Штамм бактерий bacillus suвтilis - продуцент @ - амилазы
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для производства ферментных препаратов β-амилазы для пищевой промышленности, кондитерской, крахмалопаточной, пиво-безалкогольной и др. Цель изобретения - получение нового штамма бактерий BACILLUS SUBTILIS ВКПМ В-4307-продуцента высокоактивной β-амилазы на средах, содержащих недефицитные и дешевые компоненты. Изобретение заключается в том, что в результате многократного пассажирования на средах с высоким содержанием крахмала и многократного выделения моноколоний выделен штамм BACILLUS SUBTILIS ВКПМ В-4307 (2011), имеющий активность β-амилазы при выращивании в колбах (40ч, 35°С) на среде, содержащей 5% крахмала (кукурузного), 2% соевой муки и NA<SB POS="POST">2</SB>HPO<SB POS="POST">4</SB> до PH 7,5, 180 ед/мл. Активность в ферментере (32 - 36 ч, 35°С) 50 - 65 ед/мл. Ферментный препарат β-амилазы имеет температурный оптимум действия 60°С, оптимум PH 7-7,5.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК щ) 5 С 12 N 9/26, 1/20
00Р; 716"
, . г, ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР (21) 46078 73/30-13 (22) 22.08 .88 (46) 15. 12 .90. Бюл . h" 46 (71) Всесоюзный научно-исследовлтель« « с< ий инс гитут Биотек«олог«R (72) ll.i>.Ôtглиппова, I.C.,71< сяковл, И.A. Бедогорцев и Т.И. Кравченко (53) 663. 15 (088 .8) (56) St ark T.Ê. Stewart Т.H., Priest г .<. . Cl Блс . mepa te гium. FFHS Iicrob tot I,et ü . 19" 2, 15, 17 4, 295-298. Пате!<т Ci <А h"- 4604355, кл. С 12 N9/26,,опублик. 1986. (54) 17!Тй!7! Г)ЛКТГРИ1! ВАС 71.7.<8 811Г>Т1— L l S -77Р0г! У71Г !1Т P -Л7!!ПАЗАХ! (57) 11зобр< те«ие относится к биотех«ологии и может бь< ь «спользовлно ,",ля про«зв<.дства ферментпьгх преплрл— тов — ль<«<<азы для гищевой промышИзобретение относится к биотехно.-<ог<ги и представляет новый птлмм бактерий, который может бьггь использован для крупнотоннажного производст— га ферме«тных препаратов /3 -лмиллзы для пищевой промышленности: коцди. ерской, кр»хмллоплточпой, <»<«о-без лл ког ол ь«ой и др . Цель изобретения — получс..«ие новогоо штамма бл кт ерий — пр одупе пта высоколктивной,
Г<тамм бактерий Bacill»s subtil is BKII1! Б-4307 (2011) выл< .<е< . < крах„„SU„„1613491 А i 2 леш<ости, ко«питерской, крахмллопаточной, пиво-безалкогольной и др . Цель изобретения — получение нового пгглммл бактерий Bacillus subtil is BIIIl В-4307-продуцента высокоактивпой< 8 -лмилазы на средах, содержащих 1 недефицитные и дешевые компоненты. Изобретение заключается в том, что в результате многократного пассажировлния на средах с высоким содержа— нием крахмала и многократного выделения моноколоний выделен штамм Васillus subtil is ВК777! Б-4307 (2011), имеющий активностьP -амилазы при вырлщивл<пш в колбах (40 ч, 35 С) на среде, содержащей 5Z крахмала (кукурузного), 27. соевой муки и 17а НР04 до рц 7,5, 180 ед/ 65 ед/мл. Ферментный препарат /3-амиллзы имеет температурный оптимум действия 60 С, оптимум рЦ 7-7,5. О мальних замесов в результате многократного пассажирования на средах с высоким содержанием крахмала и многократ«ого выделения моноколоний. Длп«ый продуцент обладает высокой способностью к биосинтезу термолктивпой и гермостабильной/3-амилазы на Ср едах, с од ержащих д ешевые и недефицитные компоненты гг и длительности культивирования 32 — 48 ч. Лктнвность Р-амиллзы в культуральпой ж«дкости Ба с il 1u s sub t i l i s 2011 50 — 180 ец/мл и превосходит актив ость известного продуцентл Bac il lu s stra in NC1811837 на тех же средах в 1,5 — 3 раза (за 1613491 единицу активности принято такое кол: честно фермента, которое за 1 мин при стандартных условиях: рН 7,0, ЭОО С, 20 мин гидроли за, обра з ет 1 мкмоль мальтоэы) . 1 1тамм имеет следующие характерис— тики . Иорфологич ес ки е при з наки . Спороносные, короткие и тонкие па- 10 лочки (О, 7 — 1, О > О, 15 — О, 25), подвижные. Грамположит ел ьные . Иожет образовывать нити в виде цепочки, ко— торые с возрастом распадаются. Споры овальные 0,25 — 0,30 > 0,15 — 0,20, экс цечтиал ьные . Кул ьт урал ь ные при з на ки . Растет на твердых и жидких питательных средах ° На синтетических средах растет плохо. 20 На картофельных пластинках растет н ниде морщинистой выпуклой пленки с волнистыми краями бежево-серого цвета. К 22 — 24 ч роста легкий налет покрывает всю пластину, к 48 ч роста образуется мощная морщинистоскладчатая пленка. fla косяках 37 соевой муки + Э крахмала: морщинистые складчатые выпуклые колонии с волнистыми краями, к 40 — 48 ч рост обильный, культура покрывает всю поверхность среды. На сусло-агаре 87-ном: образует колонии светло-бежевого цвета со слабо выраженной складчатостью, рост затруднен, к 40 ч начинается споро35 обра зова ние. lla жидкой среде 5Х крахмала + 27, соевой муки: растет в виде мощной морщинисто-складчатой пленки на по40 верхности среды кремового цвета, в культуре 24-часового возраста образует нитевидные цепочки, которые укладываются в виде "паркета", к 48 ч нити распадаются, отчетливо видна дифференциация клеток, начинается обильное спорообразование. физиологические признаки. Аэроб, температурные границы роста 25 — 55 С, оптимальная температура роста 30 — 35 С, растет в диапао .. 50, зоне рН 5, 5 — 9, О, оптимальное значение рН роста 7 — 7,5. Крахмал разжижает, клетчатку не ра злагает . Ассимилирует глюкозу, мальтоэу, с орбит, маннит, сахар озу, арабинозу, фруктозу, лактозу. Не ассимилирует, глицерин, рамноз у, дно зит, дул ьцит . Ус наи на ет а от t tat HE- paJI hный (аммонийный lt нитратныи) и органический (моченина, at ttt ttuvt) rJI() Tt t: например аспара ги и, глютами н, тир озин, бел ки: например казеинат натрия1. ffa средах с t t tc оким содержа нием крахмала (3 — 157) способен к биосинтезу -амила зы на уровне 50 180 ед/м,, в зависимости от состава сред, условий культивирования и продолжительности биосинтеза.Активность сопутствующих ферментов в КЖ составляет: протеаза О, 1 — 0,4 ед/мл, oC— амилаза О, 1 — 3 ед/мд. Активность гидролитических ферментов определяют следующими методами. Акти в нос т ь Р -амила зы по Бернфельду с 3,5-динитросалициловой кис— л отой, при стандарных условиях гидролиза: рН 7, О, температура 30 С, температура 30 С, продолжительность о гидр оли за 20 мин. К -амила зная активность по ГОСТ 20264.4-74. Протеолитическая активность по ГОСТ 20264.274. Глюкоамилазная активность по ГОСТ 20264 .4-74 . П р и и е р 1. 1 1тамм В.subtil is 2011 выращивают в качалочных колбах объемом 750 мд rn 100 мл среды при 35 С в течение 48 ч. Состав среды: 57. крахмала (кукур уз ного), 27, соевой муки, Na Количество посевного материала 2Х по объему. Активность Р -амилазы в культуральной жидкости 120 ед/мп к 36 ч, 186 ед/мл к 40 ч выращивания. Активность рС -амилаэы 0,1 ед/мп и 0,5 ед/мп соответственно. Пример 2. 11тамм В.subtil is 2011 выращивают в ферментере объемом 75 л на среде, содержащей 37 крахмала, 1,5i. соевой муки и Na>HP04 до рН 6,5. Засев осуществляют посевным материалом, выращенным на качалочных колбах в течение 40 ч при 35 С. Количество посевного материала 2Х. по объему. Активность -амилазы к 32 ч выращивания при Э5 С 50 ед/мл при активности 06 -амилазы 0,5 ед/мп. Пример 3. Штамм В.subtilis 2011 выращивают на среде 57, крахмала, 1, 77 соевой латуки, Na 6,4 в ферментере объемом 75 л. КолиСоставитель Е.Воробьева Редактор O. Спесивых Техр ед M. дидык Корректор И.Эрдейи Заказ 3867 Тираж 484 Подпис ное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101 честно посевного материала, выращенного на качалочных колбах 2! по t объему. Культивирование осуществляли при 35 С (число оборотов мешалки о, 400 n6/мин, воздух подают в соотношении 1: 1) . Лктивность Р -амилазы к 36 ч 65 ед/мл при активности g -амилазы 0,2 ед/мп. il р и м е р 4. Препараты фермента (-амилазы очистки ГЗх и Г10х, полученные из культуральной жидкости В. sub t il is 2011, используют для гидролиэа растворимого крахмала из расчета 1 — 5 ед/г. Я -амилаза В.subti1 is 2011 имеет температурный оптимум действия — 60 С, оптимум рН (действия) 7 — 7,5. Работает в диапазоне 13491 6 pII 4, 5 — 9, О. Гидр оли з ос ушест вл яют при 60 С в течение 60 ч. Степень гидролиза по редуцирующим сахарам 577., количество глюкозы 17, количество 5 мальтозы 853. Новый штамм В.subtil is 2011 представляет собой продуцент со стойкими морфологическими и биохимическими признаками. Ферментные препараты -амилаэы на основе В. sub til is 2011 могут иметь активность от 1000 до 20000 ед/г и более в зависимости от степени очистки. Формула изобретения Птамм бактерий Bacillus subtilis ВКПИ В-4307 — продуцент /3 -амилазы.
