Способ получения меченных тритием пуриновых оснований

 

Изобретение касается получения меченных тритием соединений, в частности пуриновых оснований, используемых для синтеза нуклеиновых кислот в биохимии. Цель изобретения - увеличение молярной активности и упрощение процесса. Последний ведут изотопным обменом с тритием (газообразным) при 170 - 210С в присутствии катализатора Pd/BaSO₄, на который предварительно наносят соответствующее пуриновое основание, например гуанин, ксантин или гипоксантин. Молярная активность целевого продукта повышается в случае использования гипоксантина в 80 раз. 5 табл.

Изобретение относится к получению меченных тритием биологически активных соединений - предшественников синтеза нуклеиновых кислот. Эти соединения применяются в исследованиях по молекулярной биологии, молекулярной генетике, экспериментальной медицине. Целью изобретения является увеличение молярной активности и упрощение процесса. Способ иллюстрируется следующими примерами. П р и м е р 1. Получение меченного тритием гуанина. В реакционную ампулу из стекла объемом 4,9 см³ помещают 2,27 мг (15 мкмоль) гуанина, нанесенного на 45 мг катализатора 10% Pd/BaSO₄. Нанесение вещества на катализатор производят упариванием досуха суспензии катализатора в растворе гуанина, подкисленном соляной кислотой. Ампулу откачивают до давления менее 10^-3 Topp и напускают 7,6 Ки 98% -ного трития. Затем нагревают ампулу до 170^оС (масляная баня). Через 1 ч ампулу охлаждают и удаляют избыток газообразного трития. Продукты реакции смывают с катализатора водой и удаляют лабильный тритий упариванием в вакууме при температуре t= 37-40^оС. Целевое соединение выделяют известными методами, например, используя жидкостную хроматографию на колонке с сефадексом G-10 (d 1,8 см, 1 100 см), элюция водой 25 мл/ч. Получают 2,5 ГБк (68 мКИ) меченного тритием гуанина с молярной активностью (A_мол) 0,23 ПБк/моль (6,1 кКи/моль). Химический выход 71% , радиохимический 6,5% . Последующие примеры характеризуют способ при других температурах проведения реакции (см. табл. 1). При проведении процесса по примеру 1 при 210^оС гуанин получают с молекулярной активностью 22,3 Кл/ммоль, что составляет 366% от приведенной в примере 1, с выходом 72% . При проведении процесса при 220^оС гуанин получают с молярной активностью 22 Кл/ммоль, что составляет 366% от приведенной в примере 1, с выходом 75% . П р и м е р 6. Получение меченого тритием ксантина. В реакционную ампулу из стекла объемом 4,9 см³ помещают 0,9 мг (6,0 мкмоль) ксантина, нанесенного на 20 мг катализатора 7% Pd/BaSO₄. Нанесение производят упариванием суспензии катализатора в растворе ксантина, подкисленном соляной кислотой. Все дальнейшие операции аналогичны описанным в примере 1. Реакцию проводят при 180^оС 120 мин. Получают 3,77 ГБк (102 мКи) меченного тритием ксантина с А_мол 0,89 ПБк/моль (24 кКи/моль). Химический выход 71% , радиохимический 15% . Последующие примеры характеризуют способ при других температурах проведения реакции (см. табл. 2). П р и м е р 11. Получение меченого тритием гипоксантина. Все операции аналогичны описанным в примерах 1 и 6. В реакцию берут 0,7 мг (5 мкмоль) гипоксантина, нанесенного на 15 мг катализатора 10% Pd/BaSO₄. Реакцию проводят при 205^оС 120 мин. Получают 6,4 ГБк (172 мКи) меченного тритием гипоксантина с Aмол 1,89 ПБк/моль (51,2 кКи/моль). Химический выход 67% , радиохимический 43% . Последующие примеры характеризуют способ при других температурах проведения реакции (см. табл. 3 ). Все полученные в примерах 1, 6, 11 соединения имеют высокую радиохимическую чистоту (более 95% ), определенную методом тонкослойной радиохроматографии в системе: ПЗИ-целлюлоза (Merck), вода и целлюлоза - F (Merck) бутанолуксусная кислота - вода (2: 1: 1). Чистота ксантина и гипоксантина подтверждена энзиматическим превращением их в соответственно ксантозин-5-монофосфат и инозин-5-монофосфат, меченные тритием. Молярная активность полученных при этом соединений практически не изменяется. Таким образом, способ позволяет получать новые меченные тритием пуриновые основания с высокой молярной активностью при использовании BaSO₄ в качестве носителя палладиевого катализатора. В табл. 4, 5 приведены показатели молярной активности получаемых соединений при использовании CaCO₃ и Al₂O₃ в качестве носителей. (56) Авторское свидетельство СССР N 1184233, кл. C 07 B 59/00, 1983, н/п. Evans E. A. Tritium and its Compounds. London, 1974, p. 302-303.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МЕЧЕННЫХ ТРИТИЕМ ПУРИНОВЫХ ОСНОВАНИЙ изотопным обменом с тритием в присутствии катализатора платиновой группы, отличающийся тем, что, с целью повышения молярной активности и упрощения процесса, в качестве катализатора платиновой группы используют Pd/BaSO₄, на который предварительно наносят соответствующее пуриновое основание, и процесс ведут при 170 - 210^oС, используя газообразный тритий.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 02.07.1994

Номер и год публикации бюллетеня: 6-2002

Извещение опубликовано: 27.02.2002        

---