Способ диагностики силикотуберкулеза

 

Изобретение относится к медицине , точнее к клинической иммунологии, предназначено для ранней диагностики силикотуберкулеза in vitro у лиц. контактирующих с высокофиброгенной кварцсодержащей пылью. Цель изобретения - повышение точности. В пробе крови проводится иммунологическая идентификация специфических рецепторов к туберкулину на субпопуляциях лимфоцитов в реакции тройного роэеткообразования и при содержании лимфоцитов с рецепторами к туберкулину 7 3% и лимфоцитов с реце пторами к комплементу и туберкулину /0,5% реакция считается положительной и позволяет провести раннюю диагностику силикотуберкулеза в 78,6% случаев. Предлагаемый способ может быть внедрен в практику отделений профпатологии, а также лечебно-диагностических и фтизиопульмонологическнх стационаров . (Л с

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (51)4 G 01 N 33 53

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 415 j 406/28-14 (22) 02 ° 12 ° 86 (46) 07. 12.88. Бюл. В 45 (71) Научно-исследовательский институт гигиены и профессиональных заболеваний ANH СССР (72) Ч.К. Чонбашева, О.Г. Алексеева, Т.И. Гришина и А.И. Палагуаина (53) 615.375(088.8) (56) Рашевская А.М. и др. Лечение силикоза и силикотуберкулеза. — М;:

Медицина, 1970, с. 27. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СИЛИКОТУБЕРКУЛЕЗА (57) Изобретение относится к медицине, точнее к клинической иммунологии, предназначено для ранней диагностики силикотуберкулеза in vitro у лиц, ÄÄSUÄÄ 1442919 A1 контактирующих с высокофиброгенной кварцсодержащей пылью. Цель изобретения - повышение точности. В пробе крови проводится иммунологическая идентификация специфических рецепторов к туберкулину на субпопуляциях лимфоцитов в реакции тройного розеткообразования и при содержании лимфоцитов с рецепторами к туберкулину >i ЗХ и лимфоцитов с рецепторами к комплементу и туберкулину ), 0,57 реакция считается положительной и позволяет провести раннюю диагностику силикотуберкулеза в 78,6Х случаев.

Предлагаемый способ может быть внедрен в практику отделений профпатологии, а также лечебно-диагностических и фтизиопульмонологическчх стационаров.

1442919

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической иммунологии, и может быть использовано при диагностике силикотуберкулеза, возникающего у лиц, работающих в контакте

5 с высокофиброгенной кварцсодержащей пылью.

Цель изобретения — повышение точности диагностики силикотуберкулеза.

Способ осуществляют следующим образом.

Выделяют лимфоциты из гепаринизированной периферической венозной крови обследованных лиц в градиенте

14,5 верографина фирмы "Spofa" (ЧССР) на физиологическом растворе, pH — 7,35, о — 1,076, центрифугируют 40 мин при 1500 об/мин. Из образовавшихся трех слоев отбирают второй слой (мутное кольцо) в силиконированную пробирку и добавляют питательную среду 199 до 10 мл, дважды отмывают по 2 мин при 1500 об/мин и сливают до 1 мл, смешивают и считывают в камере Горяева в пять и более квадратах и разводят до 2 х10 кл/мл

В качестве индикаторных частиц применяют эритроциты барана и эимозан в виде 0 1 -ной суспенэии Таллинского химико-фармацевтического завода или зимоэан для определения пропердина Олайнского БХЗ.Последний растирают в фарфоровой ступке с мерным количеством физиологического раствора, который добавляют по каплям.

В качестве диагностикума применяют конъюгат предварительно окрашенного зимозана с раствором стандартного туберкулина, содержащего 20000 ТЕ в 1 мл (сухой очищенный туберкулин

Предприятия по производству бакпрепаратов Ленинградского НИИ вакцин и сывороток). 45

Зимозан предварительно окрашивают в контр""ñòíûé цвет по способу Хилько Т.Ф.

Далее 5 мл раствора, содержащего

100000 ТЕ смешивают с 5 мл 0,1 -ной 50 взвеси предварительно окрашенного зимозана, инкубируют 60 мин при о

37 С, отмывают дважды центрифугированием при 1500 об/мин с физиологическим раствором, приготавливают из 55 осадка 0,17Х-ную взвесь, которую используют в работе.

Постановка реакции.

В силиконированную микропробирку с 0,1 мл суспензии лимфоцитов 2

° 10 в 1 мл среды У 199 добавляют

0,1 мл 0,5/-ной взвеси эритроцитов барана, 0,1 мл 0,17 -ной взвеси комплекса зимозан-туберкулин. Смесь инкубируют в течение 5 мин при о

37 С, осаждают в течение 2 мин при

1500 об/мин, инкубируют в течение о

60 мин при 10 С. После этого фиксируют 0,1 мл 3/-ного глютарового альдегида в течение 20 мин. Далее заливают дистиллированной водой до края пробирки, центрифугируют 2 мин при 1500 об/мин, отсасывают надосадочную жидкость пастеровской пипеткой и готовят мазок на предметном стекле из тщательно ресуспендированного осадка, Мазок подсушивают на воздухе, фиксируют в течение

10 мин в метиловом или абсолютном этиловом спирте, отмывают 2 мин в дистиллированной воде, подсушивают затем метиловым зеленым и пиронином по Браше,В мазках препаратов подсчитывают при микроскопии под иммерсией 200 лимфоцитов. 3а розетку принимают лимфоцит, присоединяющий к своей поверхности три и более индикаторные частицы одного типа. При подсчете клеток определяют процентное соотношение восьми субпопуляций лимфоцитов, учитывая, что комплекс зимозан-туберкулин имеет при окраске по Браше синий цвет.

Прием реакции роэеткообразования

1 позволяет отдифференцировать субпопуляции розеткообразующих лимфоцитов на основании образования розеток со всеми использованными индикаторами.

Л „, JI, +,„ . Ha основании анализа полученных результатов в группе больных и контрольных лиц выделены в качестве диагностики значимых субпопуляция-лимфоцит только с туберкулиновыми рецепторами. Выявление предлагаемых диагностических показателей возможно только в предлагаемой реакции.

При содержании процента лимфоцитов с рецепторами к туберкулину (Л .,„ ) 7 3% реакцию считают положительной и диагностируют силикотуберкулез.

Пример 1. Больной 58 лет, в прошлом в процессе работы длительно подвергавшийся воздействию кварцсодержащей пыли, направлен в клинику.

1442919

ВНИИПИ Заказ 6379/42

Тираж 847 Подписное

Произв.-полигр. пр-тие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4 для уточнения диагноза. На рентгенограмме на всем протяжении легких определялись мелкопятнистые тени, имеющие слева в верхнем поясе различную величину. Клинически симптомов интоксикации не было, температура нормальная. Лабораторные показатели, включающая общий анализ крови и биохимические данные, воспалительных изменений не выявили. Градуированная кожная туберкулиновая проба

Пирке была отрицательной во всех разведениях. При иммунологическом исследовании крови в реакции тройного розеткообразования с туберкулином выявлены JI » -7,67. Таким образом, реакция расценивается как положительная, что позволило впервые у больного диагностировать силикотуберкулез

20 и рекомендовать проведение противотуберкулезной терапии.

Пример 2. Больной 60 лет, в прошлом работал в условиях воздействия кварцсодержащей пыли. Направлен в клинику для обследования и уточнения диагноза. На рентгенограмме легких на фоне диффузно усиленного и деформированного легочного рисунка видны множественные различной величи30 ны кольцевидные тени с перифокальным воспалением. Клинически имелись симптомы интоксикации (субфебрилитет, слабость, потливость). В общем анализе крови и при биохимическом исследовании определялись воспалительные 35 изменения в виде ускоренной СОЭ, повышенного содержания гаптоглобина, фибриногена к сиаловой кислоты. Градуированная реакция Пирке отрицательная.

При постановке реакции тройного розеткообраэования Л - 1,07. Реакция расценена как отрицательная. Таким образом, на основании комплекса клинико-рентгенолабораторных исследований, включая микробиологическое 45 исследование мокроты, где обнаружены пневмококк и гемолитический стрептококк, у больного диагностирован пневмокониоз, осложненный хронической неспецифической инфекцией с формиро- 50 ванием кист и с перифокальным воспалением вокруг них. Проводилась неспецифическая антибактериальная терапия с положительным эффектом.

Таким образом, преимуществом предлагаемого способа диагностики является возможность установления диагноза силикотуребкулеза на ранних этапах, в том числе и при клинически не определяемой активности силикотуберкулезного процесса, а также и при туберкулиновой энергии, что является положительной стороной и важно для своевременного назначения специфического лечения.

Диагностическая ценность изучена у 30 больных с подозрением на силикотуберкулез в возрасте от 45 до

60 лет с длительным стажем работы в пылевых условиях.

По клинико-рентгенологическим критериям диагноз силикотуберкулеза вызывал затруднения у больных с отрицательной кожной туберкулиновой пробой Пирке (14 человек).

Всем больным была проведена предлагаемая реакция тройного розетко— образования, которая окалазась положительной у 11 из !4 больных с отрицательной туберкулиновой кожной пробой (78,6/), что позволило установить диагноз силикотуберкулеэа на ранней стадии его развития, ко&да остальные методы этого не позволили и повысить точность диагностики на 287.

Предлагаемый способ осуществляется in vitro и исключает обострение заболевания в результате диагностического исследования. формула изобретения

Способ диагностики силикотуберкулеза, включающий исследования больного с помощью туберкулина, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью повышения точности, у больного выделяют иэ крови лимфоциты, добавляют эритроциты барана и обрабатывают окрашенным коньюГатом зимозана с туберкулином, подсчитывают розеткообразующие клетки и при содержании розеткообразующих туберкулин-зимозановых клеток равном 3/ и вьппе по от- . ношению к общему числу роэеткообразующих клеток диагносцируют силикотуберкулеэ.