Способ получения стафилококковой антисыворотки крови человека

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к проблеме получения донорских иммунных гамма-глобулинов и может быть использовано при иммунизации доноров адсорбированным стафилококковым анатоксином. Цель изобретения - повышение титра специфических антител и достигается тем, что для иммунизации используют доноров, содержащих антиген В-27 при отсутствии антигенов А 1, В 14 и бланк антигенов локуса С системы HLA, которые определяют на лимфоцитах доноров.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ.

COU

РЕСПУБЛИК ар 4 С 01 Н 33/531

, (. ; ц, I „; „Я,.", г (Д

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ЮТОРСИОМ,Ф СВИ4ЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ГЮ ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4023291/28-14 (22) 17.02.86 (46) 30,08.89. Бюл, Ф 32 (71) Донецкий медицинский институт им. М,Горького (72) А.С,Прилуцкий, А.А.Сохин, и А.В.Ходаковский (53) 615.375 (088,8) (56) Сб. Гематология и переливание крови. Киев, 1982, в. 17, с. 76-79. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СТАФИЛОКОККОВОЙ АНТИСЫВОРОТКИ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА (57) Изобретение относится к обласИзобретение относится к медицине, а именно к получению донорских иммунных гамма-глобулинов, и может быть использовано на станциях переливания крови при отборе доноров для иммунизации адсорбированным стафилококковым анатоксином.

Целью изобретения является повышения титра специфических антител

sa счет получения сыворотки, содержащей антитела к альфастафилолизину, являющемуся ведущим фактором патогенности стафилококков, в концентрации 6 ме/мл.

Согласно предлагаемому способу доноров определяют HLÀ локусов А, В, С, затем иэ этой группы исключают лиц, имеющих антигены Н1.А - А1 °

В 14, бланк-антигены локуса С. Имму-. нйзацию адсорбированным стафилокок-< ковым анатоксином проводят всем ос-. тавшимся донорам, при этом предпочтение отдается донооам, имеющим HLA

„.SU„„1504596 А 1

2 ти медицины, а именНо к проблеме получения донорских иммунных гаммаглобулинов и может быть использовано при иммунизации доноров адсорбированным стафилококковым анатокси" ном. Цель изобретения — повышение титра специфических антител и достигается тем, что для иммунизации используют доноров, содержащих антиген В-27 при отсутствии антигенов

А1, В14 и бланк-антигенов локуса С системы HLÀ, которые определяют на лимфоцитах доноров. т

В27. Введение адсорбированного стафилококкового анатоксина осуществляют внутрикожно, трехкратно с интервалом в одну неделю в дозах 1,0;

1,0; 2,0 мл.

Способ осуществляется следующим образом.

Определение HLA осуществляют с помощью микролимфоцитотоксического теста. Кровь, полученную путем венопункции, в объеме 2-3 мл дефибринируют лучинкой 5-7 мин, разводят в соотношении 2 ч. крови: 3 ч, физиологического раствора и наслаивают на мл раствора фиколл — верографин плотностью 1,077 г/мл. Данный раствор для выделения лимфоцитов готовят смешивая растворенный в дистиллированной воде фиколл (12 ч. 9Х-ного раствора) и верографин (5 ч. 33,9Хного раствора). Денситометром прове» ряют плотность раствора. Сразу же после наслаивания кровь центрифуги20

3 1504596 руют в течение 20 мин (при 18 С), 2000 об/мин на центрифуге К-23, Пастеровской пипеткой отсасывают кольцо лимфоцитов, образовавшееся на гра5 нице сыворотки и разделяющей смеси.

Полученную взвесь лимфоцитов дважды отмывают раствором Хенкса, концентрацию их доводят до 4-6 тыс. в 1 мм

9 и вносят в объеме 0,001 мл в лунки камеры для микротитрования, где под слоем вазелинового масла находятся различные образцы (0,001 мл) антиHLA A,В и С (используют гистотипирующую панель).

Смесь инкубируют при 22 С в течение

1 ч. После инкубации в каждую лунку добавляют по 0,004 мл смеси заранее оттитрованного комплемента. Пластины инкубируют еще 1 ч, а затем в каждую лунку добавляют по 1 мкл рабочего раствора эозина, Ваэелиновое масло через 10-15 мин стряхивают и учитывают результат по схеме: отрицательная реакция (-) — 0- 25

107. лизированных лимфоцитов; слабоположительная реакция (+)

15-207. лизированных лимфоцитов; реакция положительная (++) — 21397 лизированных лимфоцитов;

30 отчетливо положительная реакция (+++) — 40-707. лизированных лимфоцитов; реакция резко положительная (+++

+) — 80-1007. лизированных лимфоцитов.

Антигены HLA определяют, исполь35 эуя кросс-реакции А и В локусов, При наличии у донора антигенов НЬА

А1, В14, бланк-антигенов локуса С его отводят от иммунизации. Привив. 40 ки адсорбированным стафилококковым анатоксином осуществляются внутрикожно с интервалом в 1 неделю в дозах 1,0; 1,0; 2,0 мл всем оставшимся донорам, при этом предпочтение отдается лицам, имеющим антиген НЬА-В27.

Начиная с момента третьей прививки, донор с двухнедельным интервалом 10 раэ сдает плазму для производства антистафилококкового гамма-глобули на, При трехкратном определении в 50 сыворотке крови анти-альфа-стафило" лизинов в реакции нейтрализации гемолитических свойств альфа-стафилотоксина в титрах 2 ме/мл и ниже донора отводят от сдачи плазмы. В против- 55 ном случае сдача крови им продолжается через месяц (TO pas с интервалом в две недели) и после этого, -если титры антител достаточно высоки, через месяц (10 раз с двухнедельным интервалом).

Пример 1. Донор 1961 r рождения, группа крови 0(1) Rh . По данным микролимфоцитотоксического теста имеет антигены большой системы гистосовместимости А10,25; В 27, СМ2, Иммунизирован адсорбированным стафилококковым анатоксином трехкратно, внутрикожно в дозах 1,0; 1,0; 2,0 мл.

Максимальный титр анти-альфа-стафилолизинов выработался в титре 10 ме/мл.

Пример 2.Донор 1960 r. рождения, группа крови 0(1) Rh . По данным микролимфоцитотоксического теста имеет антигены большой системы гистосовместимости А2,10; В5,7; CW2.

Иммунизирован адсорбированным стафилококковым анатоксином согласно вышеуказанной схеме. Максимальный титр анти-альфа-стафилолиэинов выработался в титре 6 ме/мл, Пример 3. Донор 1952 r, роадения, группа крови AB(IY) Rh .По данным микролимфоцитотоксического теста имеет антигены большой системы гистосовместимости А1, В7,14;

CW — неопределены. Отстранен от сдачи плазмы на стафилококковый гаммаглобулин в связи с неэффективностью иммунизации (максимальный титр антиальфа-с.òàô ëoëèýèíoâ 2 ме/мл), Предложенный способ разработан опытным путем. Исследовано 126 доноров, иммунизированных адсорбированным стафилококковым анатоксином.

Вакцинацию проводили согласно пред- ложенной схеме. У данных лиц определяли HLA локусов А и В. Максимальная концентрация анти-альфа-стафилолизиноь после иммунизации устанавливалась титрацией сыворотки донора в течение всего периода сдачи им крови. Для анализа связи между интенсивностью иммуного ответа на адсорбированный стафилококковый анатоксин и антигенами большой системы гисто- " совместимости были выделены две группы привитых: 1 группа — 39 человек, у которых после трехкратного введения анатоксина антитела к альфа-стафилолиэину не вырабатывались или вырабатывались в низких титрах (2-4 м мл); 2-я — 87 человек иммуноактивные доноры (максимальные концентрации антител 6 ме/мл и выше).

Анализ данной характеристики с ис-.

Формула и з о б р е т е н и я

Составитель П.Бонарцев

Корректор Т,Малец

Заказ 5247/46 Тираж 789 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент". г.ужгород, ул. Гагарина,101

5 150459 пользованием критерия соответствия .2.

Х подмазал, что наличие у донора антигенов HLA-AI; В14 связано (р (0,01) с низким иммунным ответом (критерий

Х равен 8, 1 и 7,78), а антиген НТ.А1 5

В 27 достоверно связан (р (0,05) с высоким иммунным ответом на адсорбированный стафилококковый анатоксин.

Анализ относительной эффективности 10 иммунизации, проведенный по формуле, аналогичной определению относительного риска заболеваемости, подтвердил перечисленные выводы. Установле но, что относительный риск получения 15 низких титров анти-альфа-стафилолизинов при иммунизации адсорбированным . стафилококковым анатоксином лиц, имеющих антигены А1 и В14, равен соответственно 3,7 и 6, 1, а относительная 20 эффективность иммунизации доноров, имеющих в генотипе антиген В 27, равняется 4,5 °

С целью выяснения наличия связи 25 между антигенами большой системы гистосовместимости локуса С и характером иммунного ответа на адсорбированный стафилококковый анатоксин, проведен анализ вышеуказанных факторов у 30

74 доноров, который показал, что наличие в генотипе неопределяемых анРедактор Л. Веселовская Техред М.Дидык

6 6 тигеиов укаэанного локуса связано с низким иммунным ответом (р 0,05) .

При отстранении от иммунизации доноров с антигенами А1, В14, бланк антигенами локуса С процент эффективной иммунизации (наличие доноров с максимальным титром анти-альфа-стафилолизинов .6 ме/мл и выше) повышается с 69 до 82K.; проведение прививок лицам, имеющим в генотипе антиген В27, увеличивает эффективность иммунизации до 897, что позволяет снизить материальные затраты на приготовление антистафилококкового гамма-глобулина на 5,2Х.

Способ получения стафилококковой антисыворотки крови человека путем иммунизации доноров адсорбированным стафилококковым анатоксином с последующим отбором сыворотки, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью повышения титра специфических антител, перед иммунизацией в лимфоцитах доноров определяют антигены системы

HLA и для иммунизации используют доноров, содержащих антиген В-27 при

Отсутствии антигенов А1, В14 и бланк1нтигенов локуса С.