Способ определения количества реакционных центров фотосистемы 2 растений

 

Изобретение относится к биохимии, биофизике и физиологии растений, а именно к способам определения количества реакционных центров фотосистемы 2 растений. Целью изобретения является повышение точности и ускорение способа. Для достижения поставленной цели спектрофотометрическое измерение протоиндуцированных изменений поглощения проводят в среде, содержащей 25 - 100 мкМ силикомолибдата натрия и 0,5 - 1 мМ этилендиаминтетраацетата натрия. В качестве исследуемого образца используют клетки или хлоропласты или субхлоропластные частицы, а количество реакционных центров протосистемы 2 определяют по количеству первичного донора электрона протосистемы 2 - П<SB POS="POST">680</SB>.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4645538/13 (22) 06.02.89 (46) 23.07.91. Бюл. ¹ 27 (71) Институт почвоведения и фотосинтеза

АН СССР (72) С.И.Аллахвердиев (53) 541.144.7: 581:174.1 (088,8) (56) РМ.А.S US, 1980, ч. 77, № 8, р. 4712—

4716. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА РЕАКЦИОННЫХ ЦЕНТРОВ ФОТОСИ. СТЕМЫ ДВУХ РАСТЕНИЙ (57) Изобретение относится к биохимии, биофизике и физиологии растений, а именно к способам определения количества реакциИзобретение относится к биофизике, биохимии и физиологии растений, а именно к способам определения количества реакционных центров растений, и может быть использовано в исследованиях структурнофункциональной организации пигмент-.белковолипидного. комплекса фотосистемы двух растений.

Цель изобретения — повышение точности и ускорение способа, Пример1. Суспензию клеток водоросли Chlamydomonas reinhardlI инкбируют в течение 10-15 мин при комнатной температуре в среде А, содержащей 0,1 тритона

Х-100; 0,8-1 М трис-HCI (рН 8,0-9,3); 35-40 мМ NaCI; 0,5-1,0 мМ этилендиаминтетраацетата натрия.

В аликвоте определяют концентрацию хлорофилла в 80 -ном ацетоне для вычисления величины фотосинтетической едини„„5U„„1664176 А1

<5!)5 А 01 G 7/00, G 01 N 33/00 онных центров фотосистемы двух растений.

Целью изобретения является повышение точности и ускорение способа. Для достижения поставленной цепи спектрофотометрическое измерение протоиндуцированных изменений поглощения проводят в среде, содержащей 25 — 100 мкМ силикомолибдата натрия и 0,5 — 1 мМ этилендиаминтетраацетата натрия. В качестве исследуемого образца используют клетки или хлоропласты или субхлоропластные частицы, а количество реакционных центров протосистемы двух растений определяют по количеству первичного донора электрона протосистемы

2 — Пвво, цы, Для спектрофотометрических измерений фотоиндуцированных изменений lloглощения образца Л А при 678 нм в 0 кювету (I = 1 см) вносят 50 мкМ силикомо- 0, либдата натрия и доводят до 2 мл суспензией клеток. и

Измерения ЛА Пбв0 проводят на двухлучевой фосфороскопической установке.

Мощность зондирующего света — 50 эрг см с, мощность действующего света 2,8

10 эрг см 2 с 1. Точность измерения составляет 10 4 ед, оптической плотности.

Пример 2. Хлоропласты выделяют из

10-14-дневных проростков гороха на холоду (при 0 + 4 С). Для этого 50 г листьев .разрушают в гомогенизаторе в течение 2-3 с в среде, содержащей 0,35 М NaCI, 0,02 М .трис-HCI буфер(рН 7,8) и 2 мг/мл аскорбата натрия. Фильтрат, полученный после отжимания массы через полотно и восемь слоев

1664176

Состави с, ь Н.Родова

Техред М.Моргентал Корректор И.Муска

Редактор А.Козориз

Заказ 2333 Тираж 411 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101 марли, центрифугируют в течение 1 мин при 1000 об/мин, осадок отбрасывают, супернатант вновь центрифугируют при

5000 об/мин в течение 5 мин. Супернатант (обломки хлоропластов) отбрасывают, а осадок целых хлоропластов ресуспендируют в среде А. Концентрацию хлорофилла определяют в 80%-ном ацетоне.

Определение количества реакционных центров фотосистемы двух растений в хлоропластах проводят по примеру 1.

Пример 3. Проводят выделение фрагментов хлоропластов, обогащенных фотосистемой двух растений..Для этого хлоропласты тщательно суспендируют в среде, содержащей 0,07 М фосфатный буфер (рН 7,0), 0,5 М сахарозу и 0,035 М NaCI.

Затем вносят в реакционную смесь 1 -ный раствор дигитонина для разрушения хлоропластной мембраны. Полученную суспензию обрабатывают на ультразвуковом диспергаторе (22 кГц, 400 Вт, 1 мин), чтобы получить фрагменты хлоропластов с одинаковой степенью нарушенности мембран, и после добавления NaCI (до 2 ) инкубируют на ледяной бане при энергичном перемешивании в течение 40 мин. Гомогенат центрифугируют 15 мин при 4000 xg. осадок отбрасывают, а к супернатанту быстро добавляют тритон Х-100 до конечной концентрации 0,1 — 0,15% и вновь центрифу5 гируют при 20000 xg в течение 45 мин. Фрагменты хлоропластов собирают и ресуспендируют в среде А. Измерения проводятся по примеру 1.

Формула изобретения

10 Способ определения количества реакционных центров фотосистемы двух растений, включающий определение концентрации хлорофилла в исследуемом образце и последующее спектрофотометри15 ческое измерение фотоиндуцированных изменений поглощения образца, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения точности и ускорения способа, в качестве исследуемого образца используют клетки

20 или хлоропласты или субхлоропластные частицы, спектрофотометрическое измерение проводят в среде. содержащей 25 — 100 мкМ силикомолибдата натрия и 0,5 — 1 мМ этилендиаминтетраацетата натрия, а количество

25 реакционных центров фотосистемы 2 определяют по количеству первичного донора электрона фотосистемы 2-Пщо.