Способ оценки неспецифической иммунофлуоресценции

 

Изобретение относится к биологии, в частности к иммунохимии. Цель изобретения - повышение точности локализации исследуемого антигена и выявление неспецифической флуоресценции на гистологических препаратах в методе непрямой флуоресценции. Способ заключается в инкубации гистологических препаратов с антителами к исследуемому антигену и последующей элюции этих первичных антител с антигенного субстрата 3-молярным раствором роданистого натрия. После отмывания фосфатным буфером препараты обрабатывают вторичными антителами к иммуноглобулинам кролика, меченными флюоресцеинизотиоционатом (ФИТЦ). Специфическая флюоресценция при такой обработке полностью исчезает, а неспецифическая фоновая флюоресценция остается такой же, как в контрольных препаратах, обработанных только фосфатным буфером (аутофлюоресценция), или препаратах, обработанных только ФИТЦ-конъюгированными антителами.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU„„1585764 (gj)g С 01 N 33/533

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

М А BTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И OTHPbfTHRM

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4452069/28-14 (22) 29.06,88 (46) 15.08.90. Бюл. Р 30 (71) Институт экспериментальной биологии AH КазССР (72) К.А.Садыкова (53) 6 15.475 (088.8) (56) Иммунологические методы. N.:

Медицина, 1987, с.472. (54) СПОСОБ ОЦЕНКИ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ

ИММУНОФЛУОРЕСЦЕНЦИИ (57) Изобретение относится к биоло- гии, в частности к иммунохимии.

Цель изобретения — повьппение точности локализации исследуемого антигена и выявление неспецифической флуоресценции на гистологических препаратах в методе непрямой АлуоИзобретение относится к биологии, в частности к иммунохимии, и может быть использовано как тест для определения наличия исследуемого антигена на гистологическом препарате.

Целью изобретения является повьппе- . ние точности локализации исследуемого антигена и выявление неспецифической Алуоресценции на гистологических препаратах в методе непрямой иммунофлуоресценции.

Способ выполняется следующим образом.

Испытуемые гистологические препараты инкубируют с антителами к ис следуемому антигену, для элюции этих первичных антител с антигенного

2 ресценции. Способ заключается в инкубации гистологических прппаратов с антителами к исследуемому антигену и последующей элюции этих первичных антител с антигенного субстрата

3-молярным раствором роданистого натрия. После отмывания АосАатным буАером препараты обрабатывают вторичными антителами к иммуноглобулинам кролика, мечеными Алюоресцеинизотиоционатом (БЛИТЦ). Специфическая флюоресценция при такой обработке полностью исчезает, а неспециАическая фоновая флюоресценция остается такой же, как в контрольных препаратах, обработанных только АосАатным буАером (аутофлюоресценции), или препаратах, обработанных только ФИТЦконьюгированными антителами. субстрата используют 3-молярный раствор роданистого натрия. Препараты отмывают фосАатным буАером, обрабатывают вторичными антителами к иммуноглобулинам кролика, мечеными флуоресцеинизотиоцианатом (ФИТЦ).

Специфическая флуоресценция при эток исчезает, а неспециАическая Аоновая флуоресценция остается такой же, как на контрольных препаратах, обработанных только Аосфатным буАером, .или препаратах, обработанных только

ФИТЦ вЂ” коньюгированными антителами.

Пример. Исследовали локализацию ганглиозидов (G ) на поверхности ранних доимплантационных зародышей мыши методом непрямой иммуно4

1585764 флюоресценции после элюирования связанных первичных антител ЗМ раствором роданистого натрия; при иммуно5 флюоресцентном исследовании локализации антигена, слабо экспрессированного на препарате, и наличии фонового неспециАического свечения введение дополнительной контрольной тестсистемы позволит избежать неправильной оценки данных; исключается необходимость применения в каждом случае сложного по выполнению и длительного иммуно-адсорбированного контрольного теста; более того, при использовании дефицитных препаратов антител соответствующий антиген не всегда доступен.

Составитель P.Ãóìåíþê

Техред Л.Олийнык Корректор С.Черни

Редактор М.Циткина!

Заказ 2325 Тираж 508 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101

4 флуоресценции. Яйцеклетки и ранних зародышей Аиксировали, помещая в

4%-ный Аормалин на 2 ч. Затем зародышей переносили в капле на обезжиренные предметные стекла, предварительно обработанные в течение 30 мин

0,1%-ным раствором протамин-сульАата, и подсушивали на гистологическом столике при 40 С, Перед процедурой иммунофлюоресцентного окрашивания

1 препараты отмывали в ФБ (0,1М; рН

7,2), содержащем 0,01% тритон-х-100.

Препараты обрабатывали 60 мин раствором первичных антител к 6

H1 отмывали 30 мин фосАатным буАером с

0,01%-ным тритоном-х-100 (0,01 М, рН 7,2; этот Gyhep использовали во всех других случаях), затем наносили раствор 3М роданистого натрия, инкубировали 30 мин, отмывали препараты и наносили ФИТЦ-конъюгированные вторичные антитела к иммуноглобулинам кролика. Далее следовала обычная процедура отмывки и заключения препа- 25 ратов в глицерин. Б препаратах, обработанных таким образом, специАическая флюоресценция на поверхности зародышей не наблюдалась. Процесс элюирования антител с антигенного субст- 3 рата занимает 30 мин, Предложенный способ позволяет точно дифАеренцировать специфическую и неспециАическую Алюоресценцию за счет полного "гашения" специАической

Формула изобретения

Способ оценки неспецифической иммунофлуоресценции на гистологическом препарате, содержащем специАический антиген, путем добавления антител и сЬлуоресцеинизотиоцианат — меченой антисыворотки, о т л и ч а ю щ и й— с я тем, что, с целью повышения точности локализации исследуемого антигена, в качестве антител используют специАические антитела к исследуемому антигену и дополнительно применяют элюцию первичных антител с антигенного субстрата 3-молярным раствором роданистого натрия.