Способ определения степени биозараженности виноматериалов
Изобретение относится к пищевой промышленности , в частности к винодельческой , и касается идентификации происхождения пороков и повышения достоверности определения поражения молочнокислыми бактериями соков и виноматериалов по готовому продукту Цель изобретения - повышение точности определения биозараженности виноматериала молочнокислыми бактериями рода Lactobaclllus. Это достигается тем, что оценку проводят по концентрации орнитина при ее превышении 12 ± 2 мг/дм в исследуемом продукте. 1 табл.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РеспуБлиК
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ ПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 0» (Л ф 4 Ф О (21) 4611679/13 (22) 28.10.88 (46) 07.06.91. Бюл. М 21 (71) Научно-производственное объединение по виноградарству "Виерул" (72) А.Н;Постная и А.Н.Матущэк (53) 663.1 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР N. 1510527, кл. G 01 N 33/02, 1987.. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕПЕНИ БИОЗАРАЖЕН НОСТИ ВИНОМАТЕРИАЛОВ Изобретение относится к пищевой промышленности, в частности к винодельческой, и касается идентификации происхождения пороков и повышения достоверности определения поражения молочнокислыми бактериями рода Lactobacillus соков и виноматериалов по готовому продукту. Целью изобретения является повышение точности определения биозараженности виноматериалов молочнокислыми бактериями рода Lactobacillus. Из средней пробы сока, виноматериалэ и вива с мышиным тоном выделяют с последующим определением качественного и количественного состава свободные аминокислоты и по концентрации.орнитина судят о пути возникновения мышиного тона в резул ьтате жиз недея тел ьн ости молочнокислых бактерий рода Lactobacillus. Среднюю пробу образца в количестве 5 см наносят на колонну с смолой КУ-2 в Н -форме. Орнитин элюируют градиентным раствором 5U 1654740 А1 (57) Изобретение относится к пищевой промышленности, в частности к винодельческой, и касается идентификации происхождения пороков и повышения достоверности определения поражения молочнокислыми бактериями соков и виноматериалов по готовому продукту. Цель изобретения — повышение точности определения биозараженности виноматериала молочнокислыми бактериями рода Lactobaclllus. Это достигается тем, что оценку проводят по концентрации орнитинэ при ее превышении 12 + 2 мг!дм в исследуемом продукте. 1 табл. аммиака: 2 М 100 см и 4н. 200 см . Обьедиз ненный элюат упаривают досуха, перерастворяют в бидистиллированной воде и вновь упаривают досуха, По концентрации орнитина судят о причине возникновения порока: до 12 +. з +. 2 м г/дм — окислительно-восстановительный, выше 12 +- 2 мг/дм — микробиальз ный путь образования пороков. Пример 1. Виноград белых сортов перерабатывают на дробилке-гребнеотделителе, полученную мезгу прессуют. Отбирают сусло-самотек и первое давление. Сусло осветляют отстаиванием, охлаждают и после снятия с осадка спиртуют для получения спиртованного сока крепостью 16 об.% спирта. Спиртованный сок хранят при 4 — 8 С в течение года. В соке при хранении образуется мышиный тон. Отбирают среднюю пробу, которую разделяют на две части. Одну часть пастеризуют и фильтруют 1654740 через обеспложивающий фильтр, получают стерильную пробу образца. По 10см исходной и стерильной пробы спиртованного сусла центрифугируют 15 мин при 3 тыс, об./мин. Центрифугат удаляют, а осадок микроскопируют. В исходном образце по.сле центрифугирования определяют в поле зрения скопление молочнокислых бактерий рода Lactobacillus в виде тонких палочек, расположенных отдельно и в виде цепочек. В стерильной пробе не обнаруживают болезнетворные бактерии. Для провоцирования роста бактерий проводят посев образца на питательную среду с последующим термостатированием при 30 С в течение 4 — б сут. После микроскопирования стерильной пробы молочнокислые бактерии не обнаружены. По 5 см исходной и стерильной средней пробы спиртованного сока наносят на колонки со смолой КУ-2 в Н+-форме совместно с внутренним стануартом — норлейцином в количестве 0,5 см при концентрации 0,25 M и промывают дистиллированной водой объемом 300 см для удаления редуцирующих веществ.. Орнитин в составе свободных аминокислот элюируют градиентным раствором аммиака в концентрации 2 н. 100 см и 4 н. 200 смз. Объединенный аммиачный элюат упаривают до сухого остатка, перерастворяют в 300 см бидистилз лированной воды и вновь упаривают до сухого остатка, Операцию перерастворения сухого остатка свободных аминокислот и упаривания в воде повторяют дважды, а затем его разводят в 5 см цитратно-литиевого буферного раствора с рН 2,2. Трехкратное упаривание образца требуется для максимального удаления аммиака, который мешает определению орнитина, В порядке разделения в режиме свободных аминокислот на аминокислотном анализаторе орнитин элюируют сразу же за аммиаком. Анализ свободных аминокислот проводят на аминокислотном анализаторе. Разделение свободных аминокислот осуществляют на ионите Ostlon LGFA. Злюирование орнитина проводят буферным раствором рН 5,0 при скорости буферного потока 14 см /ч и н ин гидри нового реа ктива 12 см /ч при температуре колонки 58 С. Определяют орнитин на 152-й минуте анализа. Количественное определение орнитина проводят по величине оптической плотности при 520 нм, которую переводят в соответствующую концентрацию (мг/дмз) по калибровочному графику. Качественный и количественный состав свободных аминокислот исходного и стерильного спиртованного сока приведен в таблице. Пастеризация образца не влияет на качественный и количественный состав сво5 бодных аминокислот. Концентрация орнитина в обоих вариантах опытов в пределах 40 мг/дмз, что выше нормального содержания его в здоровом соке (1 ч- 2 мг/дм"). В этом соке были обнаружены молочнокислые 10 бактерии рода Lactobaclllus, В результате их жизнедеятельности произо. чло увеличение орнитина и образовался мышиный тон. Стерильный образец не дал роста микроорганизмов. 15 Пример 2. Виноград сорта Траминер перерабатывают на дробилке-гребнеотделителе, полученную мезгу прессуют и отбирают сусло-самотек и первое давление, Сусло осветляют отстаиванием при охлаж20 дении с добавлением 2 г/дал бентонитовой суспенэии. Осветление проводят в течение 18 — 20 ч и снимают с осадка, Осветленный сок крепят до концентрации 16 об. этиловым спиртом и хранят в течение года, В соке 25 образовался мышиный ток. Из образца отбирают среднюю пробу, которую делят на две части. Одну часть пробы пастеризуют и фильтруют через обеспл оживающий фильтр, получают стерильную пробу образ30 ца. Исходную и стерильную пробы образца готовят для микроскопирования и микроскопируют. Болеэнетворные микроорганизмы в обеих пробах образца не обнаружены. Для провоцирования роста бактерий ïðoâî35 дят посев проб на питательный раствор. Пробы выдерживают в термостате при 30 С . в течение 4 — б сут. По истечении этого времени в пробах образца при микроскопировании молочнокислые бактерии рода 40 Lactobacillus не обнаружены. Они не размножились, т.е, образец здоровый. Определение орнитина в исходном и пастеризованном спиртованном соке Траминер проводят следующим образом. По 5 см 45 каждой пробы образца совместно с внутренним стандартом — 0 25 М раствором норлейцина s количестве 0.5 см наносят на 3 колонки со смолой КУ-2 в H -форме и про+ мывают 300 см бидистиллированной воды 50 для удаления редуцирующих веществ. Элюирование орнитина в составе свободных аминокислот осуществляют градиентным раствором; 100см 2 н. и200см 4 н. аммиз ка. Аммиачный элюат упаривают до сухого 55 остатка, который перерастворяют в бидистиллированной воде и вновь упаривают. Операцию перерастворения сухого остатка в бидистиллированной воде и упаривания повторяют дважды. Сухой остаток разводят в 5 см цитратно-литиевого буферного рас1654740 Аминокисло Цисте инов а кислота 0,43 0,03 0,43 0,32 Аспарагиновая кислота 3,5 0,37 19,9 2,33 18,4 . 2,45 3,0 0,31 2,20 18,7 17,0 2,26 25,8 2,46 35,0 3,33 5 3 1,01 Следы 81,9 9,95 92,8 ll 29 2,73 14,00 1,66 1 ° 90 16,3 3,04 14,6 89,1 74,7 11,74 5 3 6,9.1,27 15,9 14,2 1,70 Следы твора при рН 2,2. Для максимального удаления аммиака проводят трехкратное упаривание элюата. Аммиак мешает определению о 1нитина. Уменьшение содержания аммиака увеличивает степень его разделе-. 5 ния с орнитином. Количественное определение орнитина проводят на аминокислотном анализаторе. Разделение свободных аминокислот осуществляют на ионите Ostion LGFA. Элюирование орнитина прохо- 10 дит цитратно-литиевым буфером рН 5,0 при скорости буферного потока 14 см /ч и нингидринового реактива 12 см /ч при температуре колонки 58 С. Элюируется орнитин на 152-й минуте анализа. Концентрацию ор- 15 нитина определяют по величине оптической плотности при 520 нм, которую переводят соответствующую концентрацию (Mr/äì ) по калибровочному графику. . По данным качественного и количест- 20 венного состава свободных аминокислот исходной и стерильной пробы образца спиртованного сока сорта Траминер приведена концентрация орнитина в исходном и стерильном спиртованном соке практиче- 25 ски одинаковая и не превышает 10 мг/дм . з Это позволяет сделать вывод: мышиный тон образовался в этом случае, только в результате окислительно-восстановительных реТреонин Серии Глютаминовая кислота Глютамин Пролин Глицин Аланин Цитруллин Валин Цистин 1/2 акций. Концентрация орнитина в этом образце не превышает его критического содержания для виноградной ягоды. Предлагаемый способ позволяет установить наличие молочнокислых бактерий, образующих мышиный тон в результате своей жизнедеятельности, и обладает специфичностью определения, объективностью в оценке больших партий виноматериалов и виноградного сока. возможностью контролирования сока и виноматериалов на наличие продуктов жизнедеятельности болезнетворных молочнокислых бактерий. Благодаря высокой достоверности способа его можно использовать в качестве арбитражного метода в случае необходимости четкой идентификации причин возникновения мышиного тона. Формула изобретения Способ определения степени биозараженности виноматериалов по наличию аминокислоты.отличающийся тем,что,с целью повышения точности определения биозараженности виноматериала молочнокислыми бактериями рода Lactobaclllus, определение наличия аминокислоты осуществляют по концентрации орнитина в исследуемом продукте, превышающей 10— 14 мг/дм . 1654740 с Продолжение таблицы Метионин Цистатионин 9,6 9,2 9,4 9,5 1,02 1,02 1е01 Изолейцин 9,5.Лейцин Тирозин Феннлаланин 0,99 8,8 0,73 0,68 I 17 15,2 13 8 1,29 -Аминомаслянная 1 кислота 69,4 9,42 0,86 3,8 8,86 51, 04 Составитель Г. Богачева Техред М,Моргентал Корректор М,Шароши Редактор И.Дербак Заказ 1948 Тираж 416 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-З5, Раушская наб„4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 Этаноламин Орнитин Лизин Гистидин Аргинин 67,2 9,12 3,3 0,75 40,4 8,56 Следы Следы 18018 58 13 41,8 Следы Следы 158,8
