Способ обработки спермы индюков

 

Изобретение относится к искусственному осеменению сельскохозяйственных птиц. Целью изобретения является повышение биологической полноценности спермиев. Охлаждение и эквилибрацию спермы при 2-4 С проводят в течение 55-70 мин. Перед замораживанием и после оттаивания насьщают сперму водородом. Замораживание осуществляют в три этапа: I - от 2-4 до (-12)- (-14) С за 180-240 с, II - от -14 до (-58)-(62) С за 160-180 с, III - от -62 до за 20-40 с. Увеличение оплодотворяющей способности спермиев при насыщении спермы водородом перед замораживанием и после оттаивания достигается за счет ингибирования аэробного ферментативного окисления, снижения процессов переокисления липидов мембран спермиев, интенсивное окисление которых при действии низких температур приводит к накоплению токсических продуктов. Способ обеспечивает получение оплодотворенности ягац в течение первых трех недель на уровне 71-74,6% при выводе молодняка - 60-61%. 5 табл. (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

09) (И) Ai g 4 А 61 D 7/02

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ГО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТКОЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н khlUPGNOMV СВИЦфТВ ЬСТВУ

B: L .i:Å;;:j

E.,;é.—.: (21) 42 33042/ 30-15 (22) 20. 04. 87 (46) 30.11.88. Бюл. S 44 (71) Украинский научно-исследовательский институт птицеводства (72) В.И.Бесулин и П.M.Êàðêà÷ (53) 591.463. 1:621.7 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

В 691132, кл. А 61 D 7/02, 1979.

Авторское свидетельство СССР

Ф 1136806, кл. А 61 D 7/02, 1985. (54) СПОСОБ ОБРАБОТКИ СПЕРМЫ ИНДЮКОВ (57) Изобретение относится к искусственному осеменению сельскохозяйственных птиц. Целью изобретения является повышение биологической полноценности спермиев. Охлаждение и эквилибрацию спермы при 2-4 С проводят в течение 55-70 мин. Перед заморамиванием и после оттаивания насьзцают сперму водородом. Замораживание осуществляют в три этапа: I — от 2-4 до (-12)(-14) С sa 180-240 с, II — от -14 до (-58)-(62) С за 160-180 с, III— от -62 до -196 С за 20-40 с. Увеличение оплодотворяющей способности сперииев при насыщении спермы водородом перед замораяяванием и после оттаивания достигается за счет ингибирования аэробного ферментативного окисления, снижения процессов переокисления липидов мембран спермиев, интенсивное окисление которых при действии низких температур приводит к накоплению токсических продуктов. Способ обеспечивает получение оплодотворенности яиц в течение первых трех недель на уровне 71-74,6Х при выводе молодняка—

60-61Х. 5 табл. С:

1440494

Изобретение относится к искусственному осеменению сельскохозяйствен ных животных, в частности к способам обработки спермы самцов птиц.

Пример . Сперму от индюков получают асканийским способом, оцени" вают по подвижности спермиев и другим показателям, разбавляют защитной средой s соотношении 1:3 при комнат- 1О ной температуре . Затем ставят в холодильник иа эквилибрацию, которая продолжается 55-70 мин. Увеличение и уменьшение периода эквилибрации спермы индюков при плюсовой темпера- 15 туре ведет к заметному снижению подвижности оттаянных спермиев и проценту целых акросом.

Проведенные исследования показали, что при применении более коротко- 20

ro (10"40 мин) периода эквилибрации в спермнях не создается условий для пассивного осмотического ультрафильтра, не поступает уравновешивания концентрационных градиентов вещества, растворенных внутри снермиев и находящихся в окружакщей ego среде.

Кроме того, при таком коротком периоде эквилибрации спермии более восприимчивы к повреждению, обуслов- 30 ленному токсическим действием криопротектора.

Так, подвижность спермиев после оттаивания при 55-70-минутном хранении составила 3,46-3,61 балла, а при

10-40-минутном только 0,54-2, 14 балла.

Это подтверждается и большей степенью деструктивных изменений цитоплазматической мембраны спермиев 40 (94 29-99,54% против 76,6- 75,7%)..

После 55-70-минутного охлаждения спермы при 2-4 С в нее вводят криопротектор NN-диметилацетамид. При этом днметилацетамид вводят в разбавленную сперму за 20-70 с до глубокого замораживания. Исследованиями также доказано, что увеличение периода эквилибрации спермы с криопротектором свыше 70 мин перед замораживанием вызывает снижение биологической полноценности спермиев .

Сразу после введения:криопротектора сперму насьпцают водорадом в течение 20-30 с и приступают к ее saMo"

55 раживанию. При этом указанным приемом обработки спермы перед замораживанием позволяют на 5,7% повысить оплодотворенность, на 7,6% выводимость яиц и на 7,3% вывод индюшат (табл. 1) °

Технический прием насыщения спермы водородом перед замораживанием позволяет снизить процессы переокисления липидов мембран спермиев н придать замораживаемой субстанции форму полых сфер . Образование полых сфер приводит к более разобщенному распределению спермиев н созданию индентичных условий снижения температуры во всем объеме замораживаемого биологического объекта.

Увеличение оплодотворяющей способности сперимиев при насыщении спермы водородом перед замораживанием и после оттаивания в сравнении с необт работанной, но замороженной по предлагаемому режиму спермой (2 группа) н в сравнении с прототипом (1 группа) достигается за счет ннгибирования аэробного ферментативного окисления, снижения процессов переокисления липидов мембран спермиев, интенсивное окисление которых при действии низких температур приводит к накоплению токсических продуктов.

После насыщения спермы водородом осуществляют трехэпатное замораживание в облицованных „ необлицованных гранулах, в пайетах или же на внутренней поверхности стеклянных флаконов, вращакщихся в морозильной камере.

Для регистрации температуры образца спермы при замораживании в качестве датчика использовали дифференциальную термопару с выходом на регистрирующее устройство — самописец

Н 399.

При замораживании спермы в гранулах охлаждение образцов проводят от

2-4 до (-12)-(-14) Ñ за 180-240 с, затем от -14 до (-58) — (62) С за

160 180 с и до -196 С за 20-30 с.

При замораживании во флаконах и пайетах подготовленную для замораживания сперму вносят в морозильную камеру, предварительно охлажденную до -95 С, выдерживают в течение 180240 С, затем вводят в морозильную камеру пары азота в течение 160-180 с (образец при этом охлаждается до (-58)-(-62) С, после чего флаконы нли пайеты опускают в жидкий азот, где образец охлаждается до -196 С (температура жидкого азота) за 20—

40 с.

55 з

14

Замороженную сперму переносят для хранения в сосуды Дьюара или стацио-. нарные хранилища для биологических объектов. Оттаивают сперму в водяной бане при 65-70 С.

Рекомендуемый режим замораживания, его оптимальные.и граничные параметры проверены вначале по подвижности оттаяных спермиев (табл. 2 и 3), а затем и по их оплодотворяющей способности (табл, 4), Представленные в табл. 3 данные свидетельствуют о том, что лучшая подвижность спермиев (3,3-3,6 балла) наблюдается при охлаждении спермы до (-12)-(-14) С в течение 180-240 с.

При увеличении спермы или уменьшении температуры или продолжительности охлаждения спермы относительно разработанного оптимума, отмечается достоверное снижение биологической полноценности спермиев.

Наиболее оптимальным периодом замораживания спермы на втором этапе установлено охлаждение ее до -58— (-62) С за 160-180 с. При этом получена максимальная подвижность оттаянных спермиев — 3,6 — 3,8 балла. Скорость замораживания образца спермы о на этом этапе составляет 15-18 /мин.

После охлаждения образца с этой же о скоростью до температуры ниже — 62 С, а также переход на более медленную скорость замораживания не улучшали подвижности оттаянных спермиев. Поэтому логическим завершением исследований явился переход на более высокие скорости охлаждения. Дальнейшее замораживание образцов спермы в интервале от -62 до -196 С (температура жидкого азота) проводили со скоростями: 50, 70, 100, 150 ìèí или погружали сразу в жидкий азот (скорость 200-400 /мин), однако существенных различий по подвижности от1 таянных спермиев не наблюдали. После программного охлаждения спермы до

-58 — (-62) С образцы сразу опускали в жидкий азот, при этом образцы, замороженные в гранулах, достигают температуры -196 С за 20-30 с, à образцы, замороженные во флаконах и пайетах — в течение 20-40 с.

1 о

После оттаивания при 65-70 С спер му вновь насыщают водородом, для замедления обменных процессов и более длительного сохранения биологической полноценности ослабленных после от40494 4 таивания спермиев, процессы катаболизма которых возрастают после ниэкотемпературного анабиоза в присут5 ствии кислорода.

Технический прием насыщения спермы водородом как до замораживания, так и после оттаивания осуществляют следующим образом.

Через редуктор из газового баллона для транспортировки и хранения наполняют водородом кислородную подушку, удалив из нее воздух или дру гой находящийся в ней газ. Водород, 15 находящийся в кислородной. подушке, с помощью эбонитового крана, с вмонтированной в него металлической медицинской иглой И-22, пропускают через сперму. При этом продолжитель20 ность насыщения спермы газом состав ляет 20-30 с при давлении струи газа 18-40 Па.

После насыщения спермы водородом после оттаивания сразу же приступа25 ют к искусственному осеменению индеек.

Предлагаемый способ обработки спермы обеспечивает получение оплодотворенности яиц в течение первых

Зд . трех недель на уровне 71-74,67 при

1 выводе молодняка 60-613 по сравнению с прототипом, поддерживают оплодотворенность яиц - mishap MoaoqHma Ha более высоком уровне в течение 9 нед. племенного пеРиода.

Результаты, представленные в табл. 4, свидетельствУют о том, что в среднем по опыту на 63 дня оплодотворяющая способность спермы, обрабо40 танной по предложенному способу, достоверно (Р с 0,0 1) превосходит прототип по оплодотворенности яиц на

11,7 и вывод индюшат на 11,2Х.

Была проведена экспериментальная

45 проверка предложенного способа обработки спермы индюков.

Результаты экспериментальной про- верки (табл. 5) показывают, что предложенный способ достоверно (Р а 0,05) превосходит по оплодотворенности (на 6,37) и выводу индюшат (на 6,1Е) известный способ обработки спермы (прототип).

Формула и з обретения

Способ обработки спермы индюков, включающей разбавление, охлаждение и эквилибрацию с криопротектором при

Т а б л н ц а 1

Влияние различных способов обработки спермы до замораживания и после оттаивания на оплодотворяющую способность спермы индюков

Группы Режим замораживания Проинкуиндеек спермы и ее обработка . бировано яиц, шт.

Вывод Выводимость индю I я ниц 7

Оплодотворенность, Х шат, Ж

Прототип, без обработки

26, 4 80,6

32,8

189

Предлагаемый: без обработки

?3,4

25,8

182

35 2 с обработкой до замораживания

81,0

114

40,9

33,1 с обработкой до замораживания и после оттаивания

44,1

85,5

129

53,5

5 1440494 6

2-4 С, замораживание и оттаивание, щем режиме: от 2-4 до (-12)-(-14) С отличающийся тем, что, за 180-240 с, от (-14) до (-58) с целью повышения биологической пол- (-62) С за 160-180 с, от (-62) до ноценности спермиев, охлаждение снер- > (-196) С за 20-40 с, причем перед мы йроводят в течение 55-70 мин, а замораживанием и после оттаивания замораживание осуществляют в следую- сперму насыщают водородом.

1440494 (Г\ о л о л л

+! Î Î О

+I +I +I (Ч Л e O с! сЧ Е с

С"3 СЧ СЧ л л л л о о о о

+I +! +l + I

О С! - 00 л л л л

СЧ СЧ (»4 о

1 «!

1 ь

J. о о

Е гоо ((1 л ь л л

+I О О

+/ +t

О О О л л л

СЧ (1 (л!

СЧ л л о о

+I +!

СЧ СЧ л л

С 1 «»1

СО Я «» ) О

«Ч ° » л л л о о о о

+ I, +! +! +I

CO б О л л л л

СЧ (Ч

Ц

v -

Х 1

I«I СЧ (!! + о о (Ч

О О Е СЧ л л л о о о о +t

+1 +1 +) Л

О (! О 00 л л л (! (4 с») сЧ

O O л (4 (Ч о л

+ О о

О +I +I

СО а а л л л

» — С"! (4 о л л л о о

+I +! (»1 л л (») (»1! o

I (ч л л л о о

+! +I о (! л

С 1 «»!

Ю 00

° % » л» (Ч о о

+! о о +! й! +t +I сЧ л л л л л

«1 « сЧ сЧ (»4 р Л

» л » о

O +I О

+! ю +! л СО л л л

С 4 СЧ С 4

lg о ж х

Ц

Cd

E о

1 о

Ж л

Е

О

Э

И

I

1 I

Щ л»

% л е» о л о +t о

-!.! м .4- !

iО Ch CO л л л о о

СО

С 4 л» о л

o +t о и1

СО Ch л л

«4 СЧ «») С0 л л о о

+I +t

Ch (1 л

С 4 (Ч ж

K о

О о

Г л о

+! О л (» о

v о

А

Ц х

Ю (Ч

А

k( о

Р«

00 СЧ о о л л о о

+1 +1 О О

И\ 3 л о л л о о н Ъ О а о л л л о о о

+t +! +!

О\ CO (С! л л л о о о о л

+t o и

«»3 ж о

Ж (Ц Е

5 . !

» Ф !

С о v

1 ъ

Cd до е о

« л

Э д

E Р

I«I

Е

О

04

И и

ЪЯ о ж ж

«0 (0

Е»

E о

1 о ж м

d!

K о о о

1

1

1 м

v о

А

Ц

5 и о

3

О СЧ < О 00 О О СО - - л- » »» СЧ

1 I 1 1 1 1 I 1 I

1440494

Таблица 4

Оплодотворяющая способность спермы в течение 9 нед. племенного периода, обработанной предлагаемым способом и прототипом, Проинкуби- 7 оплодотво- Х вывода ровано яиц, ренности яиц молодняка щт.

Способ обработки

62,1

48,6+ 78,2

420

Предлагаемый

Известный (прототип) 37,4 24, 1

444

50,4

"P ñ0,05

Р (0,01

Таблица 5

Результаты экспериментальной проверки нового способа обработки спермы индюков

Х выво- Х вывоСпособ обработки спермы димости иц а молодняка

Известный (прототип) 84,4

42,7

50 6

531

85,9

48,8

56,9

473

Предложенный

Составитель А.Филиппова

Техред И.Дидык Корректор И.Иаксижиинец

Редактор M. Бандура

Подписное

Тираж 655

Заказ 6119/7

BHHHIIH Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Иосква, Ж-35, Рауаская наб., д, 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Проинкубировано яиц, IB7 °

Ж оплодот воренности яиц

Х выводимости яиц