Фаг ро29, лизирующий бактерии рrотеus мirавilis и рrотеus vulgaris

 

Изобретение относится к вирусологии , а именно к лечебным бактериофагам . Целью изобретения является фаг Р029, имеющий широкий спектр литического действия в отношении бактерий Proteus mirabilis и Proteus vulgaris. Указанный фаг выделен из сточных вод. Впем.1 абсорбции данного фага на бактерии-хозяине равно 25 мин, латентный период длится 55 мин, при максимальном выходе фага из одной клетки в количесгье 115 части;;. Фаг лиэирует 48%, отделенных от больных штаммов Proteus mirabilis и Proteus vulgaris. 2 таОл. о (Л

СОЮЗ СОЕЕТСНИХ

СООИАЛИСТИ"1ЕСКИ Х

РЕСПУБЛИК

С 12 N 7/10

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4 707614/13 (22) 19.06.89 (46) 07 06.91. Бюл. »"- 21 (71) Тбилисский научно-исследовательский институт вакцин и сыворо ок Научно-производственного объединения

"БактериоАаг (72) З.Д.Чали»пвили, И.А.Чолокашвили, M.Ã.Äçóëèaøâèëè, Н.Н.Бллардж»»»»ви»»н, К.К. Гачечиладзе и Т.Г Чани»пв»»ли (53) 576.858.9(088.8) (56) Proresky О. W. e t . а1 . The mc r>holopy of Proteus Ьасг.е. iop1»age.

J Gen Microbiol 1965, 41.

Taubeneck. U° . Feinstruktur von

Proteus Hacreriophagen. â€,1. Арр1.

Microbiol 1968, 8.

Изобретение относится < вирусологии,а именно к лечебным »»»ar;

Целью изобретения является д.аг

Р029, имеюг»ий иироки»» спектр литического действия в отношении бактерий

Proteus mirabilis u Proteus vul8aris.

Культурально-морфологические признаки. При посеве двуслойньп; методом на агаре Мартена величина негативных пятен равна 0,5-1 мм в диаметре, колонии прозрачные, край ровный. В бульоне Мартена при посевной дозе и х

»»10 микробных клеток на 1 мл среды и множественности 0,1, при инкубации при температуре (37+1) С в течение

4 ч накапливается в количестве до и 1») ROE/мл.

„„SU„„1654334- А 1 (54) пА1 Р029, .1111311Р:»,ОЩ111 БАКТЕРИИ

PROTEUS HIRkBILIS И PROTEUS KVLGARIS (57) Изобретение относится к вирусологии, а именно к лечебным бактериофагам. Целью изобретения является Aar

Р029, имеющий п»ирокий спектр литического действия в отношении бактерий

Proteus mirabilis »» Proteus vulgaris.

Указанньп» bar вь»делен из сточных вод.

Ppe»» . а,".сорб»»и»» данного» »ага на бактерии-хозяине рав»»о 25 мин, латентный нерио; длится 55 мин, при максимальном выходе Лага иэ одной клетки в колич«с"г»»е 115 част»ц. Фаг лиэирует 48% °

-ве.:е» ыделе»»;»ь»х от больных штаммов

Рго еus mirabilis и P ote«s vulgaris.

2 табл, Ф»»эиологнчес»»ие признаки. Титр Лага, то есть максимальное разведение, при котором определяется литическое г действие Аага, равен n ° 1 " БОЕ/ют.

Время адсорбции 25 мин, латентный период 55 мин. Урожайность 115 частиц на одну иАи»»ированную клетку.

Спектр литического действия. Фаг лиэирует 48% свежевыделенных от больных штаммов Proteus mirabilis u Proteus л»18аг»з.

Серологические признаки.

Путем иммунизации трех кроликов получают специфическую антиАаговую сыворотку. При этом первую инъекцию делают внутримышечно (2 мл с содержанием 1 10 SOF./мл вместе с полным

1654334

Таблица1

Штамм Разведения фаэовой суспензии на питательном бульоне

Фаг

Титр фаговых частиц, БОЕ/мл

10 е 10 т 10

Р029 P.vulgaris 6605 410

4 10

39 адъювантом Фрейнда), а затем через

1 мес вводят внутривенно 2 мл фага

1 ° 10ц БОЕ/мп, а на 10-й день после последней инъекции кроликов обескров5 лнвают и иэ крови получают сыворотку.

Кинетику скорости нейтрализации определяют по методу М.Адамса, равна К

=1400 1/мин.

Морфологические признаки. Посредством электронного микроскопа устанавливают морфологию и размеры фаговых частиц. Вактериофаг Р029 имеет гексогональную головку и сократимый отросток.

На конце отростка отмечается наличие некоторого утолщения. Размеры AaroaoA головки 78 нм х 18 нм. Отростка

340 нм х 22 нм, отростка в сокращенном виде 140 нм х 26 нм, свободного стержня 1 18 нм х 13 нм, шейки 17 нм.

Фаг Р029 обладает широким спектром литического действия на бактерии

Proteus mirabilis u Proteus vulgaris, дополняет известную коллекцию и используется для изготовления лечебного 25 препарата бактериофага протеус, Пример. Фаговую суспенэию разводят десятикратным разведением до .уровня 10, Из каждой пробирки берут пробу по 1 мп фаговой суспенэин и добавляют смыв 18-часовой агаровой культуры в объеме О, 1 мл. К этой смеси о добавляют расплавленный до 46 С

О, 1Х-ный агар-агар на питательном бульоне, содержимое пробирки выпивают на предварительно приготовленные чашки Петри с твердым слоем 1,5Х-ного агар-агара на питательном бульоне.

Чашки оставляют до застывания верхнего слоя, Затем их переворачивают дном вверх и в таком положении инкубируют в термостате при 37 С 18 ч. На следующий день становится возможным подсчет стерильных пятен в виде прозрачных эон на непрозрачном фоне бактериального роста.

Определение диапазона литического действия, 1,5Х-ный твердый слой агар-агара на питательном бульоне обрабатывают этиловым спиртом для сдерживания роения исследуемой культуры и чашки

° о высушивают в термостате при 37 С в течение 30 мин. После высушивания на поверхность агар-агара наносят полоски 4-часовой бульонной культуры.

Полоски подсушивают и на них наносят суспенэию фага в виде капли.

Содержимое чашек инкубируют при 37 С в течение 4-13 ч. Лизирующне участки наблюдаются на полоске бактериального роста в области нанесения капли фага °

Результаты опытов представлены в табл. 1 и 2.

Как следует из табл. 1 и 2, фаг обладает по отношению к штаммам Proteus mirabilis u Proteus vulgaris высокой активностью литического действия .

Формула и э о бр ете ния

Фаг РО29 У Ф-138, лизирующий бактерии Proteus rnirabil is u Proteus

vulgaris.

I! 65433й

Таблица 2

Доля лизированных игаммов, Х

Количество

Фаг оличество лизированных штамоверенных пггяммов, шт. ов, шт.

48,4

748 362

Р029

Производственная поливалентная раса 748

Производственная поливалентная раса с добавлением фага Р029 748

21,9

164

52,0

389

Составитель С.Светлышев

Редактор Н.Гунько Техред Л.0лийнык Корректор А.0бручар ф

Заказ 1930 Тирах 369 Подписное

ВНИКЛИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ушгород, ул. Гагарина,101