Способ выявления кровеносных сосудов матки на гистологическом препарате

 

Изобретение относится к области медицины, точнее к гистологии. Цель изобретения - повьшение качества окраски путем более полного выявления волокнистых структур стенки сосудов. Для этого материал фиксируют в 4%-ном р-ре нейтрального формалина, приготовленного на изотоническом р-ре NaCl, при 4-8°С не менее суток. Срезы замороженного материала несколько раз промывают в дистиллированной воде, инкубируют их 30-120 мин в термостате при 37 С в среде, содержащей глицериновый буфер Зеренсена 1 М концентрации, рН 12,0, дистиллированную воду, 0,1 М р-р уксуснокислого кальция, 0,1 М р-р двунатриевой соли аденозин-5-трифосфорной кислоты, смесь фильтруют. После инкубации и промьшки двухкратно срезов в дистиллированной воде их на 30-45 мин при 37°С переносят в следующ то среду: 2%-ный р-р азотнокислого свинца. 1 М р-р уксуснокислого натрия, 1 М ацетатный буфер, рН 6.2. После двухкратного промывания в дистиллированной воде срезы помещают на 2-5 мин в р-р уксусной кислоты и затем двухкратно промывают их в дистиллированной воде. Затем срезы переносят в 3%-ный р-р сернистого натрия с последующей многократной промывкой дистиллированной водой. Клеточные элементы сосудистой стенки окрашиваются в нежно-желтый цвет, границы эндотелиоцитов - в темно-коричневый. Обработка р-ром уксусной кислоты ведется для дифференцировки с целью устранения окраски несосудистых структур и повьпцения контраста препарата , ( (Л 00 ел 01 00 ю ел

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) ВСГ(<:-1(1Щ; щ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3627648/28-14 (22) 29.07.83 (46) 30. l1.87, Бюл. Р 44 (71) Витебский государственный медицинский институт (72) П,Ф.Степанов, А.Г.Сапожников, Б.С.Базеко и В.Г.Сапожников (53) 616-0.88.8(088.8) (56) Чилингарян А.М. Кальций-аденаэинтрифосфатный метоц безынъекционного выявления интраорганного микроциркуляторного русла. — Журнал экспериментальной и клинической медицины, 1977, 17, 5, 19 28. (54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ КРОВЕНОСНЫХ

СОСУДОВ МАТКИ НА ГИСТОЛОГИЧЕСКОМ

ПРЕПАРАТЕ (57) Изобретение относится к области медицины, точнее к гистологии. Цель изобретения — повышение качества окраски путем более полного выявления волокнистых структур стенки сосудов.

Для этого материал фиксируют в 4Х-ном р-ре нейтрального формалина, приготовленного на изотоническом р-ре

NaC1 при 4-8 С не менее суток. Срезы замороженного материала несколько раз промывают в дистиллированной (51) 4 С О1 N 1/28 А 61 В 10/00 воде, инкубируют их 30-120 мин в тер"о мостате при 37 С в среде, содержащей глицериновый буфер Зеренсена 1 M концентрации, рН 12,0, дистиллированную воду, 0,1 M р-р уксуснокислого кальция, 0,1 М р-р двунатриевой соли аденозин-5-трифосфорной кислоты, смесь фильтруют. После инкубации и промывки двухкратно срезов в дистиллированной воде их на 30-45 мин при

37 С переносят в следующую среду:

2Х-ный р-р азотнокислого свинца.

1 М р-р уксуснокислого натрия, 1 M ацетатный буфер, рН 6.2. После двухкратного промывания в дистиллированной воде срезы помещают на 2-5 мин в р-р уксусной кислоты и затем двухкратно промывают их в дистиллированной воде. Затем срезы переносят в

ЗЖ-ный р-р сернистого натрия с последующей многократной промывкой дистиллированной водой. Клеточные элементы сосудистой стенки окрашиваются в нежно-желтый цвет, границы эндотелиоцитов — в темно-коричневый.

Обработка р-ром уксусной кислоты ведется для дифференцировки с целью устранения окраски несосудистых структур и повышения контраста препарата.

1355895

ВНИИПИ Заказ 5787/38 ираж 776

Подписное

Ф

Произв.-полигр. пр-тие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение относится к медицине а именно к гистологии.

Цель изобретения — повышение качества окраски за счет более полного выявления волокнистых структур стенки сосудов.

Способ осуществляют следующим образом.

Материал фиксируют в 4%-ном растворе нейтрального формалина, приготовленного на изотоническом растворе хлористого натрия, в холодильнике при

4-8 С не менее 24 ч.

Материал замораживают и режут на срезы толщиной 10-15 мкм, Срезы промывают в нескольких сменах дистиллированной воды от 3 до 24 ч, затем инкубируют их в течение 30-120 мин в термостате при 37 С в среде следующего состава: к 2 мл глицинового буфера Зеренсена 1 М концентрации рН 12,0 добавляют 5 мл дистиллированной воды, к полученному раствору приливают 2 мл 0,1 М раствора уксуснокислого кальция, потом

1 мл 0,1 М концентрации свежеприготовленного раствора двунатриевой соли аденозин-5-трифосфорной кислоты, Полученную смесь фильтруют.

После инкубации срезы промывают в двух сменах дистиллированной воды по 5 мин в каждой, переносят их на .О, 30-45 мин при 37 С в среду следующего состава: к 100 мл 2%-ного раствора азотнокислого свинца добавляют 10 мл

1 М раствора уксуснокислого натрия и 10 мл 1 M ацетатного буфера, рН

6,2. Срезы промывают в двух сменах дистиллированной воды по 5 мин в каждой, переносят на 0,5-2 ч в 20 -ный раствор уксуснокислого натрия, затем их промывают в двух сменах дистиллированной воды по 3 мин в каждой, помещают на 2-5 мин в

2,5 -ный раствор уксусной кислоты и промывают их в двух сменах дистиллированной воды по 3 мин в каждой.

Затем срезы переносят в 3%-ный раствор сернистого натрия на 5-30 с (до пожелтения среза), промывают в нескольких сменах дистиллированной воды в течение 1-3 ч. Возможна докраска срезов гематоксилин-эозином с последующим заключением в бальзам-полистирол по известной в гистологии схеме.

Клеточные элементы сосудистой стенки окрашиваются в нежно-желтый цвет, границы эндотелиоцитов — в темно-коричневый. Другие структуры ткани и сосудистой стенки окрашиваются гематоксилин-эозином как обычно

Возможность более тонкого выявле-ния внутриклеточных структур достигается введением в состав субстратов азотнокислого свинца и уксуснокисло15 ro натрия, обеспечивающих окраску базальных мембран эндотелиоцитов.

Обработка раствором уксусной кис-лоты применяется для дифференцировки с целью устранения окраски несосудистых структур и повышения контраста препарата.

Формула из обретения

Способ выявления кровеносных сосудов матки на гистологическом препарате путем фиксации в 4 -ном растворе формалина, приготовлении срезов, 30 их инкубации с растворами ЛТФ, обработки в среде, содержащей соли свинца, с последующей дополнительной обработкой в растворах с сернистым натрием и доокраской в красителе, З5 отличающийся тем, что, с целью повышения качества окраски за счет более полного выявления волокнистых структур стенки сосудов, о фиксацию проводят при 4-8 С, при

40 этом растворы фиксатора готовят на изотоническом растворе, а в качестве соли свинца применяют азотнокислый свинец, нри этом среда дополнительно содержит 1 М раствор уксуснокислого

45 натрия и 1 М ацетатный буфер, рН

5,4-6,2, при соотношении азотнокислого свинца, уксуснокислого натрия и ацетатного,буфера 10 : 1 : 11и далее перед обработкой в растворе сернистого натрия препараты помещают в

20%-ный раствор уксуснокислого натрия на 0,5-2 ч и 2,5 -ный раствор уксусной кислоты на 2-5 мин.