Штамм вируса болезни гамборо для производства вакцин

 

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и может быть использовано при производстве вакцин против болезни Гамборо. Целью изобретения является штамм "ВНИВИП" вируса болезни Гамборо, легко культивируемый в культуре клеток куриных фибробластов с высокой биологической активностью. Штамм депонирован в Государственной коллекции вирусов под N 2200. Штамм культивируется в культуре клеток куриных фибробластов, что позволяет накопить вирусную массу в больших объемах. Титр вируса 10<SP POS="POST">5,5</SP> - 10<SP POS="POST">6,</SP>° ТЦД<SB POS="POST">50</SB>/мл. Введение цыплятам различного возраста вируса в дозах 10<SP POS="POST">5</SP> - 10<SP POS="POST">6</SP> ТЦД<SB POS="POST">50</SB>/мл создает напряженный иммунитет, который обеспечивает защиту цыплят от заражения вирулентным штаммом данного возбудителя. Штамм безвреден для цыплят.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК ((9) (11) (я)з С 12 и 7/00, А 61 К 39/12

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4731484/13 (22) 16.08.89 (46) 07,08.91. Бюл, М 29 (71) Всесоюзный научно-исследовательский ветеринарный институт птицеводства (72) А.С.Алиев (53) 576.8.094.29(088.8) (56) Wlnterfleld R.W. Thocker НЛ. Immune

response and pathogenecIty of dIfferent

strains of Infections bursal disease virus

applied asvacclns. Avian. О!з,,1978, ч, 22, М

4, р. 721-731.

Wlnterfuld R. Wetal. Characteristics of

apparent derivatives ofthe 2512 Strain. of

Infections bursal dIsease virus when used as час ines. Avian 0!s„v.25, р. 900-910. (54) ШТАММ ВИРУСА БОЛЕЗНИ ГАМБОРО

ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ВАКЦИН

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и может быть использовано при производстве вакцин против болезни Гамборо.

Цель изобретения — штамм вируса болезни Гамборо, легко культивируемый в культуре клеток куриных фибробластов с высокой биологической активностью.

Авирулентный штамм "ВНИВИП" вируса болезни Гамборо адаптирован, поддерживается и титруется в культуре клеток куриных фибробластов, под агаровым покрытием образует однородные бляшки размером 1,0-1,5 мм. Штамм депонирован в

Государственной коллекции вирусов под

М 2200.

Пример 1, Штамм активно репродуцируется в цитоплазме клеток куриных фибробластов с проявлением цитопатиче(57) Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и может быть использовано: при производстве вакцин против болезни

Гамборо. Целью изобретения является штамм"ВНИВИП" вируса болезни Гамборо, легка культивируемый в культуре клеток ку риных фибробластов с высокой биологической активностью. Штамм депонирован в

Государственной коллекции вирусов пад

М 2200, Штамм кул ьтивируется в кул ьтуре клеток куриных фибрабластов, что позволяет накопить вирусную массу в больших обьемвх. Титр вируса 10 — 10 ТЦД50/мл.

Введение цыплятам различйога возраста вируса в дозах 10 -10 ТЦД5а/мл создает напряженный иммунитет, который обеспе- чивает защиту цыплят ат заражения вирулентным штаммом данного возбудителя.

Штамм безвреден для цыплят. ского действия вируса через 36 — 48 ч после заражения в видедегенерации и округления клеток, появления в них мелкой зернистости без нарушения целостности монослоя. Титр вируса при этом составляет

:.10 -10 ТЦЦ50/мл . Вирус имеет кубическую симметрию, без оболочки с диаметром 60-80 нм и относится к РНК-содержащим вирусам семейства Blrnaviridae.

Вирус устойчив к воздействию температуры

56 С в течение 30 мин, эфира и хлороформа. В лиофилизированном состоянии штамм вируса сохраняет свои иммунабиологические свойства при хранении в условиях холодильника в течение не менее двух лет.

Заражение вирусом культуры клеток не вызывает образования внутрияде рных и цитоплазматических включений в них.

1 ббРЭ392

Состави! ель И. Таре;ва

Техрсд Л,..1орге тал Корректор М. Чаксимишинец

Редактор Н, Яцола

Заказ 2626 Тираж 356 . Г одписное

ВНИИПИ Государственного комит та пс изсбретениям и o;I;рытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5

Производственно"издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101

Введение цыплятам оаэличного возраста штамма в дозах 10 — 10 ТЦДюlмл создает напряженный иммунитет, который обеспечивает защиту цыплят от заражения вирулентным штаммом данного возбудитеЛЯ, Пример 2. Для культивирования и титрации вируса болезни Гамборо используют культуру клеток куриных фибробластов.

Клеточную взвесь готовят путам трипсинизации (0,25%-ный растьор трипсина) ткани эмбриона в колбе с магнитной мешалкой, После центрифугирования взвеси при

1000 об./мин в течение 10 мин осадок клеток ресуспендируют в среде ¹ 199 с добавлением 10% инактивированной при

56 С в течение 30 мин сыворотки крупного

„ огатого скота. Подс ет количества .;леток производят при помощи камеры I оряева, Посевная доза 600-Ь00 тыс. клеток в 1 мл.

Среда роста состоит из равных количеств среды И лэ и г реди 5 !: 1 u9," дс,д>!»» ч ям

10 ь i...ü.:ã.-.рот,и крупного .о.-этого .:;;отэ.

Для заражения испольэу!От lèëä". jю культуру,ереэ 24 ч после посева, когда формируется сгглошной монослой. Пеоед заражением среду из матрасов сливают и в каждый матрас вносят десятикратные раз ведения вируса в объеме 0,5 мл, На каждое разведение вируса и.,я:сльзуют по 4 мапграса. После 30 мин инкубации при 37 С вирус сливают, монослой отмывают средой № 199 и наносят агаровое покрытие, в состав которого включали 1,5% агара "Дифко", раствора Эрла (10-кратный концентрат), 2.5% бъем сыворотки, 0,002%-ный p3c вор нейтрального красного и 0,49 /-ный раствор

Бикарбоната натрия.

Активность вируса определяют по титрам цитопатогенного действия, Учет и анализ бляшек проводят через 48 — 72 ч посло заражения. Измеряют только раздельные бляшки. При изучении популяции вируса болезни Гамборо в коммерческой вакцине методом бляшек установлено, что вирус образует бляшки разных раэмеров(от 0,5 до

3 — 4 мм).

Для получения клона вируса извлекают столбик агара под бляшкой, растворяют в 1

5 мл питательной среды (равный объем среды

Игла и среды ¹ 199 с добавлением 10% теля ьей сыворотки), вносят в пробирки с монослоем клеток куриных фибробластов, ин:убируют при 37 С п течение 2 — 3 сут. IC Ii:. ."ичие вируса регистрируют по цитопатогенному эффекту, характеризующемуся появлением небольших, округлых, темных клеток с выраженной зернистостью и с неровными краями. Такие клетки сначала

15 образовываются в отдельных местах монослоя, а затем число их постепенно увеличивается и через 36 — 48 ч охватывает до

60-Q0% мс -I j „ .

Для испытания стабильности признака

20 размера бляшек у выделенного клона размер >м 1,0-1,5 мм проводят 5 пассажей в культуре кле:::. куриных фиброобластов.

Клон считаю r с абильным, если в потомстве пассируемого вируса образовываются толь25 ко Бляшки размером 1,0 — 1,5 мм.

Устойчивость выделенного штамма к воздействию температуры, эфира и хлороформа определяют путем титрации вируса до и после воздействия на него указанных

30 факторов.

Пример 3. При проверке на остаточную вирулентность штамма в опытах на птице разных возврастных групп устанавливают его безвредность, Введение его в

35 ор; анизм птиц вызывает ооразование вируснейтралиэующих и вируспреципитирующих ацтител, что обеспечивает формип:.. ание невосприимчивости вакцинированнэй птицы к контрольному зараже40 нию вирулентным штаммом вируса болезни

Гамборо.

Формула изобретения

Штамм вируса болезни Гамборо ГКВ

45 I b 2200 для производства вакцин.