Способ гистохимического определения сульфгидрильных групп в биологической ткани

 

Изобретение относится к .медицине, точнее - к гисто.химии для определения сульфгидрильных групп в биологических тканях. Цель изобретения - повьипение точности способа за счет более полного окрашивания мито.хондрин и ядер клеток. Для этого, осуидествляя гистохимическое определение сульфгидрильных групп в биологических тканя.х (печени, коже, мышцах), органы фиксируют в 80%-ном этиловом спирте , содержаш.ем 1%-ную трихлоруксусную кислоту в соотношении 1:1, за.мораживают с помощью углекислоты или хлорэтила. Затем срезы окрашивают формаланатом ртути в течение 6-10 ч прн 50-56 С и рН 3,5-6,0. Структуры, содержащие SH- группы, выявляются в виде разрозненных редких грану, (|мыбок) темного орйнжевожелтого цвета в срезах мышц и гранул светлого оранжево-желтого цвета, гуще распределенных в срезах кожи и печени. U5 СО ел ел

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н A BTQPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3875802/28-14 (22) 01.04.85 (46) 071287. Бюл. ¹ -15 (71) Свердловский научно-исследовательский институт курортологии и физиотерапии (72) 3 . М. Жернакова. Е. В. Понизовская и Л. П. Добролюбова, Л. Ф. Дубинина и Ю. А. Седов (53) 616-0.89.9 (088.8) (56) Пирс 3. Гистохимия. Мл Иностранная литература, !962, 98, 720. (54) СПОСОБ ГИСТОХИМИЧЕСКОГО

ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУЛЬФГИДРИЛЬНЫХ

ГРУПГ1 В БИОЛОГИЧЕСКОЙ ТКАНИ (57) Изобретение относится к медицине, точнее — к гистохимии для определения сульфгидрильных групп в биологических

„„SU„„1357757 А1 (5и 4 G 01 ) !!28,? 6! В 10,/00 гканях. Цель изобретения — повышение точности спосооа за счег более полного окрашивания митохондрий и ядер клеток.

Для этого, осуществляя гистохим. ческое определение сульфгидрильных групп в биологических тканях (печени, коже, мышцах), органы фиксируют в 80% ном этиловом спирте, содержашем 1%-ную трихлоруксусную кислоту B соотношении 1:1, замораживают с помощью углекислоты или хлорэтила.

Затем срезы окрашивают формаллнатом ртути в течение 6 — 10 ч при 50 — 56 С и рН 3,5 — 6,0. Структуры, содсржагц iе SHгруппы, выявляются в Bl>де разрозненных редких гранул (глыбок) темного оранжевожелтого цвета в срезах мышц и гранул светлого оранжево-желтого цвета. i óгцс распределенных в срезах кожи и нече ни

1357757

Фор.>1ула «зооретвния

30 с оста>>атель М. Позняк

Редактор В. Данко !скреб И. Берсс Коррек1ор В. Гирняк

Заказ 5504 140 1 яра>к 776 !!отписное

ВИИИПИ Гос> иарствсииоьи> ко3«<тета СДД:Р гк> «с Iû3> Ifçoáðåòcíèé и OTIilTIIll

113035, Москва, Ж, 35, I>ayillci< Iiao., >ь 4, 5

I II>oliI3I3o,IcTI3< .IIIIo-IIo>III1 р<и!>иисcI ис, и. > rioJ,, 3 »l. I If>ocктиая, 4

Изобретение относится к медицине, в частности к п1стохимии для определения сульфгидри 11 kik>kx групп в биологических гканях.

Целью изобретения является повышение точности способа за счет болес полного окра шива ния митохондрий и ядер клеток.

Орилер I. Осуществляя гистохимическое определение сульфгидрильных групп в оиологическпх тканях (печени, коже, мышцах).

Для этого органы фиксируioT в 80% ío>1 этиловом спирте, содер>кащем 1%-ную трихлоруксусную кис,1оту в cooTHolilcHHH !:1, замораживают с помощью углекислоты илп хлорэтила.

Полученные срезы ткани толщиной 8 ! 0 мкм помещают в кювету с водно-этанольным окрашиваюlöèм раствором комплекса 1- (хнноксалил-2 ) -3-метил-5- (n-карбоксифенил)-формазана с ртутью, который готовят смешиванием спиртового раствора фор%1333H3 концентрации 10 мо, lb/,l H 13OJkiOI O раствора llliTp3! ртути концентрации

10 моль/л, рН 3,5. Выдерживают в термостате при 53 С в течение 6 ч. Промывают срезы в дистиллированной воде (т=2 мин)

96 -1гом, спирте (т=2 мин), просветляют в ксилоле (T=2 мин), заключают в бальзам.

Структуры, содержащие SH-группы, выявляются в виде разрозненных редких гранул (глыбок) темш>го оранжево-же,п ого цвета в срезах мышц и светлого ораня<ево-желтого цвета, гуще распределенных в срезах кожи и печени.

>з,ля проверки специфичности реакции (блокирование SH-групп) контрольные срезы предварительно обрабатывают раствором сулемы концентрации 10 - моль7л в гечение 2 ч при 53 С, рН 7, затем выдер>кивают в окрашивающем растворе ртутьорганического комплекса в тех же условиях. Реакция специфична, так как блокиро1занные SH-группы после ооработки в окрашиьаю1цем растворе ртутьорганического комплекс нс приобретают желто-оранжевуlо окраску, прпсу1цую выявленным сульфгидрильным группам, /7р«.14ер 2.,14ля осуществления гистохим1гческого olipe1eления сульфгидрильных, групп в депарафинированных срезах ткани предварительно фиксируют органы неитра»»HI I>i 10%-ным формалином или .80%ным эти.1овым спиртом в соотношении 1:1.

Затем за IHHaloT органы в парафин, готовят срезы тол1циной 5 — 7 мкм, депарафпнирх ют и промыва1от этпловым спиртом, дистил и ро1занной водой. Срезы ткани помек

ILlclIoT i3 кювету с водно-этанольным раствором комплекса 1-(хиноксалил-2 ) -3-метил-5- (и-карбоксифенил) -формазана с ртутью.

Устанавливали рН 6, Г= 56 С, время вы-!

5 держкп в растворе т= 7 ч. Затем промывают в дистиллированной воде (т=2 мин).

96" -IIo l спирте (т=2 мин), просветляют в

KcIIлоле, закл1очают в бальзам.

Структуры, содержащие SH-группы, выявляются в виде редких гранул темного оранжево-желтого цвета в срезах мышц и светлого оранжево-желтого цвета в срезах печени и кожи. На контрольных срезах проверяют сцепифичность реакции, выдерживая срезы после блокировки SH-группы 13 окра1пивающем растворе ртутьорганнческого комплекса при рН 6, Г= 56=С в течение т= — 7 час.

Способ гистохимического определения сульфгидрильных групп в биологической ткани путем фиксации в растворе трихлоруксусной кислоты с последующим окрашиванием в красителе, ог>1ича>ошийся тем, 35 что, с целью повышения тоности способа

:33 счет более полного окрашивания митохондрий и яд p клеток, фиксатор дополнительно содержит 80-ный этиловый спирт нри соотношении спирта и трихлоруксусной

Kислоты 1: 1, а в качеcTВc красителя при <мев

;1яют растворы формазаната ртути с рН

3.5 — 6,0, lip H этом окра ш и ванне проводят в течение 6 — 10 ч при 50 --56=С.