Способ определения хронических поражений печени алкогольной, аутоиммунной и вирусной этиологии

 

Изобретение относится к медицине, в частности к гепатологии. Целью изобретения является повышение точности способа. Для этого из периферической венозной крови получают обогащенную лейкоцитарную взвесь, из нее готовят мазок на предметном стекле и проводят гистохимическую реакцию на активность альфа-глицерофосфатдегидрогеназу, используя в качестве акцептора протонов N - нитротетразолий фиолетовый. Затем подсчитывают число гранул образовавшегося формазана в 50 лимфоцитах и выводят средний показатель активности фермента. При увеличении активности на 20% и более относительно нормы диагностируют хроническое поражение печени алкогольной, аутоиммунной или вирусной этиологии. Точность способа составляет 96,7%.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

Ц

РЕСПУБЛИН

09 011 Ц1) G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОИРЕтЕНИЯМ И ОТКР1ЫГИЯМ (2l). 4256415/28-14 (22) 15.06.87 (46) 23.04.90, Бюл. 11 15 (71) Вильнюсский государственный университет ю . В.Капсукаса (72) И.Й,Крикштопайтис, Д.Й.Спейчене, Р,10.Àíóñÿâè÷åèå и Т,И.Семухинене (53) 616.07(088.8) (56) Мансуров Х,Х., Мироджов Г.К., Ладная М.М, Метаболизм коллагена в печени при хронических диффузных ее поражениях, - Сб. Успехи гепатологии.

Под ред. А.Ф.Блюгера,- Рига, РМИ, 1981, с, 25-38. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ХРОНИЧЕСКИХ

ПОРАЖЕНИЙ ПЕЧЕНИ АЛКОГОЛЬНОЙ, АУТОИИИУННОЙ И ВИРЬСНОЙ ЭТИОЛОГИИ (57) Изобретение относится к медицин

Изобретение относится к медицине, а именно к гепатологни;

Цель изобретения - повышение точ.ности способа, Способ осуществляют следующим образом.

1 ° 6 мл венозной крови пациента наслаивают на 0,4 мл З,SX натрия цитрата и оставляют на 20 мин при комнатной температуре. На поверхности осев,шей эритроцитарной массы образуется белесоватый слой лейкоцитов, который снимают пастеровской пипеткой и из него готовят мазок на предметном стекле. Мазок фиксируют в ацетоновом фиксаторе 35 с, Состав ацетонового фиксатора: 50 мг трилона Б, 120 мл ацетона и 80 мл дистиллированной воды

2 не, в частности к гепатологии, Целью изобретения является повышение точности способа. Для этого иэ периферической веноэной крови получают обогащенную лейкоцитарную взвесь, из нее готовят мазок на предметном стекле и проводят гистохимическую реакцию на активность альфа-глицерофосфатдегидрогеназы, используя в качестве акцептора протонов и-нитротетраэолий фиолетовый, Затем подсчитывают число гранул образовавшегося формазана в 50 лимфоцитах и выводят средний показатель активности фермента. При увеличении активности на 20Х и более относительно нормы диагностируют хроническое поражение печени алкогольной, аутоиммунной или вирусной этиологии.

Точность способа составляет 96,?Х.

t (рН 5-5,2), Затем мазок промывают дистиллированной водой н подсушивают.

После этого погружают в стаканчик с инкубационной средой;и ставят в о термостат на 1 ч при 37 С.

Инкубационную среду готовят следующим образом. Вначале готовят среду без субстрата: смешивают 300 мл фосфатного буфера (рН 7,2-?,4), 0,078 г трилона Б,и 0,078 г и-нитротетразолия фиолетового, фильтруют и хранят в холодильнике ° Затем приготавливают инкубационную среду с субстратом: в 40 мл среды без суб» страта (рН 7,2-7,4) добавляют 0,67 r динатриевой соля В-Ь.еб-глицерофосфата. Хранят в холодильнике. Перед употреблением подогревают до 37 С.

1559294

После инкубирования мазки промывают проточной дистиллированной водой и сушат при комнатной температуре, Высушенные мазки окрашивают 0,25Х"ным раствором Janus Griin от 15 до 60 с, после этого повторно промывают и подсушивают, Считают число фиолетовых гранул формазана в 50 лимфоцитах под световым микроскопом с иммерсион- 10 ным объективом (увеличение в 900 раз) и выводят средний показатель активности альфа-глицерофосфатдегидрогеназы,. определяемый как среднее число фиолетовых гранул формазана в просчитанных лимфоцитах, Определение длится 3-4 ч, Активность альфа-глице-, рофосфатдегидрогеназы у здоровых людей составляет 9,2420,63 гранул в лимфоците (30 чел).- При увеличении активности фермента на 20 и более относительно нормы определяют хроническое поражение печени алкогольной, аутоиммунной и вирусной этиологии.

Пример 1, Больной П.А.В. 25 поступил в клиническую больницу с жа- . лобами на боли в правом предреберье и зпигастральной области. Считает себя больным около 7 мес когда появились тошнота и рвота кровью, Раньше часто употреблял алкоголь, При объективном обследовании: печень увеличена, выходит из под реберной дуги на

2 см, край плотный, болезненная;. несколько увеличена селезенка. Лабораторные исследования: АлАТ

0,14 ммоль/ч/л, АсАТ О ° 28 ммоль/ч/л, тимоловая проба 5,3 ед., общий билирубин 45, 1 ммоль/ч/лррямой 9, 0 ммоль/ч/л,; непрямой 36,1 ммоль/ч/л f -глобу- 40 лин крови 25 ° 9X HBsAg(-). .Скеннирование печени: печень деформирована с неровными контурами, изотоп накапли вает неравномерно, по всей поверхности имеются очаги резкой величины и ин-45 тенсивности.

На основании полученных данных можно было предположить поражение печени, т.е. алкогольный цирроз печени, сформировавшаяся стадия с признаками портальной гипертенэии, Проведено исследование альфа-глицерофосфатдегидрогеназы: 11,09 гранул, т,е, на 20„02X превышает норму, хотя активность трансаминаэ нормальная. Клинический диагноз подтвержден пункционной биопсией печени (86,03.13), а также во время последующей операции — наложения спленоренального шунта, П р е р 2, Больной Б.Г,И,, поступил в. клиническую больницу с жалобами на боли в правом предреберье, диспепсические явления. Объективно; печень при пальпации несколько увеличена, на 2-3 см выходит из-под реберной дуги, гладкая, слегка болезненная, Лабораторные данные: АлАТ

0,14 ммоль/ч/л, АсАТ 0,21 ммоль/ч/л, ЩФ 0,08 ммоль/ч/л, общий билирубин

12,5 ммоль/л, тимоловая проба 1,6 ед.

СОЭ 2 мм/ч. Жалобы больного, перенесенный острый вирусный гепатит, увеличенная печень позволили заподозрить хронический вирусный гепатит, однако по данным лабораторного исследования патологии со стороны печени не выявлено. Проведено исследование активности альфа-глицерофосфатдегидрогеназы — 15,06 гранул, т.е. íà 63Х превышает норму, Проведена пункционная биопсия печени и в пунктате выявлено следующее: жировая-белковая дистрофия гепатоцитов, в портальных трактах лимфоидная инфильтрация. Был поставлен диагноз: хронический вирусный персистирующий гепатит.

Таким образом, исследование активности альфа-глицерофосфатдегидрогеназы играет решающую роль в клинической диагностике хронических поражений печени в ряде случаев, когда они не сопровождаются изменением других биохимических показателей, т.е, цитолитический синдром отсутствует или слабо выражен, в основном в случаях гепатоза или хронического персистирующего гепатита, особенно алкогольного генеза, так как данные формы в подавляющем большинстве случаев латентные, скрытые., Определение данного показателя способствует диагностике и в далеко зашедших стадиях хронических заболеваний печени, когда вследствие тяжелого поражения гепатоцитов нарушается синтез секреторных ферментов АпАТ и АсАТ и лабораторная диагностика дает отрицательные результаты.

Предлагаемый способ повышает точность определения, особенно на начальных стадиях поражения печени, ко« торая составляет 96,7Х (на материале обследования 90 больных), техни.чески прост и нетрудоемок, Формула изобр етения

Способ определения хронических поражений печени алкогольной аутоимСоставитель С.Федоров

Редактор В.Данко Техред А.Кравчук Корректор О. Кравцова

Заказ 835 Тираж 5Д8 . Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óàãoðîä, ул. Гагарина, 101

5 15 мунной и вирусной этиологии путем биохимического анализа крови, о т— личающийся тем, что, с целью повыщения точности способа, проводят определение активности аль59294 6 фа-глицерофосфатдегидрогеназы в лимфоцитах периферической крови и при увеличении ее активности íà 20Х и более относительно нормы определяют хроническое поражение печени.