Питательная среда для хранения бактериальных продуцентов пектолитических ферментов

 

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

1Ç 3846 А1 (51)4 С 12 m 1/го//(С 12 И 1/20, С 12 R 1;О1) ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ а

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ11 „"" е " с

Н А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ТЕ(21 ) 3895006/28-1 3 (22) 17.05.85 (46) 07 ° 05,88. Бюл.У 17 (71) .Всесоюзный научно-исследовательский биотехнический институт (72) Т.Е.Смирнова, Г.Б.Бравова, Н,М.Макарова, Ю.А.Брюханова, Л.Н.Мирошник и О.В.Бражникова (53) 577.15(088.8) (56) Теппер Е.З., Шильникова В.К., Переверзева Г.И, 11рактикум по микробиологии. М.: Колос, 1979. (54) ПИТАТЕЛЪНАЯ СРЕДА ДЛЯ ХРАНЕНИЯ

БАКТЕРИАЛЬНЫХ ПРОДУЦЕНТОВ ПЕКТОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ (57) Изобретение относится к ферментной отрасли микробиологической промьппленности и может быть использовано при производстве пектолитических ферментных препаратов. С целью повышения биосинтетической способности бактериальных продуцентов пектолитических ферментов предложенная среда содержит в качестве источника углерода, азота, биологически активных веществ и индуктора синтеза фермеНтов пектолитического комплекса фильтрат продуктов деградации пектина свекловичного жома при следующем соотноше нии ингредиентов, г/л: фильтрат продуктов щелочной деградации пектина свекловичного жома 400-800, агар

20-25, водопроводная вода остальное.

Преимушество предложенной среды заключается в увеличении биоситетичес-.. кой способности бактериальных продуф центов в процессе хранения на 20-ЗОБ и снижении ее себестоииости и 3,7 ре- (Д за по сравнению с известной средой.

2 табл.

139384б

Остальное жома

Агар

Водопроводная вода рН естественный.

Пример 2. Указанные бактериальные продуценты пектолитических ферментов хранили в течение срока

Изобретение относится к ферментной отрасли микробиологической промышленности. и может быть использованс при производстве пектолитических 5 ферментных препаратов.

Цель изобретения — повышение биосинтетической способности продуцентов пектолитических ферментов.

Сущность изобретения заключается в том, что предлагаемая питательная среда в качестве источника углерода, азота, биологически активных веществ и как индуктор синтеза ферментов ( пектолитического комплекса содержит фильтрат продуктов щелочной,цеградации пектина свекловичного жома при следующем соотношении ингредиентов, г/л -.

Фильтрат продуктов 20 щелочной деградации пектина свекловичного жома 400-800

Агар 20-25

Водопроводная вода Остальное 25 рН среды 7,1-7,3.

Способ ее приготовления заключает, ся в измельчении субстрата, перемешивании его с водным раствором соцы кальцинированной, отделении твердой 30 ,, фракции от жидкой, доведении водопроводной водой объема до 1 л и внесении в него агара, перемешивании, стерилизации, причем измельчение свекловичного жома ведут до размеров частиц

1-2 мм, а гидролиз его проводят в водном растворе соды кальцинированной при 115-125 С в соотношении соца кальцинированная:вода водопроводная:

:свекловичный жом (0,5-1,5):(130-.

1б0):(13-15) в течение 0,5-1,0 ч.

Пример 1. Бактериальные продуценты пектолитических ферментов

В.circu1ans 31, В.шасегапз шт. бб„

В.вцЪМ1ив шт. 1 хранили в течение

3,10,20 дней и 1,2 мес на агаризованной питательной среде, имеющей состав, г/л:

Фильтрат продуктов щелочной деградации пектина свекловичного примера 1 на агаризованной питателвной среде, имеющей состав, г/л:

Фильтрат продуктов. щелочной деградации пектина свекловичного б00,0

25,0

Остальное жома

Агар

Водопроводная вода рН естественный.

Пример 3. Указанные бактериальные продуценты пектолитических ферментов хранили в течение срока примера 1 на агаризованной питательной среде, имеющей состав, г/л.

Фильтрат продуктов щелочной деградации пектина. свекловичного

800,0

20,0

Остальное жома

Агар

Водопроводная вода рН ес.тественный.

Среду получали, используя продукты щелочной деградации пектина свекловичного жома, которые приготавливали путем щелочного гидролиза молотого до размеров частиц 1-2 мм свекловичного жома в водном растворе соды кальцинированной при соотношении сода кальцинированная:вода водопроводная:

:свекловичный жом 1,5:160: 15 в тео чение 1 ч при 125 С с последующей фильтрацией гидролизата через сито диаметром пор 1 мм и доведением его до объема водопроводной водой до 1 л, внесением 20 r агара, перемешиванием и стерилизацией в течение 40 мин при,0,8 ати, Полученные среды примеров 1-3 разливали в асептических условиях В, пробирке и "скашивали", Затеи среды засевали петлей вегетативным посевным материалом указанных продуцентов, 1Io истечении срока хранения прово дили контроль биосинтетической активности бактериальных продуцентов пектолитических ферментов путем засева с косяка 1 л жидкой питательной среды, имеющей следующий состав: свекловичный жом 2,75; калия гидроокись 0,2; кальций углекислый 0,2;. калий сернокислый 0,25", мочевина

0,75; кукурузный экстракт 1,25, рН 8 1„

Культивирование проводили при аэрации на качалке 180 об/мин при

40 С в течение 18 ч.

По окончании култивирования прово; дили определение активности фермен1 393846 тов пектолитического комплекса: экзо-полигалактуроназы (экзо-ПГ), эндополигалактуроназы (эндо-ПГ), пектаттранс-элиминазы (ПТЭ).

Активности экзо-ПГ и эндо-ИГ онре;деляли в соответствии с ГОСТом, Активность ПТЭ определяли спектрофотометрически определением продуктов реакции с ненасьпценной двойной связью между 4 и 5 атомами угле— рода, имеющих максимальное поглощение при длине волны 230-235 нм.

За единицу ПТЭ активности принято такое количество фермента, которде эа

1 ч при 40 С катализирует расщепление пектина с образованием ненасьппенных продуктов реакции, в результате чего происходит увеличение оптической плотности реакционной смеси на 0,1.

Влияние состава агаризованной питательной среды на активность бактериальных продуцентов пектолитических ферментов представлено в табл.1. Контролем для предлагаемой среды служили25 агаризованные среды: Чапека, крахмалоаммиачная и картофельный агар.

Пример 4. Сбалансированность предлагаемой питательной среды по элементам питания достигается за счет введения фильтрата щелочного гидролизата свекловичного жома в количест" ве 400-800 г/л. Выход за предельные значения количества фильтрата щелочного гидролиэата свекловичного жома на предлагаемой,агаризованной среде .35 не приводит к желаемому результату сохранению и повышению биосинтетической способности продуцентов. Содержание в среде фильтрата ниже

400 г/л приводит к сокращению срока хранения культур, а повышение содержания фильтрата выше.800 г/л приводит к потере биосинтетической способности культур, Влияние количества фильтрата щелочного гидролизата свекловичного жома в агаризованной питательной среде на сохранение активностей пекто.литических ферментов бактериальных продуцентов приведено в табл,2.

Преимущество предложенной среды заключается в снижении ее себестоимости в 3,7 раза по сравнению с известной и увеличении биосинтетической способности бактериальных продуцентов пектолитических ферментов на

20-ЗОХ в процессе хранения.

Формула изобретения

400-800.20-25

Остальное жома

Агар

Водопроводная вода

Питательная среда для хранения бактериальных продуцентов пектолитических ферментов, содержащая источ" ник углерода, агар и воду, о т л и— ч а ю щ а я с я тем, что, с целью повышения биосинтетической способности продуцентов пектолитических ферментов, в качестве источника углерода, азота, биологически активных веществ и индуктора. синтеза ферментов она содержит фильтрат продуктов щелочной деградации пектина свекловичного жома при следующем соотношении ингредиентов> г/л

Фильтрат продуктов щелочной деградации пектина свекловичного

1393846

1 !!

1 1 о

Ж Г 1

I 0Ъ 1-б 1

Cd

Г ! Е I о о о о о о

О1 "Ch

1 СЧ О о о о о

«а б

CV ф о о о Г1 Ch Г ь о сО м

D ь

СО

1

1 I

I

С ) CV

e) e" 1

Ж 1 Е I

e) i

A 1

Е I

D !

О о Ю о о о о о о

С 1 lA СЧ

СЧ» ф о о о о

МР СЧ 1 СЧ о о с о о

D СЧ ф О СЧ О о о о

Ch СЧ л бЪ I

I о

:С 1»

1 С 1 1-й

СЧ

CO СЧ

СЧ

Са1 Л СЧ

Л СЧ

L о о о о о о о о

С D O ΠΠΠΠΠΠ— О О О СЧ O С") О МЪ СЧ ° О ф Ю

СЧ OO л сЧ 00 л сЧ oO Ch

Ю О а

Ф.

И 1

60

1

1 сб

1 а

К

О И

Ц

Р (б

Е а е

И с6

1И м(— ) о в + и о P г1 (б о Н и а

Ф Р Р

lg

И

Е

1."

С

Э а

)g х

1„

Я о е а а и е б lO е Еа

Й

И r4 г-1 с6 гС и 4э

Ф

v а3 И

Й

М е 1 Е Е

Н Н

t0 И о e +» и и P

"г сб о; g u

С 1 Е

g И г) Сб о е о г (б о а

Р Р

1393S46

Ts8nNna2 уцевт юч

7300 12 0 3э0

200

)еО 5400 7 0

6900 8,0

1,0

2500 9,0 2,0 1800 5,0

0,5 1020 4,0 0,5

Оэ5 680 Оэб

ОФ2

820 1,0 2,0 750 1,0

700

В.macarans бб

2500 9sO 2 0 2400 9 0

1,5

1,0 2450 8,5

1,0 810 1,0

В.subtilis l

1,0

8I0 - 1s0

820 1,0 2,0

1000 В, circulane .31

В.macarans 66

2100 8 0 2 5 2000 8 0

2,5

2,5 1950 7,8

В.subtilis, 1

2,0 690 1,0 2,0

700 1э0 2 ° 0 690 1э0

Составитель В.Соина

Редактор Н.Рогулич Техред М.Ходанич . Корректор A,Oáðó÷àð

Заказ 1 941 /27 Тираж 520 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Содервацие целочвого г\щролм» вата в среде, r/ë, В. circulans 31

Ъ.maccrans 66

В.su&ilia 1

В. c ir culans

7300 2,0 3,0 7150 10,0 2,0 7170 10,0 2,00

5600 10,0 2 ° 8 5200 10,0 2,8 5200 10,0 2,5