Штамм бактерий рsеudомоnаs aerugi nosa, используемый для получения диагностической сыворотки

 

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для получения диагностических О-специфических сывороток Р. AERUGINOSA. Изобретение может быть использовано также для уточнения классификационной схемы О-антигенов (позволяет дополнить схему новой подгруппой 11A, 11B, 11C)

в научно-исследовательской работе для изучения иммунохимического состава антигенов микроорганизмов. Целью изобретения является штамм бактерий PSEUDOMONAS ACRUGINOSA BS 3694 серогруппы 011, обладающий антигенной структурой 11A, 11B, 11C, что позволяет использовать его для получения групповой поливалентной сыворотки. Штамм Р. AERUGINOSA BS 3694, выделенный при санитарном анализе оборудования в клинической больнице, принадлежит к серогруппе 011. В Международной классификационной схеме строения О-антигенов PSNUDOMONAS AERUGINOSA группа 011 представлена двумя подгруппами: штаммами с антигенной структурой 11A, 11B и 11A, 11C. для получения групповой поливалентной сыворотки 011 используются штаммы обеих подгрупп. Отличием штамма является его антигенная структура 11A, 11B, 11C, включающая наряду с групповым антигеном 11A парациальные антигены 11B и 11C одновременно. Использование штамма BS 3694 вместо штаммов двух подгрупп для получения групповой поливалентной сыворотки упрощает и удешевляет процесс ее изготовления. Штамм PSEUDOMONAS AERUGINOSA BS 3694 депонирован в коллекции Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им.Л.А.Тарасевича. Штамму присвоен номер 158. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А ВТОРСИОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4603023/30-13 (22) 19.08 ° 88 (46) 30.09.90. Бюл. )) - 36 (71) Горьковский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии и Научно-исследовательский институт химии при Горьковском государственном университете им. Н,И.Лобачевского (72) К.Е.Бекина и Н.И.Иванова (53) 576.8.077 (088.8) (56) НаЬз. J. Z, Hyg. Infekt. Kr 2, 1957, Вй. 144. — S, 218 — 228.

Lanyi В. Acta microbiol. Acod.

Sci, Hung, 1966/67, v. 13, р. 295—

318. (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ PSFUDOMONAS AERUGIN0SA, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ

ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ СЫВОРОТКИ (57) Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для получения диагностических О-специфических сывороток P. aeruginosa.

Изобретение может быть использовано также для уточнения классификацион,ной схемы О-антигенов (позволяет дополнить схему новой подгруппой IIa

IIb, IIc) в научно-исследовательской работе для изучения иммунохимического состава антигенов микроорганизмов. Цель изобретения — вьщеление

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в производстве агглютинирующих групповых диагностических сывороток для дифференциации P.aeruginosa, вызы„„ви„„ щ58З А1 (51)5 С 12 N 1/20, А 61 К 39/04// (С 12 N 1/20, С 12 R 1:385) 2 штамма бактерий Pseudomonas aerugiпоза BS 3694 серогруппы 011, обладающего антигенной структурой Ца, ТТЬ, IIc, что позволяет использовать его для получения групповой поливалентной сыворотки. Штамм P. aeruginosa

BS 3694, вьщеленный при санитарном анализе оборудования в клинической больнице, принадлежит к серогруппе

0l1. В международной классификационной схеме строения О-антигенов Pseudomonas aeruginosa группа 011 представлена двумя подгруппами: штаммами с антигенной структурой IIa, IIb u

IIa IIc. Для получения групповой поливалентной сыворотки 011 используются штаммы обеих. подгрупп. Отличием штамма является его антигенная структура,IIa, IIb TIc, включающая наряду с групповым антигеном TIa парциальные антигены:IIb u ITc одновременно, Использование штамма BS 3694 вместо штаммов двух подгрупп для получения групповой поливалентной сыворотки упрощает и удешевляет процесс ее изготовления. Штамм Pseudomonas

aeruginosa BS 3694 депонирован в коллекции Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.A.Òàðàñåâè÷à.

Штамму присвоен номер 158. ) табл. вающих гнойно-септические заболевания.

Цель изобретения — вьщеление штамма бактерий Pseudomonas aeruginosa

BS 3694 серогруппы 011, обладающий

159590 антигенной структурой IIb, IIc, TTc, что позволяет использовать его для получения групповой поливалентной сыворотки, 5

Штамм P. aeruginosa BD 3694 выделен в клинической больнице г.Горького из смыва с оборудования и депонирован в коллекции Государственного научно-исследователь=кого института стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.A.Tàðàñåâè÷à под номером 158.

Штамм P. aeruginosa ПИСК Р 158 имеет следующие характеристики. 15

Культурально-морфологические особенности штамма: грамотрицательные палочки, слегка изогнутые, подвижные; на мясопептонном агаре образует через 18 ч при 37+1 С расплывча- 2О тые серовато-зеленоватые колонии, слегка выпуклые в центре, с неправнльпыми краями дает рост на мясоЭ

О пептонном агаре через 18 ч при 42 С .

Биохимическая активность: облада- 25 ет цитохр6моксидазой, аргининдегидродазой, уреазой, цитратазой, нитратазой, проявляет протеолитическую активность — разжижает желатину и свернутую сыворотку крови„ образует пиоцианин, не образует сероводород и индол, окисляет глюкозу в аэробных условиях, не ферментирует лактозу, сахарозу, мальтозу, глюкозу, маннит., Антигенные свойства: дает агглю35 тинацию с групповой сывороткой 011 и факторными IIb u IIc.

Лизируется,синегнойным бактериофагом в титре 10 по методу Аппельмана, Устойчив к хлорамфениколу

40 (200 мкг/мл), тетрадиклину (25 мкг/

/мл), ст реп т омицину (2 5 мк- /мл), к анамицину (200 мк г/мл), сульфаниламидам (12800 мкг/мл), чувствителен к гентамицину, карбеницилину,рифам- 45 пицину. Нуклеотидный состав ДНК

67,8+0,4Х Гц.

Пример 1. Антигенную структуру штамма P. aeruginosa ГИСК 11 158 изучают В реакции агглютинации на стекле с сыворотками: групповой .ТТа и факторными IIb и IIc, а также в опытах агглютинации и адсорбции агглютининов из сывороток, полученных к эталонным штаммам IIa, IIli (НаЪз

II) IIa, П с (1 7001 6 Ьапуз ) и к штамму ГИСК Р 158. Получение антигенов и иммунизацию кроликов проводят по схеме Verder u Evans.

1 4

В табл. 1 приведены результаты ис следования 0-антиг ено в P, aer ug inosa серологической группы 011 в опытах перекрестной агглютинации и адсорбции агглютининов.

Как показано в табл. 1 штаммы Habs

II (I а, IIb), 170016 Lanyi (ТЕа, IIc) а также исследуемая культура

ГИСК Р 158 дают четкую агглютинацию со всеми тремя сыворотками, Адсорбция сывороток к штаммам Habs II u

170016 Lanyi культурой ГИСК Р 158 приводит к полному извлечению из сывороток антител как к гомологичному штамму, так и к штамму-адсорбенту, Адсорбция сыворотки к штамму LS 3694 культурой Habs II, а также культурой

170016 Lanyi приводит к истощению сыворотки только к штамму-адсорбенту, с остальными двумя культурами наблюдается четкая агглютинация: в первом случае за счет антигена с, во втоpoM -, Ъ. Полученные данные свидетельствуют о наличии у штамма ГИСК

158, кроме группового антигена

IIa, двух парциальных антигенов IIb и IIc одновременно, I

Таким обр азом, шт аммы P . .aerugiпоза ГИСК 11 158 имеют антигенную структуру IIa, IIb, IIc, .не отраженную в Международной схеме строения

0-антигенов Р. aeruginosa.

Пример 2, Приготовление диагностических сывороток включает следующие этапы работы: поддержание чистоты и жизнеспособности штамма, изучение биохимических и серологических свойств штамма, приготовление антигена для иммунизации животных, иммунизацию, кровопускание, отделение сыворотки от сгустка крови и фильтрацию, проверку активности сыворотки.

Штамм хранят в пробирках с агаром на переваре Хоттингера под вазелиновым маслом при 4 (° Каждые три месяца культуру пересевают, проверяют на чистоту по биохимическим и серологическим свойствам.

Для определения чистоты штамма проводят его рассев до отдельных колоний на плотной питательной среде и контролируют однородность выросших колоний.

Биохимические свойства изучают с помощью набора тестов, используемых для идентификации P.aeruginosa.

5 1

Серологические свойства изучают в реакции агглютинации на стекле с групповой и факторными сыворотками.

595901

Формула изобретения

/ дгглютинация с сыворотками к штаммам

Штаммы

Habs II (IIa,II) 170016 Lanyi (II,ÅIñ) ГИСК Р 158

После адсорбции культурой ЕЕа, b, IIa,c .

Ло адсорбции

По сле адсорбции культурой

ГИСК

Р 158

До адсорб— ции

После адсорб ции культу рой

ГИСК

У 158

До адсорбции

Habs II (IIa,II)

170016 Lanyi (IIa IIc)

ГИСК Р 158

++++ -- ++++

++++

+*++

++++ ++++

++++

+.+++

++++

++++

Составитель Г,Белянская

Техред M.Äèäûê

Корректор С.Шекмар

Редактор M.Ïåòðîâa

Заказ 2889 Тираж 502 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская паб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101

Для приготовления антигена 15—

20 колоний суточной агаровой культуры, выращенной на переваре Хоттингера, вносят в 100 мл мясопептонного бульона и инкубируют на шоттель-аппарате (80 кол/мин) при 37 - 38 С в течение 18-20 ч. Выращенную бульонную культуру прогревают в водяной бане при 100 С в течение 1,5 ч. Осадок центрифугируют трижды, промывая каждый раэ физиологическим раствором, суспендируют в 5 мл физиологического раствора, Взвесь по оптическому стандарту мутности доводят . до 10,5 ед.

Приготовленный антиген используют для иммунизации кроликов. Иммунизацию проводят внутривенно нарастающими дозами - 0,25; 0,5; 1,0 ; 1,5;

2,0 мл с интервалами в 4 дня. На

6-8-й день после последней иммунизации у животных берут кровь. Сыворот1 ку отделяют от сгустка крови,фильтруют через керамические свечи и определяют активность.

Полученная сыворотка к штамму

P.aeruginosa ГИСК Р 158 в опытах агглютинации на стекле со штаммами

-BS 3694 (IIa, ЕЕЬ, IIc), 170016

Lanyi (IIa, IIc) и HaBs II (IIa,IIb) дает четкую агглютинацию. В развернутой реакции агглютинации титр голученной сыворотки равен 1:640.

Использование в качестве антигена при производстве групповой поливалентной сыворотки 011 одного штам" ма ГИСК N- 158 (IIa, IIb, IIc) вместо двух (Ia, IZb и IIa, IIc) на всех указанных этапах позволяет вдвое сократить время, трудовые затраты,пита20 тельные среды, материалы, опытных животных, 25 ц!тамм бактерий Pseudomonas aeruginosa ГИСК P. 158, используемый для получения диагностической сыворотки.