Способ определения триптофана в спирторастворимых белках зерна

 

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к селекции на качество зерна, а также аналитической химии. Цель изобретения - улучшение условий и повышение производительности труда при одновременном снижении количества анализируемого образца. В навеске муки растворяют белок путем экстрагирования его раствором 0,1 - 2,0 н. КОН в 60 - 90%-ном этиловом спирте, осадок отделяет центрифугированием. Затем ведут фотометрирование при двух длинах волн, соответствующих областям максимального поглощения триптофана 280 нм и тирозина 295 нм, причем о содержании триптофана в белке судят по отношению полученных экстинкций по калибровочному графику или уравнению регрессии, при этом чем больше величина указанного отношения, тем выше содержание триптофана в белках зерна.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (д1) 4 Л 01 Н 1/04

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АBTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОПНРЫТИЯМ

ПРИ ПЛАНТ СССР

1 (21) 4235307/30-15 (22) 27.04.87 (46) 15.12.89. Бюл. к: 46 (71) Научно-исследовательский институт сельского хозяйства ЦентральноЧерноэемной полосы.им. В.В.Докучаева (72) Д.Д.Калинников (53) 63 1.52(088.8) (56) Методы биохимического исследования растений. / Под ред. А.И.Ермакова, Л.: Колос, 1972, с.313-314. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТРИПТОФАНА

В СПИРТОРАСТВОРИМЫХ БЕЛКАХ ЗЕРНА (57) Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к селекции на качество зерна, а также аналитической химии. Цель изобретения улучшение условий и повышение произИзобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к селекции на качество зерна, а также к аналитической химии.

Цель изобретения — улучшение условий и повышение производительности труда при одновременном снижении количества анализируемого образца.

На чертеже изображен калибровочный график.

Спирторастворимые белки являются преобладающей фракцией в белковом комплексе зерна злаковых растений и отличаются низким содержанием триптофана. Для селекционного улучшения этой фракции необходима разработка способов, позволяющих проводить массовую оценку генотипов на содержание триптофана в спирторастворимых белках.

„„SU„„1528394 А 1

2 водительности труда при одновременном снижении количества анализируемого образца. В навеске муки растворяют белок путем экстрагирования его раствором 0,1-0,2 н, КОН в 60-90Хном этиловом спирте, осадок отделяют центрифугированием Затем ведут фотометрирование при двух длинах волн, соответствующих областям максимального поглощения триптофана

280 нм и тирозина 295 нм, причем о содержании триптофана в белке судят по отношению полученных экстинкций по калибровочному графику или уравнению регрессии, при этом чем больше величина указанного отношения, тем выше содержание триптофана в белках зерна.

Все имеющиеся способы определения 2 триптофана требуют использования больших количеств белка (50-100 мг), что исключает их применение на ранних этапах селекции, когда как раз необходимо отобрать генотипы с повы шенным содержанием триптофана в запасных белках.

Способ осуществляют следующим образом.

Взвешенную на весах навеску белка (большая точность при этом не требуется, так как количество белка в растворе практически не влияет на полученный резуль тат) помещают в стеклянную центрифужную пробирку, запивают 5 мл спиртового раствора щелочи, например, 0,1 н. КОН в 802-ном этиловом спирте. Концентрация спирта может варьировать в пределах 60-90Х, в част1528394 ности спирторастворимые белки кукурузы лучше всего растворимы в 80 .-ном этиловом спирте. Концентрация щелочи может варьировать в пределах 0,1

Z 0 н., но лучше брать нижний предел из-за экономии реактива. Дальнейmee снижение концентрации нежелательно из-за возможности нейтрализации щелочи углекислотой воздуха, т.е. возникают ограничения по времени пронедения анализа. Содержимое пробирки тшатечьно перемешивают стеклянной палочкой до полного растворения бел— ка (2-3 мин). Пробирки центрифугируют при 3000 об/мин для осветления раствора.

Раствор белка заливают в кювету и фс>тометрируют при двух длинах волн в ультрафиолете, например 280 и

295 нм, Контролем служит растворитель т.е. спиртовой раствор щелочи. )1лины вол. подбирают таким образом, чтобы они нахОдились в пределах спектров поглощения триптофана и тирозина. 11ри 2 этом наибольшая чувствительность достигается использованием длин волн, соответствующих максимумам поглощения этих аминокислот в спиртовом растворе щелочи .

Содержание триптофана в спиртора30 створимом белке определяют по заранее составленному калибровочному графику, в котором по оси ординат отложены отношения экстинкций (например, Е, Е ), а по оси абс- 35

zso цисс — c.îäåðæàíèå триптофана в белке в процентах или любых других единицах., чя оставления калибровочном го .ðàôèêà используют набор препа— р".òîâ белка с заранее известным и 40 неодинаковым содержанием триптофана.

П р и ì å ð. Навеску белка (3 мг) помещают в центрифужную пробирку, заливают 5 мл спиртового раствора щелочи, -uiàòåëüíî перемешивают стеклянной палочкой до полного растворения белка, центрифугируют Ь мин при 3000 об/мин. Затем полученный раствор фотометрируют дри 280 и

295 чм. 11ри 280 нм получают величи- 50 ну экстинкции 0,604, а при 295 нм0,719. Находят отношение

Šzoo Π604 — — — — 0,840

0,719

Содержание триптофана в белке находят по калибровочному графику (см. чертеж) или уравнению регрессии (оно составляет 0,224 ).

Преимущества предлагаемого способа в сравнении с известным следую-. щие; повышается производительность труда аналитика в 3 раза и снижается себестоимость анализа на 50-60 .; улучшаются условия труда, так как отпадает необходимость использования концентрированной соляной кислоты; снижается необходимое для анализа количество белка до 1-5 мг, что позволяет использовать способ на ранних этапах селекции.

Формула и з обретения

Способ определения триптофана в спирторастворимых белках зерна,включающий взятие навески муки, растворение белка, отделение осадка, фотометрирование и расчет содержания триптофана по калибровочному графику или уравнению регрессии, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью улучшения условий и повышения производительности труда при одновременном снижении количества анализируемого образца, растворение белка производят путем экстрагидрования его раствором 0,1-0,2 н. КОН в 60-90 -ном этиловом спирте, осадок отделяют центрифугированием, а фотометрирование ведут при двух длинак волн, со ответствующих областям максимального поглощения триптофана 280 нм и тирозина 295 нм, причем о содержании в белке су,дят по отношению полученных экстинкций, при этом чем больше величина указанного отношения, тем выше содержание триптофана в белках зерна.

РУ2

0д % троптофана

Составитель Л.Квардакова

Редактор M.Ïåòðoâà Техред Л.Олийнык КоРРектоР В.Кабаций

Заказ 7525/3 Тираж 621 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-ÇS, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óærîðîä, ул. Гагарина.101