Устройство для выделения мононуклеарных клеток из крови

 

Изобретен птнисится к меднлщне. 1Делыо ;i3o6peTt : iiH ЯБЛПСТСЯ упрощение процесса выделения я х пе.тячение ко.личества выделяемь .х монон ;ч,)ных клеток, cт- poflciBO со.аержит 1, соедннеиный трубопроводом 7 е змеевиком 2, размещенным в резервуаре 3, соединенным с термостатом 4. сливной резерн--;;;р 5 е зажимом 9. Выделение мононх клеаргыл ;.;еток из крови осуществляетея .;.;;,,,- :v:,;i:a. На первом и вто- -; NiOMTHp eTCfl и подго- -зс заиню. дл)1 чего через раствор твердофазчерез змеевик 2 прорОМ 3731;а : тавливае;: змеевик 2 ного желатина. ч

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (5!! 4 А 61 В 5/14

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

H А BTGPCHGMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4089762/28-14 (22) 16.07.80 (46) 30.01.89. Бк>л. № 4 (71) Харьковский научно-исследовательский институт микробиологии, вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова (72) И. Л. Дикий, В. Д. Яковенко, Е. Д. Федирко, E. М. Дикая, А. С. Писаренко и A. Д. Безавлук (53) 615.472 (088.8) (56) Chin P., Rose 3. 1., Sscbreiber А. 1., «Isolation of cultured human 1);01!осу ((-s

Гпасгophages in suspersion ц1.1 zing 11.",." dl

and solid phase gela t! n>.— - Immund. Cc.:, mun. 1983, 12. ъ 4, р. 404 — 417.

„„Я0„„1454386 (54) УСТРО- С1ВО ., .! и ВЫДЕЛЕНИЯ

МИТИ-",,.)КЛВАР!:!l-l> К, IFT0K ИВ КЕЮВИ (57) ": зобрете! (. 1 ll(I(. ится K ме ГН11ин(. .

Цель(О;.зобрет;.:.Ня )(ял);ет:я упроп(ение процесса яь, .еления и зе, .и 1снИЕ КОЛНЧ Стна

ВЫДРЛЯЕМЬ(Х MОНОНС;„ 1(!!PI! I=I. (K1(. TOK..,,(. Т— ройс".во содер?кит сосуд 1, соединенный трубопроводом 7 с змеевиком 2, размещенным я резервуаре 3., сое: нненным с термостатом 4. сливной розе,.) " ..р 3 е за)кимом 9 Выде.!ение моюн(клеар1 ;..(:;: ..еток из крови осуществляется .:: . -:;...!!a. На первом и ятооом зта(,Г((, .1 1:,, ".:) -Н(тир); ется и Г10д(:.-Отая !ива(;" )1 . (!с .. 3! sa;.,н!О, l,.i)I Ke! О )(ерез змееВик !! 011) си 1«Г )астяОр Bep;l(lч1аз"1

110 го ?к (.л а т K н a ..) а те н "„)ea 3 M e e В и K I l р О—

Г..:. канет кровь. !Осл(че(О змеевик 2 промь1—

Ba: . р аст(. )ром ен к ::. 11 которо l со. тор?кaTся . !ОH,!,.)eапl:I I(": !!. 1 И.1.

1454386

Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно к проведению иммунологических исследований.

Целью изобретения является упрощение процесса выделения мононуклеарных клеток и увеличение количества выделяемых мононуклеарных клеток.

На чертеже представлено устройство для выделения мононуклеарных клеток.

Устройство состоит из сосуда 1, змеевиа 2, размещенного в резервуаре 3, сое- 10 иненном с термостатом 4 и сливным резеруаром 5, трубопроводов 6, 7, штатива 8, ажима 9.

Для регулирования скорости прохожде ия крови и раствора Хенкса в устройстве могут быть использованы регуляторы стандартных систем для переливания крови.

В качестве сосуда 1 могут быть испольованы стандартные флаконы объемом

50,0 мл.

При изготовлении змеевика 2 может быть 20 спользована стеклянная или пластиковая рубка длиной 5 м (предусмотренная длиа трубки оптимально обеспечивает эффект

<прилипания» клеток при прохождении крои), имеющая диаметр просвета 3 мм. Внутренний диаметр кольца змеевика 30. мм. 2 !

Соединение сосуда 1 со змеевиком 2 осуществл яется посредством трубопровода 6.

Устройство работает за счет эффекта прилипания мононуклеарных клеток на внутреннюю поверхность змеевика 2, покрытую твер- Зп дофазным желатином.

Выделение мононуклеарных клеток с использованием разработанного устройства роводится в 4 этапа: монтаж устройства; годготовка устройства; пропускание крови; получение мононуклеарных клеток. 35

Монтаж устройства осуществляется по омплектующим деталям и блокам, предва)рительно подвергнутым стерилизации. Стек„лянный змеевик 2 герметически закрывают с обеих сторон трубопроводами 6, 7. Монтаж

1 редварительно простерилизованных деталей 40

Проводят в асептических условиях.

Выходы резервуара 3 через резиновые

Шланги подсоединяют к термостату.

Этап подготовки устройства состоит в нанесении желатина на внутреннюю поверх- 4 ность змеевика 2 в качестве слоя «прилипания» мононуклеарных клеток. Для наполнения змеевика 2 используют 10Я-ный раствор желатина медицинского, предназначенгого для инъекций. Перед заполнением системы ампулу раствора желатина выдерживают в течение 5 — 10 мин на водяной бане при 50 — 60 С. Для заполнения змеевика 2 используют 10 мл 10Я-ного раствора желатина, который вводят в асептических условиях из шприца. Средняя толщина слоя прилипания желатина к поверхности змеевика составляет 0,2 — 0,4 мм. Избыток желатина отсасывают под вакуумом 0,5 атм в течение

5 мин. Внутренний просвет змеевика 2 после нанесения желатина составляет 2,2 — 2,6 мм.

Для перевода желатина в твердофазное состояние через резервуар змеевика 2 пропускают воду, имеющую температуру 10 — 15 С в течение 30 мин с последующей циркуляцией в том же температурном режиме.

Этап пропускания крови включает забор крови и введение ее в устройство.

Забор крови осуществляется стандартными методами в объеме не менее 6 мл во флакон, содержащий гепарин (125 М.Е. на 1 мл крови) . При потребности получения большего количества мононуклеарных клеток объем пропускаемой крови может соответственно увеличиваться.

Кровь вводят в змеевик 2 с температурным режимом резервуара 3 при 10 — 15 С (оптимальный режим для перевода желатина медицинского в твердофазное состояние) .

Скорость прохождения крови регулируется зажимом 9. По мере выхода крови из сосуда 1 устройство переключают на пропускание раствора Хенкса. Объем использованного раствора Хенкса регулируется заполнением системы змеевика с избытком дополнительного пропускания 20 мл для выделения из змеевика 2 неприлипших клеток.

После этого систему змеевика 2, заполненную раствором Хенкса, отключают от сливного резервуара.

Этап получения мононуклеарных клеток.

Режим водяной рубашки змеевика 2 переключают на 37 С и выдерживают при данной температуре в течение 20 мин с целью перевода желатина из твердофазного в жидкофазное состояние, после чего сливают раствор Хенкса, содержащий клеточную взвесь, в стерильные центрифужные пробирки.

Взвесь центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 мин, что обеспечивает перевод клеточной взвеси в осадок. Надосадочную жидкость сливают, а полученный осадок ресуспендируют в-избытке раствора Хенкса и повторно центрифугируют в том же режиме, Надосадочную жидкость сливают. B осадке содержится целевой продукт — мононуклеарные клетки.

Формула изобретения

Устройство для выделения мононуклеарных клеток из крови, содержащее сосуд для твердофазного желатина, отличавшееся тем, что, с целью упрощения процесса выделения и увеличения количества выделяемых мононуклеарных клеток, устройство снабжено термостатом, подающим и сливным резервуарами, штативом, жестко установленным на основании, сосуд для твердофазного желатина выполнен в виде змеевика, размещенного в резервуаре с жидкостным обогревателем, связанным с термостатом, к

l454386

Составитель В Баганов

Редактор М. Бандура Техред И. Верес Корректор И.Мтска

Заказ 7371/7 Тираж 644 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, OK — 35, Раушская наб., д. 4(5

Производственно-издательский комбинат с<Патент», г. Ужгород. ул. Гагарина, 101 входному и выходному отверстиям змеевика через трубопроводы подсоединены подающим и сливной резервуары соответственно, 4 причем последний, а также резервуар с жидкостным обогревателем жестко соединены со штативом.