Способ радиоиммунологического определения антигенов
Изобретение отноеится к биохимии , точнее к иммунологическим микроопределениям антигенов, предназначено для диагностики различных патологических и физиологических состояний человека и при определении микроколичеств биологически активных веществ. Цель изобретения - повышение чувствительности иммунологического определения антигенов. Для того инкубирую т антиген со специфическим антителом, один из компонентов радиоактивномеченый, инкубацию проводят в присутствии декстрана с мол.мае. 20000-50000 и его конечной концентрацией 3-8%. Затем отделяют радиоактивный комплекс и проводят радиометрию . Все определения для повышения чистоты дублируются. 1 табл. i
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИН (19> (11) (50 4 G 01 N 33/534
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К Д ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4158475/28-14 (22) 10.12,86 (46) 23.09,88, Бюл. Р 35 (71) Институт биоорганической химии
АН БССР (72) В.М.Гузов, С.А.Усанов и В.Л,Чащин (53) 615.575.36 (088.8) (56) Чард T. Радиоиммунологические методы. — М.: Мир, 1981, с,14-23. (54) СПОСОБ РАДИОИИИУНОЛОГИЧЕСКОГО
ОПРЕДЕЛЕНИЯ AHTHI EHOB (57) Изобретение относится к биохимии, точйее к иммунологическим мнкроопределениям антигенов, предназначено для диагностики различных патологических и физиологических состояний человека и при определении микроколичеств биологически активных веществ. Цель изобретения — повьппение чувствительности иммунологического определения антигенов, Для зтого инкубируют антиген со специфическим антителом, один из компонентов радиоактивномеченый, инкубацию проводят в присутствии декстрана с мол.мас.
20000-50000 и его конечной концентрацией 3-8.. ° Затем отделяют радиоактивный комплекс и проводят радиометрию. Все определения для повьппения чистоты дублируются. 1 табл.
1425549
Изобретение относится к медицинской биохимии, а именно к способу иммунологического микроопределения антигенов, и может быть использовано
5 для диагностики различных патологических и физиологических состояний организма человека, а также в научных исследованиях при определении микроколичеств биологически активных веществ, Цель изобретения — повышение чувствительности иммунологического определения антигенов.
Пример 1. Построение калибро вочной кривой для радиоиммунологического определения раковоэмбрионального антигена (РЭА) по стандартной методике с использованием разделяющей системы на основе иммобилизованных вторичных антител в присутствии декстрана (мол.мас, 70000), Все определения дублируются.
В пробирки добавляют растворы реагентов: 25 твин-20-буфер (50 мМ фосфатный буфер, содержащий 0,4% твина-20, 0,6 М ИаС1, 0,1 мМ ЭДТА, 0,02% ИаИ, рН 7,4), содержащий 10% декстрана, в количестве О, 1 мл; 30 растворы стандартов РЭА, приготовленные на нормальной сыворотке человека и содержащие 0,2,5,10,25,80,150 и 350 нг РЭА/мл, в количестве 0,1 мл;
I-РЭА содержащий 10% декстра>
35 на, в количестве 0,1 мл; антисыворотка кролика против РЭА в разведении, необходимом для связывания 20-25Х вносимого I-РЭА, со>2 р держащая 10% декстрана, в количестве
0,1 мл, В пробирки для определения неспецифического связывания вместо антисыворотки добавляют альбуминовый буфер" (50 мМ фосфатный буфер, содер- 45 жащий 0,1% бычьего сывороточного альбумина, 0,15 M NaC1> О,! мМ ЭДТА>
0,02% NaNy рН 7,4).
Содержимое всех пробирок тщательно50 перемешивают и пробирки инкубируют
20 ч при комнатной температуре. После инкубации во все пробирки добавляют по 0,1 мл суспензии иммобилизованных вторичных антител. Пробирки встряхивают в течение 1,5 ч при комнатной температуре, после чего центрифугируют 10 мин при 1500 g> осадки промывают 1 раз по 1 мл твин-20-буфера, Стандар- Радиоак-,,x, В/В « 100%! ты РЭА, тивность> имп/мин нг/мл имп/мин
5092
4957
4752
4794
4582
4494
4187
3593
3633
2073
2087
1486
823
5025
100
95,0
4773
4538
90,3
4226
84,1
3608
71,8
41,4
2080
150
1508
30,0
809
16,1
350
В линейных координатах строят стандартные кривые, откладывая по оси ординат значение В/В, «100%, а по оси абсцисс — концентрацию стандартов РЭА в нг/мл. Графическим способом определяют чувствительность анализа (т.е. концентрацию стандарта
РЭА, при которой В„/В «100%=95%)å
Как следует из таблицы, чувствительность анализа в присутствии декстрана — 2 нг/мл.
Использование предложенного способа позволяет повысить чувствительность иммунологического определения антигенов в 2-4 раза по сравнению с известным, Ф о р мул а и э о бр е т е н и я
Способ радиоиммунологического определения антигенов, включающий инкубацию антигена со специфическими ани пробирки помещают в гамма-счетчик для измерения радиоактивности.
Рассчитывают среднее арифметическое значение (х) количества импульсов в минуту для каждой пары пробирок, а также определяют величину В/В «100% для каждого стандарта> где  — связанная радиоактивность в пробирках, не содержащих стандарты, имп/мин;
 — связанная радиоактивность в пробирках, содержащих 0 нг РЭА/мл, имп/мин.
Результаты приведены в таблице °
1425549
Составитель П.Иванов
Редактор Г.Волкова Техред А.Кравчук Корректор В,Романенко
Тирах 847
Заказ 4762/41
Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4 тителами, при этом один из компонентов несет радиоактивную метку, отделение радиоактивного комплекса и его радиометрию, отличающийся тем, что, с целью повьппения чувствительности анализа, инкубацию антигена со специфическими антителами проводят в присутствии пекстрана с мол. мас. 20000-50000 при его конечной концентрации 3-87.
