Устройство для вертикального электрофореза высокомолекулярных соединений

 

Изобретение относится к лабораторной технике, используемой в биологии и медицине для электрофоретического разделения сложных высокомолекулярных соединений. Цель изобретения - повьшение качества разделения высокомолекулярных соединений. Цель изобре ..тения достигается одновременным охлаждением верхнего буферного раство-г ра и пластин геля, а также стабилизацией значений рН верхнего буферного раствора. В предлагаемом устройстве верхний сосуд для буферного раствора . помещен в корпус блока охлаждения на вертикальную перегородку таким образом , что хладагент циркулирует в промежуточном объеме между верхним сосудом для электродного буферного раствора и стенками гелевых камер. При проведении длительного электрофоретического разделения молекул с низкой скоростью миграции, а также при высоковольтном электрофорезе электрод верхнего электродного сосуда помещен в буферный рэствор емкости, вводимой дополнительно в сосуд для верхнего электродного буферного раствора. Это позволяет стабилизировать значения . рН верхнего электродного буферного сосуда. Изобретение позволяет предотвратить искривление фронта электрофоретического разделения высокомолекулярньпс соединений, улучшить четкость полос электрофореграмм и сохранить биологическую активность термолабильных молекул. 1 з.п. ф-лы, 3 ил. § (Л со 00 со ;о

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (sl) 4 С 01 N 27/26

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АBTOPCKOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

««« /

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3998488/31-25 (22) .1 О. 11. 85 (4 ) 23.03.88. Бюл. 1«1« 11 (71) Киргизский научно-исследовательский институт кардиологии и Особое конструкторское бюро Института космических исследований АН СССР (72) А.И.Ибраимов, А.А.Зиновьев и Т.И.Курманалиев (53) 543.257(088.8) (56) Маурер Г. Диск-электрофорез.

M.: Мир, 1971, с. 50-51.

Авторское свидетельство СССР

У 989438, кл. G 01 N 27/26, 1979. (54) УСТРОЙСТВО ДЛЯ ВЕРТИКАЛЬНОГО

ЭЛЕКТРОФОРЕЗА ВЫСОКОМОЛЕКУЛЯР1ИХ СОЕДИНЕНИЙ (57) Изобретение относится к лабораторной технике, используемой в биологии и медицине для электрофоретического разделения сложных высокомолекулярных соединений. Цель изобретения— повышение качества разделения высокомолекулярных соединений. Цель изобре..тения достигается одновременным охлаждением верхнего буферного раство-. ра и пластин геля, а также стабилиза" цией значений рН верхнего буферного раствора. В предлагаемомустройстве верхний сосуддля буферногораствора, помещен в корпус блока охлаждения на вертикальную перегородку таким образом, что хладагент циркулирует в промежуточном объеме между верхним сосудом для электродного буферного раствора и стенками гелевых камер. При проведении длительного электрофоретического разделения молекул с низкой скоростью миграции, а также при высоковольтном электрофорезе электрод верхнего электродного сосуда. помещен в буферный раствор емкости, вводимой допслнительно в сосуд для верхнего электродного буферного раствора. Это позволяет стабилизировать значения рН верхнего электродного буферного сосуда. Изобретение позволяет предотвратить искривление фронта электрофоретического разделения высокомолекулярных соединений, улучшить четкость полос электрофореграмм и сохранить биологическую активность термолабильных молекул. 1 з.п. ф-лы, 3 ил.

1383191

Изобретение относится к лабораторной технике, в частности к устройствам для электрофореза на вертикальной пластине геля, и может быть использовано в биологии и медицине.

Цель изобретения — повышение качества разделения высокомолекулярных соединений за счет. предотвращения искривления фронта электрофоретического разделения высокомолекулярных соединений, улучшения четкости полос электрофореграмм, сохранения биологической активности термолабильных мо-. лекул и стабилизации значений рН верх-15 него электродного буферного раствора.

На фиг.1 изображено устройство для вертикального электрофореза высокомолекулярных соединений, общий вид; 20 на фиг.2 — разрез А-А на фиг.1; на фиг.3 — разрез Б-Б на фиг.1.

Устройство содержит нижний сосуд

1 для буферного раствора, выполненный в виде прямоугольной камеры с 25 крышкой 2 и токовводом 3, в которой на подставках 4 установлена внутренняя часть 5, состоящая из верхнего сосуда 6 для буферного раствора и геле вых камер 7 с блоком 8 охлаждения. ЗО

Верхний сосуд 6 для буферного раствора помещен внутри корпуса блока 9 охлаждения. Дно верхнего сосуда для буферного раствора соединено с дном корпуса 9 вертикальной перегородкой

10., которая разделяет камеру охлаждения на две полости 11, сообщающие-ся между собой полостью 12 в промежутке торцовой стенки корпуса блока

9 охлаждения. Для ввода и вывода 4О хладагента в полости 11 имеются штуцера 13. Боковые стенки 14 блока охлаждения, выполненные из стекла, служат внутренними стенками гелевым камерам 7.

Наружные стенки 15 гелевых камер могут быть выполнены как из стекла, так и из плексигласа. Они имеют горизонтальные щелевые отверстия 16, закрытые во время работы планками

17 с помощью прижимного приспособле50 ния 18, выполненного в виде планки с прижимными винтами 19.

Прокладка 20 задает толщину геле- вым камерам.

Наружные стенки гелевых камер для прочности снабжены планками 21, поджимаемыми с помощью, например, винтов 22.

Устройство снабжено дополнительно емкостью 23 для буферного раствора, выполненной в виде прямоугольного сосуда. Емкость 23 вводится в верхний сосуд для буферного раствора (при необходимости) и делит его на две части (фиг.3). Платиновые электроды

24 помещены на дне верхнего сосуда для буферного раствора или емкости

23 и в углублении 25 корпуса 9. Для осуществления электрического контакта с буферным раствором в емкости 23 и буферным раствором верхнего сосуда 6 имеются мостики 26 из фильтровальной бумаги.

Устройство работает следующим образом.

В зависимости от способа Формирования стартовых лунок в гелях (спомощью прорезания или полимеризации) применяются разные наружные съемные стенки 15. При формировании стартовых щелей с помощью прорезания геля (фиг.2) применяют наружные съемные боковые стенки 15 с горизонтальным щелевым отверстием 16, закрывающимся планкой 17. B таком случае гелеобразующая смесь заливается в вертикальные гелевые камеры 7 до уровня верхнего края выступа и полимеризуется.

Если необходимо исследовать материал в полиакриламидном геле с различными градиентами пористости, гелеобразующая смесь заливается в вертикальные гелевые камеры 7 на 0,5-1,0 см ниже уровня окна горизонтального щелевого отверстия 16 с последующим наслоением воды на поверхность гелеобразующей смеси. После полимеризации сепарирующего геля гелеобразующая смесь, формирующая концентрирующий гель, заливается до уровня верхнего края выступа.

Внесение материала для анализа проводится через горизонтальное щелевое отверстие 16. В сформированные стартовые щели (с помощью стальных . или тефлоновых ножей) вносят одинаковые по размерам кусочки бумаги, например, типа ватман 3 К"1, пропитанные исследуемым материалом. Для визуальной оценки процесса электрофоретического разделения в стартовые щели помещают кусочки бумаги,. смоченные индикаторным красителем, например бромфеноловым синим. После закрытия щелевого отверстия 16 планкой 17 с прижимным устройством 18 внутрен! 383! 9! ний сборный блок 5 помещают на подставки 4 нижнего сосуда для буферного раствора. Заливают буферные растворы в соответствующие сосуды, к штуцерам 13 присоединяют шланги для подачи и отвода хладагента, а токопровод соединяют с источником питания (не показан).

Для ввода исследуемого материала через верхний край геля (фиг.3) применяют сборные наружные боковые стенки, состоящие из стекла, прокладки

20 с прорезями для крепящих болтов и прижимной планки 21. Последовательность формирования геля такая же, как и при применении наружных стенок из плексигнала с горизонтальными щелевыми отверстиями. B гелеобразующую смесь, образующую концентрирующий гель, погружают гребенки, формирующие стартовые лунки для внесения исследуемого материала. После полимеризации. концентрирующего геля "гребенки удаляются, и исследуемые материалы, смешанные с сахарозой в известных соотношениях, вносятся в сформированные стартовые лунки с помощью специальных шприцов или пипеток через слой буферного раствора. Для визуальной оценки электрофоретического процесса в стартовые лунки таким же образом вносится индикаторный краситель.

Режим электрофоретического разделения высокомолекулярных биологических соединений зависит от вида используемого геля и характера исследуемого материала. После окончания электрофореза отключают источник питания, прекращают подачу хладагента, выливают буферный раствор из верхнего резервуара 5 и удаляют наружные съемные стенки 15. Пластины геля вынимают и подвергают дальнейшей обработке в зависимости от цели и задачи исследования по известным методикам.

Предлагаемое устройство предотвращает искривление фронта электрофоретического разделения высокомолекулярных соединений, улучшает четкость полос электрофореграмм и сохраняет биологическую активность термолабильных молекул (например, белков и ферментов) в таких гелях, как полиакриламидный, крахмальный и агарозный, и дает возможность одновременного разделения катионных и анионных компонентов исследуемого материала.

Предлагаемое устройство может найти широкое применение в биологии и медицине.

20 формула изобретения

1. Устройство для вертикального электрофореза высокомолекулярных соединений, содержащее верхний и нижний сосуды для буферного раствора с электродами, сообщающиеся с ними две вертикальные гелевые камеры с горизонтальными щелевыми отверстиями и блок

3р охлаждения с входными и выходными отверстиями, о т л и ч а ю щ е е с я тем, что, с целью повышения качества разделения высокомолекулярных соединений, верхний сосуд для буферного

35 раствора расположен в блоке охлаждения с опорой на вертикальную перегородку, разделяющую блок охлаждения на две полости.

2. Устройство по и.1, о т л и—

40 ч а ю щ е е с я тем, что верхний электродный буферный сосуд содержит дополнительную емкость для буферного раствора, в которой размещен электрод.

1383191! 38 3191 9