Способ определения иммунологической блокады лимфоцитов

 

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и предназначено для определения иммунологического статуса человека. Цель изобретения - повышение точности определения в крови количества иммунокомпетентных клеток, несущих FC - γ=рецептор. Клетки крови подвергаются процедуре деблокирования рецепторов в процессе инкубации при 37°С в течение 60 мин, а определение клеток, присоединяющих агрегированный иммуноглобулин G, осуществляется как до, так и после процедуры. Последующее сопоставление этих данных позволяет делать вывод о наличии блокирующих сывороточных факторов и, следовательно, выводы либо о дефиците рецепторов, либо об их блокаде. Способ целесообразно использовать как при клиническом, так и при поликлиническом обследовании больных.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

PECflVS JlHH (1) G 01 N 33/53

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И OTHPbfTHRM

flPH ГКНТ СССР (21) 4266376/28-14 ! (22) 19.06.87 (46) 15.04.90. Бюл. 14 (7l) Московский медицинский стоматологический институт им. Н.Е. Семашко (72) Е.И. Соколов, Г.Л, Неугодова, В.А. Алешкин и П.В. Глан (53) 615.375(088.8) (56) Pornukek L., Veticka V, Fc-receptor Nore auswermore question, Folie microbiol 1984, ч. 29„ P- 6, р. 479"484. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИЖ(УНОЛОГИЧЕСКОЙ БЛОКАДИ ЛИИФОЦИтов (57) Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и предназначено для определения иммунологического статуса человека. Цель

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, предназначено для изучения иммунного статуса человека.

Цель изобретения — повышение точности определения в крови количества иммунокомпетентных клеток, несущих

Рс- -рецептор, оставленная цель достигается тем, 4 что определение количества Fc ) -клеток проводят не только со свежевЫделенными лимфоцитами (при 4 С}, но и с лимфоцитами, предварительно инкубированными при 37 С в течение 1 ч; увеличение показателя во второй группе по сравнению с контрольной первой группой означает наличие иммунологической блокады рецепторов лимфоцитов в исходном состоянии.

2 изобретения — повышение точности определения в крови количества имиунокомпетентных клеток, несущих Fc-I% -рецептор. Клетки крови подвергаются процедуре деблокирования рецепторов в процессе инкубации при 37 С в течение 60 мин, а определение клеток, присоединяющих агрегированный иммуноглобулин С, осуществляется как до, так и после процедуры. Последующее сопоставление этих данных позволяет делать вывод о наличии блокирующих сывороточных факторов и, следовательно, либо о дефиците рецепторов, либо об их блокаде. Способ целесообразно использовать как при клиническом, так и при поликлиническом обследовании больных.

Способ осуществляется следующим образом.

Из 10-,20 мл венозной крови с антикоагулянтом выделяют лимфоциты по общепринятой методике. Концентрацию в забуференном фиэиопогическом растворе (3 ФР) отмытых 3 раза лимфоцитов доводят до 5-7 млн клеток/мл.

По капле (0,1-0,2 мл) этой сус" пензии наносят на четыре покровных стекла, покрытых полимерной пленкой !!формвар". Стекла помещают во влажную камеру. Первые два стекла инкубируют при 4 С 5-15 мин, чтобы клетки прикрепились, отмывают 2 раза в ЗФР с рН 7,?. Первое стекло (контроль, 4 С) окрашивают по известной методике меченными ФИТ11 антителами против XgG человека и готовят препарат для микроi 557527

СЛ, Пример

После инкубации при 37 С в течео ние 60 мин (контр. .37. С + arpIgG) 6,0+1,6 51,0+2,9 р<0,001

25,0+1,7 25,3+1,9 р>0,05

Количество клеток, присоединивших

ar yIgG

45 скопирования. На второе наносят О,1.0,2 мл раствора агрегированного IgG (arpXgG) концентрацией 150"250 мкг/мл в ЗФР. ArplgG готовят по известной методике нагреванием при 63 С и ис" пользуют фракцию с константой седимен. тации 19S. Второе стекло с нанесенным агрегатом инкубируют ве влажной камере при 4 С в течение 60 мин, отмы:10 вают тщательно в ЗФР и окрашивают, как первое стекло, Третье и четвертое стекла с нанесенными каплями суспензии инкубируют при 37 С 60 мин, тщательно отмывают

ЗФР. Третье стекло сразу окрашивают, как первое (контроль, 37 С), а на четвертое наносят arpXgG и далее поступают, как с вторым стеклом. Полу.ченные четыре препарата оценивают на 20 люминесцентном микроскопе, определяя относительное количество светящихся лимфоцитов {СЛ), В каждом препарате просчитывают не менее 3 раз по 100 клеток и вычисляют среднее значение 25 (СЛ), Результаты, полученные предлагае-мым способом, на лифоцитах здоровых и больных людей представлены в таблице, Способ поясняется примерами.

П р и и е р 1, БольнаяЛ., поступила

:в клинику в связи с возникновением бронхоспазма. У больной повышенное количество клеток, несущих Fc-р (45 ), но все они были заблокированы, т.е. не выполняли свою функцию.

Пример 2. Больная П,, поступила в клинику с обострением инфекЦНОнно зависимой .бронхиальной астмы 40 тяжелого течения, гормонозависимой.

У больной высокое количество клеток, несущих Ус-р„ но они также заблокиро-, ванн.

Без инкубации (контр. 4 С + arp7gG) Пример 3. Больная Ц. Наблюдалась амбулаторно по поводу субфебрилитета. Количество клеток несущих

Fc-р, нормальное, рецепторы функционально активньг.

П р и м e p 4. Больная Ч, Обследована через год после успешного лечения инфекционно-аллергической бронхиальной астмы, Количество клеток, несущих Fc-p, нормальное, все они функционально активны.

Результаты, полученные на лимфоцитах здоровых людей, показали,что у здоровых лиц количество клеток, несущих Fc-p, сильно варьирует, но сами рецепторы находятся в активном состоянии.

У тяжелых больных в состоянии обострения Fc-p активно экспрессиру" ются, но находятся в состоянии дисфункции. Для клинической практики важно контролировать формирование функционального дефицита. Предлагаемый метод позволяет выявлять функциональный дефицит Гс-р при отсутствии истинного дефицита.

Формула изобретения

Способ определения иммунологической блокады лимфоцитов путем определения в крови количества клеток, несущих Рс-f-рецепторы, с помощью аггрегированного иммуноглобулина G,. отличающийся тем, что, с целью повышения точности, параллельную пробу лимфоцитов перед определением дополнительно инкубируют при о

37 С в течение 60 мин и при увеличении количества лимфоцитов, несущих

Fc-It-рецепторы, по сравнению с конт-. ролем без инкубации определяют. наличие иммунологической блокады, 1557527

Продолжение таблицы

CJII Х

Пример

После инкубации при 37 С в течение 60 мин (контр, 37 C„+ arpIgG) Без инкубации (контр. 4 С + агрХ8С) П р и и е ч а н и е. 1. р — достоверность различия показателей в контроле и после добавления

arpI G. 2, Показатели даны в виде к +6.

Составитель И, Башкаев

Редактор Л, Веселовская Техред Л.Сердюкова

Корректор В. Гирняк

Заказ 716 Тираж 508 Подписно е

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r Ужгород, ул. Гагарина, 101

11 в 1-"1 ° 5 10э9+1 «6 р 0,05

2,3+1,0 15,1+1,4 р(0,001

12,8

8,9+1,9 25,0+1,7 р(О,ОО!

16 1!

0,6+1,7 .3!,3+2,5 раО, 001

2,0+О 16,О+1,6 рс0,001

8,7+1,6 24,8+2,2 р(0, 001

16,1