Способ получения ингибиторов сахаразы

 

нц1ьитно- I -„О П

Союз Советских

Социалистических

Республик (11)i 576050

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К ПАТЕНТУ (61) Дополнительный к патенту

2 (51) М. Кл. С12 О 13/10 (22) Заявлено 23.02.73 (21) 1885529/28 — 13 (23) Приоритет — (32) 01.03.72 (31) Р 2209832.4 (33) ФРГ (43) Опубликовано 05.10.77, Бюллетень plo 37 (45) Дата опубликования описания 30.08.77

Гасударственный комитет

Совета Министров СССР оо делам изобретений и открытий (53) УДК 615.779.94 ! (088.8) Иностранцы

Вернер Фроммер, Вальтер Пульс н Дельф Шмидт (ФРГ) (72) Авторы изобретения

Иностранная фирма

"Байер АГ" (ФРГ) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНГИБИТОРОВ САХАРАЗЫ

Изобретение относится к медицине и может быть применено в качестве терапевтических средств при ожирении, гиперлипемии, диабете.

Известен способ получения ингибиторов глюкозидаз (в том числе и ингибитора сахаразы) из фильтрата культуральной жидкости Act inoplana

ceen SE с последующим выделением целевого продукта (1) .

Однако такой способ не обеспечивает высокой активности ингибирования сахаразы.

С целью повышения активности ингибирования сахаразы по предлагаемому способу вьщеленный целевой продукт подвергают гидролизу, при этом гндролиз осуществляют водным раствором кислоты или р-амилазой.

Превращение ингибитора амилазы в ингибитор сахаразы осуществляют путем отщепления нетормозящих частиц молекулы (большей частью моно, ди- или трисахариды) из молекул ингибитора. Это отщепление осуществляют ферментно - гидролитнческнм или химически - гидролнтическнм расщеплением, предпочтительно проводят гидролиз в кислой среде при высоких температурах. Для этого

1 — 40%-ные растворы, предпочтительно 2 — 20%-ные, BIcoKocIIocooHbIx ингибиторов в 0,1--5N, предпоч

2 тительно 0,5 — 2N, минеральных кислотах, предпочтительно HCI и H S04: гидролизуют не более бч, предпочтительно не более 4 ч, при 60 — 110 С, предпочтительно при 80 — 100 С.

Изолирование тормозящего caxapmy компонента из гндролизатов осуществляют предпочтительно посредством адсорбции на активном угле после предварительной нейтрализации гидролизата и последующей фракционнрующей десорбции ингибитора с угля водными спиртами или водным ацетоном. Если гидролизаты имеют очень темный цвет, их до адсорбции ингибитора, сахаразы на угле обесцвечивают активным углем при кислых значениях рН 1 — 3.

Способность торможения лучших препаратов ингибитора составляет 15000 SiE/r.

Гндролиз осуществляют также энзиматическн

Р-амилазой.

Ингибиторы могут быть. использованы как терапевтические средства при ожирении, гиперлипемии (атериосклероз), диабете, предиабете, кариесе, Дозировка: 100 — 10000 Si E/r один или несколько раз в день через рот перед и/или во время и/или

576050

Составитель С. Малютина

Техред И. Асталош

Корректор Д. Мельниченко

Редактор Л. Гончарова

Заказ 275B/49

Тираж 541 Подписное

Ц11ИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, 1 аушская наб„д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Формы изготовлею1я: таблетки, драже, капсулы, раствор, суспензия, гранулы, жевательная резинка, зубная паста и как добавка к содержащим сахарозу пищевым и/или вкусовым продуктам.

Пример 1. 5 г ингибитора амилаэы из актинопланаценового штамма SE 50 с 10 10

А! Е/г и 220 SiE/ã растворяют в 50 мл 0,05 М буфера из ацетата натрия с рН 4,5, добавляют 25 мг

Р-амилазы из ячменя и инкубируют при 35 С. По истечении Зч расщепление заканчюают. Инкубационную смесь, размешивая, BKRIIbIBRICT непосредственно в сухой спирт, белый хлопьевидный осадок отсасывают на путче, IIpOMI IBBKIT этанолом и эфиром, каждым два раза и сущат в вакууме.

Выход 2,5 г с 4,6 10 Ai Е/г н 700SiE/ã.

Пример 2. 100r ингибитора амилазы из штамма SE 50 разбавляют в 500 мл 2 N H S04 и гидролизуют 4 ч при 100 С. После охлаждения черно - коричневый раствор посредством 10 и КОН устанавливают рН2 и для обесцвечивания 2раза добавляют 4 г активного угля, каждый раз размешивают около 10 мин и отсасывают на путче. Уголь выкидывают и светло - желтый фильтрат нейтрализуют 10 М K0H (pH 6,6), Дпя адсорбции на угле активных в отношении торможения част1щ, добавляют 20 r активированного угля. После 10 мнн размешивания отсасывают на путче, и фильтрат еще раз адсорбируют 10 r активированного угля, Остаток угля объединяют, фильтрат выбрасывают.

Объединенные остатки угля с целью удаления остаточных солей и глюкозы промывают на путче 2 л дистиллированной воды и 2 л 2,5 íîãî этанола и затем 3 раза десорбируют 10 о-ным и затем

15 o-ным этанолом каждый раэ 750 мл. Д/1я десорбции размешивают каждьп1 раз 10 мин,. отсасывают на путче и добавляют свежее десорбцнонное средство. Соответствующие фильтраты из 10%-ной или 15%-ной десорбции объединяют, в ротационном выпарителе сгущают приблизительно до 20 мл и лпофилизируют.

Выход приблизительно 2 г 10 о.ной фракции и

1,2 г 15%-ной фракщ и.

Специфическая активность 10%-ной фракции

9000 Si E/ã, 0,2 106 Ai E/г, активность 15%-ной фракции 15000 Si Е/r, 0,5 10 Ai Е/r.

Пример 3. 200 г изолированного из актинопланаценов ого штамма SE 82 ингибитора амилазы (6 106 AiЕ/г, 160 SiE/г) растворяют в

10 мл 0,75 М HCI. Исходный раствор имеет активность 120 10 Ai Е/л при 3200 SiE/ë. Этот раствор инкубируют в течение 30 мин при 100 С в водяной бане, затем охлаждают и испытывают. Содержание пнгибитора амилазы в полученном гидролизате составляет 8 106 AiE/л, а ингибитора сахаразы—

21000 SiЕ/л.

Пример 4. 200 г изолированного из актинопланаценового штамма SB 18 ингибитора амилазы (4- 106 AiE/г, 310 SiE/r) растворяют в

10 мл 0,75 1ч HCI. Исходный раствор имеет активность 80 10 AiE/л и 6200 SiЕ/л. Этот раствор инкубируют 30 мин при 100 С в водяной бане, о затем охлаждают и испытывают. Содержание ингибитора амилазы в полученном гидролизате составляет 10 10 Ai Е/л, а ингибитора сахаразы

28000 SiE/ë.

Формула изобретения

1. Способ получения ингибиторов сахаразы путем выращивания штамма, Actinoplanaceen SE 50, SE 82 или SB 18 на питательной среде с последующим выделением целевого продукта, о т ли ча ющ и и ся тем, что, с целью повышения активности ингибирования сахаразы, выделенный целевой продукт подвергают гидролизу.

2, Способ по п. 1, отличающийся тем, что гидролиз осуществляют водным раствором кислоты.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что гидролиз осуществляют Р-амилазой.

Источники информации, принятые во внимание прп экспертизе:

1. Заявка ФРГ Р2064092.0, 1970,