Способ выявления холодоустойчивых самоопыленных линий кукурузы

 

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано при создании холодоустойчивых сортов и гибридов кукурузы. Цель - ускорение диагностики и повышение надежности оценки самоопыленных линий кукурузы на холодоустойчиволсть. Поставленная цель достигается тем, что для получения белковых вытяжек используют листья 7-8-дневных проростков, а также листья таких же проростков после 4-5-часового и 3-4-суточного охлаждения, электрофорез в полиакриламидном геле проводят в катодном направлении и по динамике изменения суммы активностей изопероксидаз с относительной электрофоретической подвижностью (ОЭП) 30 и 75 определяют устойчивые к холоду образцы, которые характеризуются резким повышением суммы ферментивной активности для указанных изопероксидаз после 4-5 ч охлаждения с последующим возвращением к исходному значению к концу охлаждения на 3-4 сут. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (50 4 А 01 Ci 7 00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А BTOPGKOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4351439/30-13 (22) 30.11.87 (46) 07.11.89 Вюл. Ме 41 (71) Казахский научно-исследовательский институт з(мледелия им. B. P. Вильямса (72) И. М. (.анич (53) 632.111(088.8) (56) Петрова О. В., Мишустина П. (:. Изоферменты пероксидазы н листьях кукурузы при пониженных температурах. Физио.к)гия и биохимия культурных растений. Т. 8. 1976. .X) ) 2. (54) ((10(:ОЬ ВЫЯВЛЕНИЯ ХОЛОДОУ (. Т 0 1 1 Ч И В Ъ| Х C A Ì 0 0 Г1 Ъ| l Е Н Н Ы Х

ЛИНИГ| КУКУРУЗЪ| (57) И и)бретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано при создании;олодоустойчивых сортов и гибридон кукурузы. Цель -- ускорение диагИзобрс Tt Hèå относится к области сельского хозяйства, а именно к селекции и семенонодстну, и может быть использовано научными учреждениями при создании холодоустойчиных сортов и гибридов кукурузы.

Цел ьк) изобретен и я является ускорение диа) ностики и повышение надежности оценки самоонылеHHhlx линий кукурузы на холодоус го йч инос ть.

При.II ð. Используют самоопыленные линии различной холодостойкости: ВИР 158

3Т; 04787; Р2465; Грушевская 380; 0634;

04732; Р 215, Р1320; 04299; Р2568; ВИР

133 3Т, Р148.

Зерна н количестве 4 -5 шт. каждой линии замачивак)т в дистиллированной н ).ц и ) 7 ч при комнатной температуре, промынак)т 1%-HhlM раствором перекиси водорода и помешают в чашки Петри на нлажнук> фильтрональную бумагу. Г1оследнис ставят в термостат и проращинают при

„„SU„„1519585 А 1 ностики и повышение надежности оценки самоопыленных линий кукурузы на холодоустойчи ность Поста вленная цель достигается теxl, что для получения белковых нытяж h используют листья 7- 8-дневных проросткон, а также листья таких же проростков после 4 5-часового и 3--4-суточного îxëdæäåíèÿ, электрофорез н почин крила и идиом геле проводят в катодном

íаправлении и по динамике изменения суммы активностей изопероксидаз с относитсльной электрофоретической подвижностью (О )Г1) 30 и 75 определяют устойчивые к холоду образцы, которые характеризук)тся резким повышением суммы ферментатинной активности для i казанных изопероксидаз после 4--5 ч охлаждения с последующим возвращением к исxoдному значеник) к концу oxлаждения на 3- 4 сут.

1 постоянной температуре 28 (: в течение 7 сут с ежедневным денятичасовым освещениеM мошно TI K) 5000 лк. После этого отрезают часть листа одного из растений, а чашки

Петри с проростками переносят н холодильнук) камеру и выдерживают там при

8--9"(. н течение 4 сут. 11О прон)естнии

4 ч опять отрезают часть листа и третьк) пробу берут в конце охлаждения (4 oóò) .

Отрезанные листья из мел ьчакгг каждый н отдельности, отвешивают по 100 мкг каждой пробы, приливают llo 500 мкл x()лодного буфера, содержащего 5 мм трист I, 38 мМ глицина, 30% сахарозы, р Н 8,3. расч ирак)т и фарфоровой ступке и ставят в хс)лодильник на 0,5 4, После этого гомогенат центрифугируют при 10000 g н TL"÷åHHå 20 мин и надосадочную жидкость используK)T для электрофоретическогn разделения.

Электрофорез в катодном иапранлеHии проводят н 5%-НоМ концентрирх K)HK il и! г 1<) г)(,1,1< r)l I>

>« I I

< (<

<»l,<

I< rr I l

<()ri /7 ill, )ll l I «)< )I)< / < H Wl()1 t (If t,!1

ЛЕTI(33(t<)CTb ) СЛ . P:I, .

;о охлаж- по еле ч ч

) ITC>Cl1P. ) C VT охлажде ни я

51г) (00

P - ) г) ">

1 ()10

1100

I (I ) » ) )1 ();1 < ((I HI()I I < I It<), I If

1, ;!< (и(:.кi! j)il (ч(ро(! 12() 120 ) >)ч 11(1,((),>r ) riih(н;)н<)«Я I II() )О xl KK I l((),1 ) 1(ни<) () (и>р;«ц.lh I .-).I(I f)<>

< » IIII Ir j)>! . h < II II II 2 f)t ) H II < ll ll(I <) h ir ;)I) 1 < ! 1, (1 3< I I . .I I < I 1 I ) I h I I i I r > I < 1 < I I (<, >,, ) I I I 1 ) I I

il)1 I)r))I rh (. !Ill!< l)f)() 1.) II Il. !(i(> K il 1 )If <1.<) 1 I(><, I(< К > I !II !III )! ).1 « К I 1)(>(j)<)! « I « II! <> « )()f()t Н 1< (», 1) < >,(и н <)1, и «, l<>l <>

< ) « « l (l r I I, < I ) l I < () l < ) 1 3 . l < i!fr < > l < > l I, I, t < I < I ; l I f I < ) ) l (>) « I)1I 1.7. >н! ((I f>, f "„н< (и р l(1 и)р к<1 11 ц > (r>1>ri,(;I 4;I1((l <.Ill Ilr)(l< .It;ll<)(В

1 1 !Ilh !(< 1 I II II 1«1<)I « кнни(> <, и >1, i) >(I< i!!(I,f(),1;! )< РI!<)I о I((r),l l о 1(I 1>il (< И< 1< > »(и(<) 1 < (И I )) < . I rt.< I I «, l!! II Ir< ()II()HI)III ., I j K ) r ) I I I I )

<<1,,<\1),,) !1) (Р )

1 >, 1< Il <()(!)(Р Xl(II I ((I >Ir (II: i . 1 1< K I )(>lf)r ) р< tl I(fx<) tf II(>, (1< !) rh it<))«11) l<>

) < ) Ц 1 < ) р < ) и <, > р ; ) к 1 (! ) I I I Ill If )(> < 1 > (1 >-< ) - I ) ) I ) f K I < I ) ). I() ii) < < I I; ii 1 It, f > (, (l t < l I

< -)1 i !< И,« )<, К<И .;! <1 (!

<))о )1(, I !i) I ), ) )О(,! (>III!

) »,l,(;)() Ц;! н >,l Ilil > .. 1)<>rf><>f>(I f>it )I )1,<, Ц!)(и Ц. I(Il tl >, I) r 1< >) < I I ) II r t i Hl I 3 И(Н (ll< р<)

< tI I I < () ->I I )(! I ) ) «K I KIl!В ll<)I It )i!><) 3<> (и (< f ) ) l l t H < I Ill < f < р r l, (3 : < > < ) f ) I < I lit (() < ) . ! /! (« Н (и (>(>f>;I !I1! I !r<) . Iitrh ((ll

Il < ><1 I(.1 < X I « ),. l;I rh. (< Il lt rr I I f > ll -> 1<) «И (,() i< ) i (I () I) I I< I), к Ill ll lf lt к(1 )) f) 3 II«,< > I)l I, H< . I1I l(lllI« N 1 1! . I <) н(« . и !!K<) I I ilh I lfltll()« I II ) .I I:,, < « t!)Kt 1>l! I)l <

1„11 (,I „K<>l<>1) j < I ll (I« f .< ) (И! !<г Ir< f)H< I,< I<()r! Ц(.Ill ill(i<)I, <), I r i< K )<, rf><)f>;1 i) I )1(< I < ! () 1>;I .I ll« (>,l 1!)I II I III!!I()< I (ll

< I< р(<,(;) I,I ) ЦII,;(>11, (о 1 < N 1 () X 1;1,1, и (,;, (II(),i >. l<); < I ) if!Is!I), <)()r);r!l(rr H н<)<, (<

> I <) I;Irh, < IIII" н f» Il <> I!11 < ll I (3 <1 1()1

I II < I (II (I;I < H,I fr (I I)I 3 II

1 < >1,1«, I I ()1 ft;I Ill t l i!<. I В< ) < f >)I < 1;< 1, l (< <, I I 1 l l)l l!; )l(II < Ir ll и < < Ч 1, (И I(ll <» К) )» (,! <) < Hi< I Ц К Кit I() III I ) II < >ll(f <>(«Il .,I (),-)11 Л<(Il r,> .Ill(II < Ir I, >!Я>

К ) > Ц h )i 3 > < < I I I 1 (> 1 ; (1 < < I H I I < 1 < ) ).. 1 i I rt< (< I I I,,> I

11,>!11<(. 111)1 1< I;I<> ИI(<

1 < >< (;I ; I < (11 и(< l t < ><()< ) 1(1)(Я 1(1«н )! и <<). (о

)»f . X;IIII II II h К(р((Н(>!\ I rl !1 I р(Степень холодосто!1(коет)3 ц11Р 1 ) ) i). Yo:(одос то!(кая

« -») r <) .) коli 1р(!Ц«(f)()1)ы(11(ltи кки

Р,>(!(IIII И <((РЕ 3 Н««(,О, It)h<) Ч(1 ()H НО«.1((3()Ë,и Й(гги! Я ниак() (ill(1);I гl13(f()I ("(1)(«(а « ll()< . Ir, (< Н)и(И )! И <(.И! Н I H I(ll(>(Ill!)l )! И ИЗМ(Н(НИЯ Л! И

В < ll(ТЕ. >1(() hit (.1 И Т(. 1() lit > 13()C(1

; 1 к и и Й, if 1 () It h r ) I I (< I I I() I c t (. T(н (3 . о It(1

«и(>(В!)! Р(l ж(IIII «В и < 1(н(. ll Ill! i!KTII Вн()«г(. Й, (I 3 ), I f I 1 1 I (I I I >I ., I 1 . 3 () 1 I (1 ) (> к « I I;) (I 3, 1 ! « г t) t. H I 1 Р (>—

f)< )<."I к() H г 3 1(H(II Ital а! 11) II f)() I (((Cо Ц <, . I II Il II u

Р;13.(и III()Й x().I(),((>l« I <)è !Ицо« I и !IÐ(>è(x<) (Я1

I1() Рн.<(I ()»f <, .

11 ll().lH 3<)HrI (lit(. ll f)<.,(.1 ll !(t()I() «ll()(о<>;! ! 3 () (и и, (Н И и . < О «1 О, (О ) (I (> t I I l l It I)l Х « < f (> (i I f I) I if « I I

Ill)l . I lf (I ff И h ) К Р !I)l ll(> < f)i((3(I«IIIIК)

lI 313(< I II I)l 3! Il(> !f3<), I)I(1 II;I (И! IIII >!(I,1()lf() Ы (И(,1(15 <«1>(ll (--);) н(г) В 1(I(l!1((!I 1(),tн(!I <и(р(.И! I ),(> 1() l l l If(t(f<)IIIII) (rl <>(>Р;)

1 Ц, ) K < р ) Il)l I ) < !3 и ) l! Ц I « 1, 1 I < > 13 h )<r > к < и, (! ) ) < I I(), I I ) t X Н > I (Я и

H ! I Н (,! < I I t()(! )(f ) <1 (I I I I I . H ((l() » (I I (C Я (I 3 < )< I < Н ; >—

I fI!(Иц к ) 1, ) р) !1)l ())< (> Ill ) . ) 1. ), fill < н >к . 1< НИ(),<>. I(r, (<>< I <)f1 (i I II< If l r. и

< fr(I<; l() f>lЯ f (. II(I If;1 II<)(>t) f))l >и и h), h i

Р((,1 .I <>< r>r> !31)!ЯЦ, I(H И и X<),!r .((><((.

< iI <ЦН)И!1,1(ни(1 litt

l l!) < ) f), I l!. l I< I )! II(<(;> I I r j! ll (>f1 l Ir )!;I. l l) ft I,I X

«,!. 1< Р,I I j >;r,, Ц > .< И< > ) I I)ir) .! < IIII(1,! И> . (XIIII р;! I ) 11,<(III. Ilr), I(« .Ill(<>< .,>)<)Ц<). <(>r) r< I! I« К))< <

< Ill« II!<>II< р«» I! .,<, l lr«rlrr (и;)Нн < (1. I I <), < ll(,! I)l > . <,г,<) f r, "

iIr )i< 1)! 1! ),< (1< >),.: <,!

>< Н !<(и, IIIIIIIII i) X l,< !)< ) . 1»I i,< i )

1 3 < " I I . (. и if< ) 1 < < r < I I ) <, !. r ) I ) r,!, ;, ) ), <

Зс, ! Г1 Н .

° I t I< rti (l l < 1 I tl I И < i f I <, rh t. It! ) I ) I ) r ) i h ) ) и !

1< I(1 > нr«(IВ(>I <) tl .) 4 <, I< ,, (;1,+„(«НИ rl, ).1(h! 1>ОФОр(< Ц II().1И;1 Кри, (if It!!<(I I < > (! I < I (! < 1 ) < ) Ц < ) (и I I 3 h i I ) > 1 I I < > 1 I I < I I ; > ; I !3 . <. l I i! t t

Д 0 ll !Ii (! IIII 3111 h (И 3 >1(II(lilt il (< <1 >1()! » ) 1 fl H < (ll II,r < I I(р(>к(II .;I « о 1 н()« ll I <, I 1) H() ll .> I(h 1)< >

< >r iI)< I II !(< h<>11 II(> (:.>1rh Ir<>< I1 Н>,))) 11

I(,< )lI()I « l()Il 1f!13! 1(h )>,I(> I « )t)f) l <.1! ! I)! Ц,(Я, lit) ()IIII );1 Р Н К Г(f>II « Н )! < и () ) И )

Il<) H l (ill(if!1(! < i 3Ii(II)l (j))l(ll I iI 1 H ltI,

II(>< I Ir,(,1 Я < h )I ll(f )<> к < I (;) < и <)<1 О,. I,, I;h (< H Il H « II< ><1(<., () К >,ll tt < H(< Ц,!

ll (<, Ill!((!,h И< ),<) (Н<) )1> 3 ll;I

1519585

Продолжение таблицы

Лктив!3ость, усл. ед.

Степень холодостой3кост31

:13313,3Ч пс>с:l с - г ут дО Ох. !аж ПОс:Ip 4 охлажде !!!!я Ох l жл е !в я

ДЕ!!Ил

Среднехолодостойкая

Среднех(-лодос тойкая !

1ехолодостойкая 3" i!

450

С()С! ill)It!I. . !л 1 (II liitl

1 с . ! ) л (р 1 t ) ()t ) t () I(it 1 с х рс l l . 1 3 с t» i К );>рс t,a(i!) . I I l,i

3;It;t «)t) I l,> )1 р,! л !>21 1 I (> . I l I 1 i r I i i(13 1 ! 1! 11 ! ()с 1 .с,) р с !)с lttli)i() t>(»tt I(. t;t II() tt (()в » I i . (ti>l ) tl (I л !)I I I ) t >I . Iii I ° 1 1 1

I 1,3ttÇ,>, Ч()i t tt,i, Ж 3,>, I,:) л,)>(tt,t(), ll!)(ill)(>(,)сTII(till(i ill l ll(.(ы t )III л >tt>tttt I. 111 I li lil . I ) л! (, ) t. I 1,)(,(;

ГP>> lilt в— ская

063)

04732

Р215

Р1 3."1

) (.) Q . 568

И1Р 1 33

3Т

Р1-48

450 а ) и

301

150

58, 37!

4 7(л 80