Способ цитологического определения активности клеток
Изобретение относится к области медицины, а именно к онкологии. Способ предназначается для получения более точной оценки флуоресценции ядер клеток опухоли. Способ осуществляют приготовлением мазков-отпечатков из клеток гепатомы, тимуса. После фиксации мазки обрабатывают в двух режимах, при подсушивании в течение 7-10 мин. и без подсушивания. При окрашивании акридиновым оранжевым в зависимости от режима обработки у активированных клеток интенсивность флуоресценции выше, что позволяет выделить эту популяцию клеток. Целью изобретения является повышение точности способа.
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИК
1511 4 С 01 N 1/28, А 61 В 10/00
1, i jl
i iJu»si», N. Л11, I \ Д
1
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К А BTOPCKOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ ПРИ ГННТ СССР (21) 4147728/28-14 (22) 17.11.86 (46) 07.08.89. Бюл. Р 29 (71) Латвийский научно-исследовательский институт экспериментальной и клинической медицины (72) Е.А.Зренпрейса (53) 616-0.88.8(088.8) (56) Колесникова Л.И. Связывание этидия бромида ядрами регенерирующей печени крысы. — Цитология, 1979, 21.9. 1029 †10.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии.
Целью изобретения является повышение точности способа.
Способ осуществляют следующим образом.
Готовят мазки-отпечатки гепатоцитов печени и из клеток асцидной гепатомы Зайдела. Мазки подсушивают в течение 10 мин. Одновременно приго-. тавливают свежефиксированные мазки, которые фиксируют в течение 1-3 мин.
В качестве фиксатора применяют абсолютный этанол. Далее мазки промывают в воде, выдерживают в 1н. НС1 в течение 1 мин при 60 (;, повторно лроо мывают в воде, ацетатном буфере 0,1М
„„80„„1499149 А 1. (54) СПОСОБ ЦИТОЛОГИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ КЛЕТОК (57) Изобретение относится к области медицины, а именно к онкологии. Способ предназначается для получения более точной оценки флуоресценции ядер клеток опухоли. Способ осуществляют приготовлением мазков-отпечатков из клеток гепатомы, тимуса. После фиксации мазки обрабатывают в двух режимах, при подсушивании в течение
7 - 10 мин и без подсушивания. При окрашивании акридиновым оранжевым в зависимости от режима обработки у акти" вированных клеток интенсивность флуоресценции выше что позволяет вьщеt
Я лить эту популяцию клеток. Целью изобретения является повьппение точности способа.
С:
Ми (рН 4,1 в течение 5 мин) . и окрашивают акридиновым оранжевым, приготов- Ж ленным на ацетатном буфере в коицент- СО рации 10 M. При исследовании мазков флюоресценцию возбуждают ультрафиоле- пффф товым светом с длиной волны 360 нм. {;
Изучают спектр флюоресценции каждого ядра. Интенсивность флуоресценции интеркалирования при 530 нм определяют на максимуме по высоте вертикали от базисной прямой до точки пересечения кривой спектра при данной длине волны. Зависимость интенсивности флуоресценции ядер (усл. ед.) от подсушивания мазка следующая. Гепатоциты подсушенные имеют интенсивность флуоресценции 60+4, неподсушенные
1499149
Составитель Л. Стебаева
Техред JI.Ñåðäîêoâà Корректор Т. Палий
Редактор О. Юрковецкая
Заказ 4680/38 Тираж 789 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
11303 5, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Производственно-издательский комбинат Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,10!
5913. Клетки гепатомы подсушенные имеют интенсивность флуоресценции
164+13, неподсушенные — 86 7. Следовательно, неактивированные гепатоциты не меняют свою флуоресценцию в зависимости от подсушивания, тогда как активированные, т.е. клетки гепатомы, резко увеличивают свою флуоресценцию. Аналогичные результаты получены при стимуляции тимоцитов фитогемагглютинином.
Пример. Из тимоцитов готовят мазки-отпечатки. Далее мазки обрабатывают предложенным способом.
Фиксацию проводят в течение 5 мин.
При флуоресценции определяют следующую активность клеток. Контроль без фитогемагглютинина. Подсушенные мазки дают флуоресценцию 1,7+0,6, неподсушенные — 1,6+0,6. При стимуляции клеток флуоресценция равна у подсушенных 3,4, неподсушенных—
1,6. Стимулированные клетки фитогемагглютинином при подсушивании значительно усиливают флуоресценцию.
Предложенный способ позволяет по интенсивности флуоресценции в мазках-отпечатках; обработанных в двух режимах (подсушивание и без него), более точно определить активированное состояние клеток, особенно важно это в онкологии при определении характера роста опухоли.
Формула изобретения
Способ цитологического определения активности клеток путем приго15 товления мазков, их фиксации, окрашивании ДИК акридиновым оранжевым и определении активности клеток по флюоресценции ядер при длине волны
530 нм, отличающийся
>О тем, что, с целью повышения точности способа, определение активности клеток ведут параллельно на двух мазках, причем один мазок перед фиксацией сушат при комнатной температуре в течение 7-10 мин, а активность клеток определяют по разнице активности в двух мазках.
