Способ культивирования вирусов в органных культурах трубчатых органов

 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в вирусологии. Целью изобретения является упрощение способа культивир ования вирусов и повышение их титров. Указанная цель достигается за счет выращивания и использования для культивирования вирусов органных культур, при этом выращивание ведется целыми сегментами трубчатых органов с сохранением цилиндрической формы. Особенностью является использование сегментов с вывернутой наружу слизистой оболочкой. Выращивание осуществляется в роллерных устройствах с последовательным погружением сегментов в питательную среду и аэрацией воздухом с 5% углекислого газа. (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) (51) 4 С 12 М 7/00.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOIVlY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ П(НТ СССР (21) 4137113/30-13 (22) 17.10.86 (46) 15.01.89, Бюл. № 2 (71) Украинский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии (72) В.С.Белоконь; П.Т.Берус и В.Н.Коновалов (53) 578.858.4(088.8) (56) Hoorn В. Organ cultures of

ciliated epithelium for the заиду

of respiratory viruses. Acta pathol, of microbiol.Scand., 1966, 66, № 183, рр. 37. (54) СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ВИРУСОВ

В ОРГАННЫХ КУЛЬТУРАХ ТРУБЧАТЫХ ОРГАНОВ (57) Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в вирусологии. Целью изобретения является упрощение способа культивиро» вания вирусов и повышение их титров.

Указанная цель достигается за счет выращивания и использования для культивирования вирусов органных культур, при этом выращивание ведется целыми сегментами трубчатых органов с сохранением цилиндрической формы. Особенностью является использование сегментов с вывернутой наружу слизистой оболочкой, Выращивание осуществляется в роллерных устройствах с последовательным погружением сегментов в питательную среду и аэрацией воздухом с 57 углекислого газа.

1451163

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в вирусологии.

Цель изобретения — упрощение спо-. соба культивирования вирусов и повы5 шение их титров.

Пример 1. Трубчатые органы, например кишечник, рассекают на сегменты одинаковой длины, обычно соответствующей длине держателей. Сегменты кишечника трехкратно промывают в растворе Хэнкса с антибиотиками. Затем один конец сегмента кишечника перевязывают шелком или кетгутом. Пере- 15 вязанный конец кишечника подносят к держателю, укрепленному в крышке культурального сосуда, и натягивают на него, одновременно выворачивая чул. ком слизистой оболочкой наружу. Перевязанный конец кишечника отсекают ножницами.

Укрепленные таким образом на держателях сегменты кишечника трехкратно промывают путем погружения в цилиндрические сосуды с раствором Хэнкса и переносят в роллерный культуральный сосуд, куда после герметизации крышек заливают через штуцеры питательную среду для поддержания жизнедеятельности сегментов кишечника, При вращении роллерного культурного сосуда сегменты кишечника на держателях последовательно погружаются в питательную среду и подвергаются аэрации воздухом.

Пример 2. Культивирование вируса диареи штамм Oregon с 24V при выращивании ткани кишечника по предлагаемому способу. Отбор, подготовка и посадка сегментов кишечника на держатели осуществляется, как в примере 1, После герметизации сосуда через боковой штуцер вносят питательную среду без сыворотки, но содержащую вирус диареи из расчета 0,1 мп на

1 мл среды. Культуральный сосуд переносят на роллер. Репродукцию вируса диареи в ткани кишечника контролируют по результатам проявления цитопатического эффекта в монослойной культу- 50 ре перевиваемых клеток ПТ. При наступлении полной дегенерации клеток монослойной культуры сосуд с кишечными сегментами снимают с роллера, переносят в бокс. Через нижний боко- 55 вой штуцер сливают питательную среду, содержащую вирус. Снятые с сосуда крышки размещают в горизонтальном положении. С помощью пинцетов с держателей снимают кишечные сегменты, переносят в сосуд и хранят в замороженном состоянии. Инфицированную ткань кишечника используют в качестве исходного материала дпя приготовления диагностических антигенов и других целей, Титры накопления вируса диареи в ткани кишечника определяют методом раститровки на монослойной клеточной культуре IIT. Накопление вируса диареи в ткани кишечника на 1+0,2 лог.пре-. вышает титр вируса в монослойной клеточной культуре.

Пример 3. Культивирование коронавируса при выращивании ткани кишечника по предлагаемому способу. Отбор, подготовка и посадка ткани кишечника на держатели осуществляется, как в примере 1, далее поступают, как в примере 2, только вместо вируса диареи берут коронавирус.

Контроль репродукции коронавируса проводят с помощью РГА (реакции гемагглютинации), которую ставят микрометодом в пластинах с луночками аппарата Токаччи. Титр коронавирусного гемагглютинина в инфицированной ткани сегментов кишечника превышает титр коронавируса в исходном материале (суспензия фекалий от больных животных) на 8-10 гемагглютинирующих единиц, что свидетельствует о накоплении биомассы вируса в ткани. Специфичность коронавирусной инфекции подверждают в РЗГА со специфической коронавирусной антисывороткой.

Пример 4. Культивирование ротавируса при выращивании ткани кишечника по предлагаемому способу.

Отбор, подготовку и посадку ткани кишечника на держатели осуществляют, как в примере 1, далее как в примере 2, только вместо вируса диареи берут ротавирус.

Репродукцию ротавируса в ткани сегментов кишечника контролируют с помощью РДП (реакции диффузионной преципитации) с антиротавирусной сывороткой. В качестве ротавирусного антигена берут жидкую часть суспенэии, растертой в ступке ткани кишечника. РДП считают положительной при наличии четко выраженных полос между луночками с испытуемым материаСпособ культивирования вирусов в органных культурах трубчатых органов, включающий заражение вирусом органной культуры, культивирование клеток с вирусом в питательной среде

Составитель С.Светлышев

Техред А.Кравчук Корректор И.Зрдейи

Редактор М.Недолуженко

Заказ 7036/20 Тираж 500 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

3 14511 лом (ткань инфицированного кишечника) и специфической антиротавирусной сывороткой.

Формула и з о б р е т е н и я

63

4 в условиях периодической смены жидкой и воздушной фаз с последующим сбором вируссодержащей жидкости, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа и повышения титров вируса, в качестве органной культуры используют сегменты трубчатых органов цилиндрической формы с вывернутой наружу слизистой оболочкой, а культивирование осуще" ствляют в роллерном устройстве.