентичный результат.

Пример 4, В условиях примера 1 анализируют смесь по примеру 2, используя в качестве соединения, дающего органический катион, тетрафенилфосфоний хлорид (ТФФХ), концентрация которого в смеси 0,63 MM. Результат идентичен результатам примера 1.

Пример 5. Проводят анализ простагландинов аналогично примеру 1 с применением ТФФХ при его концентрации 1,6 MM. Результат аналогичен полученному в примере

П р и и е р б. В условиях анализа по примеру 1 концентрация ТФФХ составляет 2,5 MM. Результат аналогичен результатам полученным в примерах 1-5.

Пример ы 7-9. Анализ проводят, используя в качестве растворителя для простагландинов трис-НС1 буфер (50 мИ, рН 9,0), а в качестве вещества, дающего органический катион, тетрапентиламмоний бромид (ТПАБ), устанавливая его концентрацию в растворе или 0,.63, или 1,6, или

2,5 мМ. Во всех случаях результат идентичен полученным в примерах 1-6.

Пример ы 10-12. ПГФ, растBoppHHblH в К-фосфатном буфере {50 мИ, рН 7), определяют в условиях примера

1-9 с применением тетрагексиламмоний бромида (ТГАБ) при его концентрации

0,63, или 1,6, или 2,5 мМ. Результат аналогичен полученному по примеру 1.

П р и и е р ы 13-15, Определение

ПГД, растворенного в К-фосфатном буфере (50 мМ, рН 9,0), проводят в условиях примеров 1-12, используя

ТОМАИ при его концентрации в смеси

0,63, или 1,6, или ",.5 мМ. Результат аналогичен полученному в примере

1334075

Составитель С. Хованская

Техред Л.Сердюкова

Редактор А. Огар

Корректор А. Тяско

Тираж 776

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 3958/42

Подписное

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Пример ы 16-25. В условиях примера 1 определение проводят с при менением или ТФАХ, или ТФФХ, или ТПАБ или ТГАБ, или ТОМАИ при их концентрации в смеси 0,3 или 5 мМ (запредельные значения). Ошибка определения простагландинов превышает 107..

Пример 26. Определение простагландинов проводят в условиях примера 1 при концентрации раствора 4бромфенацилбромида- в хлористом метилене 30 мМ. Результат идентичен полученным в примерах 1-15.

Пример 27. В условиях анализа по примеру 1 и аналогичном составе анализируемой смеси концентрация 4-бромфенацилбромида в хлористом метилене равна 70 мМ. Результат идентичен полученным в примерах 1-15,26.

Пример ы 28-29. В условиях примеров 1-15 определение ПГА про2 водят при концентрации раствора 4бромфенацилбромида 20 или 100 мМ (запредельные значения). Ошибка определения превышает 10Х.

Пример ы 30-33. В условиях примеров 1-15 и проб аналогичного состава проводят определение простагландинов, используя в качестве растворителя для 4-бромфенацилбромида или хлороформ, или тетрахлорид углерода, или этилацетат, или гексан. В ходе анализа простагландины не определены.

Пример ы 34-35. Анализ проводят аналогично примерам 1-15 при соотношении анализируемая проба экстрагент 1:0,58 или 1:0,42. Результаты аналогичны полученным в примерах

1- I 5 26.

Пример ы 36-37. Анализ проводят аналогично примерам 1-15 при соотношении анализируемая проба экстрагент 1:0,17 или 1: 1,7. Ошибка определения превышает 107..

Формула изобретения

Способ определения простагландинов путем экстрагирования определя- емых вещаств из анализируемой пробы органическим растворителем с последую. щей обработкой экстракта химическим реагентом и разделением полученной смеси на колонке, заполненной химически модифицированным силикагелем в потоке подвижной фазы, смеси органического растворителя и воды, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью упрощения и повышения точности спо2 соба, в качестве экстрагента используют 30-70 мМ раствор 4-бромфенацетилбромида в хлористом метилене при объемном соотношении анализируемой пробы к экстрагенту, равном 1:0,4230 0,58, экстракцию проводят в присутствии хлорида тетрафениларсония, или хлорида трифенилфосфония, или бромида тетрапентиламмония, или бромида гексиламмония,или иодида триоктилме35 тиламмония при их концентрации в смеси, равной 0,63-2,5 мМ.