Защитная среда для лиофилизации вакцинного штамма erysipelothrix rhusiopathicae suis bp-2

 

Изобретение относится к биологической промышленности и может быть использовано при производстве сухой живой вакцины против рожи свиней. Целью изобретения является повышение стабильности биологических свойств вакцины. Штамм Erysipelothrix rhusiopathicae suis BP-2 выращивают на жидкой питательной среде, концентрируют. Разводят сахарозо-желатиновой защитной средой на калийфосфатном буфере, куда добавляют пептон со степенью расщепления 0,3 - 0,5. Введение в состав защитной среды пептона определенного состава позволяет снизить концентрацию сахарозы, повысить специфическую защиту микроорганизмов при лиофилизации. Эта среда позволяет сохранить 87 - 100% жизнеспособных клеток штамма BP-2 в течение 12 месяцев. 1 табл.

Изобретение относится к биологической промышленности и может быть использовано при производстве сухой живой вакцины против рожи свиней. Цель изобретения - повышение стабильности биологических свойств вакцины. П р и м е р 1. В стерильный ферментер загружают жидкую питательную среду на основе ГП-ФБМ, приготовленную следующим образом: гидролизат разводят дистиллированной водой из расчета содержания аминного азота 170-200 мг%, кипятят 10-15 мин, после чего добавляют следующие компоненты, %: Пептон 0,2-0,3 L-Аргинин HCl 0,005-0,15 К₂НРО₄ 1,7-1,9 КН₂РО₄ 0,2-0,4 Экстракт печени 4,0-6,0 Твин-80 0,04-0,06 Глюкоза 0,3-0,5 Вода дистилли- рованная До 100,0 Готовая стерильная питательная среда содержит 170-200 мг% аминного азота и имеет рН 7,4-7,6. В ферментер вводят культуру бактерий рожи штамма ВР-2, выращенную в жидкой питательной среде аналогичного состава, из расчета 3-5% от объема среды. Культивируют при температуре 35-36^оС в течение 9-12 ч с периодическим перемешиванием с (2-3 мин через каждые 2 ч при 180 об/мин). В 1 см³ культуральной жидкости должно содержаться от 6 до 10 млрд. бактерий рожи. Полученную культуру концентрируют (центрифугированием) и разводят защитной средой следующего состава,%: Пептон со степенью расщепления 0,3 3,0 Желатин 1,0 Сахароза 5,0 К₂НРО₄ 0,50 КН₂РО₄ 0,090 Вода дистил- лированная До 100,0 Пептон со степенью расщепления 0,3 имеет следующий набор пептидов %: высокомолекулярные (30-80 тыс, ) 10; среднемолекулярные (5-30 тыс.) 65, низкомолеку- лярные (менее 5 тыс.) 25. Замораживают до -45^оС. Температуру биоматериала на фазе сублимации поддерживают в течение первых 12 ч - 30^оС, а в последующие 10 ч 25^оС. Массовая доля влаги в вакцине 1,6%. Результаты стабильности вакцины представлены в таблице. П р и м е р 2. Бактериальную массу Erysipelothrix rhusiopathicae suis ВР-2 получают аналогично примеру 1. Для приготовления защитной среды используют пептон со степенью расщепления 0,4, содержащий пептиды, %: высокомолекулярные (30-80 тыс.) 12,5; среднемолекулярные (5-30 тыс.0 67,5; низкомолекуляр- ные (менее 5 тыс.) - остальное. Приготавливают защитную среду следующего состава, %: Пептон 5,0 Желатин 1,5 Сахароза 10,0 К₂НРО₄ 0,54 КН₂РО₄ 0,093 Вода дистилли- рованная До 100,0 Концентрированную культуру разводят защитной средой, замораживают защитной средой, замораживают до -47,5^оС. Температуру по фазе сублимации поддерживают в течение первых 13,5 ч - 31^оС, в последующие 12,5 ч 26,5^оС. Массовая доля влаги составляет 2,4%. Результаты стабильности вакцины представлены в таблице. П р и м е р 3. Бактериальную массу Erysipelothrix rhusiopathicae suis ВР-2 получают аналогично примеру 1. Для приготовления защитной среды используют пептон со степенью расщепления 0,5, содержащий пептиды, % : высокомолекулярные (30-80 тыс.) 15; среднемолекулярные (5-30 тыс.) 70; низкомолекулярные (менее 5 тыс.) - остальное. Приготавливают защитную среду следующего состава, %: Пептон 7,0 Желатин 2,0 Сахароза 15,0 К₂НРО₄ 0,58 КН₂РО₄ 0,095 Вода дистилли- рованная До 100,0 Концентрированную культуру разводят защитной средой, замораживают до -50^оС. Температуру биоматериала на фазе сублимации поддерживают в течение первых 15 ч - 32^оС, в последующие 15 ч 28^оС. Массовая доля влаги в вакцине составляет 4,0%. Результаты стабильности вакцины представлены в таблице. Таким образом, предлагаемая защитная среда позволяет сохранить 87-100% жизнеспособных клеток штамма ВР-2 и увеличить срок годности вакцины до 12 месяцев.

Формула изобретения

ЗАЩИТНАЯ СРЕДА ДЛЯ ЛИОФИЛИЗАЦИИ ВАКЦИННОГО ШТАММА ERYSIPELOTHRIX RHUSIOPATHICAE SUIS BP-2, содержащая желатин и сахарозу, отличающаяся тем, что, с целью повышения стабильности биологических свойств вакцины, в защитную среду дополнительно вносят пептон со степенью расщепления 0,3 - 0,5, калий фосфорнокислый однозамещенный, калий фосфорнокислый двухзамещенный при следующем содержании компонентов, об.%: Пептон 3,0 - 7,0 Желатин 1,0 - 2,0 Сахароза 5,0 - 15,0
Калий фосфорнокислый двухзамещенный 0,5 - 0,58
Калий фосфорнокислый однозамещенный 0,09 - 0,095
Вода дистиллированная До 100

РИСУНКИ

Рисунок 1

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Номер и год публикации бюллетеня: 10-2002

Извещение опубликовано: 10.04.2002        

---