Способ хроматографического анализа конъюгированных желчных кислот



 

Изобретение может быть использовано для изучения липидов в организмах. Целью изобретения является повышение точности анализа и снижение токсичности элюента. Экстрагируют желчь спиртом, нагревают и центрифугируют. Анализируют раствор над осадком тонкослойной хроматографией. Элюентом служит смесь, хлороформ-этанол-ледяная уксусная кислота в соотношении 120:60:30. Одновременно анализируют смесь стандарта из тех же компонентов. Проявляют спиртовым раствором фосфорно-молибденовой кислоты и денситометрируют. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (ч)s G 01 МЗО/90

ГОСУДАРСТВЕ ННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

° » « » . «Ю !

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4393983/25 (22) 17.03,88 (46) 23,08,91. Бюл. М31 (71) Научно-исследовательский институт краевой патологии (72),Ф.Х.Тахтаев и Е.А,Изатуллаев (53) 543.544 (088.8) (56) Enoroth P. ТЫП вЂ” layer chromatography of

b lie alcohols a n d bile ac l dc. Li pl d

chromatographic analysis, I/.3, Меьч — Jork, Basel М. Dekker, lns„1976, р. 819 — 856.

Кирхнер. Тонкослойная хроматография.

М.: Мир, 1981, т.2, с,52 — 115, 285.

Изобретение относится к хроматографическому анализу и может быть использовано для узучения липидов в организмах, Цель изобретения — повышение точности анализа и снижения токсичности элюента.

Способ осуществляют следующим образом.

Из цельной желчи экстракт желчных кислот получают растворением 1 мл желчи в

9 мл 95 -ного этанола. После подогревания в течение 1 — 2 мин при температуре 80—

90 С (с целью денатурации белка) осуществляется осаждение денатурированного белка центрифугированием при 3000 об/мин в течение 5 мин, Из полученного супернатанта (надосадка) в последующем берется

10 мкл экстракта для нанесения на пластинку тонкого слоя для последующего разделения на отдельные фракции желчных

„„512„„1672353 А1 (54) СПОСОБ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО

АНАЛИЗА КОНЬЮГИРОВАННЫХ ЖЕЛЧНЫХ КИСЛОТ (57) Изобретение может быть использовано для изучения липидов в организмах, Целью изобретения является повышение точности анализа и снижение токсичности элюента.

Экстрагируют желчь спиртом, нагревают и центрифугируют. Анализируют раствор над осадком тонкослойной хроматографией, Элюентом служит смесь, хлороформ-этанол-ледяная уксусная кислота в соотношении 120:60:30. Одновременно анализируют смесь стандарта из тех же компонентов.

Проявляют спиртовым раствором фосфорно-молибденовой кислоты и денситометрируют, 2 табл. (коньюгированных) кислот. Для хроматографии на пластинках тонкого слоя берется камера (220 х 220 х 70) мм обкладывается изнутри с 3 сторон для лучшего насыщения растворителями фильтровальной бумагой, заливается смесью растворителей: хлороформ-этанол-ледяная уксусная кислота в соотношении компонентов, мл: (120:60. 30), закрывается пришлифованной крышкой.

Через 10 — 12 ч насыщения растворителями камера готова для элюирования.

Приготовление стандарта: по 10 мг таурохолевой, тауродезоксихолевой, гликолитохолевой,гликохолевой и гликодезоксихолевой кислот растворяют в 20 мл

95;(,-ного этанола. Из полученного раствора отбирается по 10 мкл и наносится на полоску ТСХ. Отдельно готовится стандарт фосфолипидов фосфатидилхолин (лецитин)лизолецитин, фасфатидилсерин, фосфа- 1672353

Таблица 1 тидилэтаноламин по 10 мл в 20 мл хлороформ-метанола (1;1) и 10 мкл наносится на полоску.

Пластина с нанесенными пробами желчных кислот, выделенными из желчи, и стан- 5 дартами помещается в камеру. После достижения фронтом растворителя верхнего края пластины, последняя вынимается, высушивается на воздухе до исчезновения запаха растворителей. Затем элюирование 10 повторяется, После высушивания пластина опрыскивается насыщенным спиртовым раствором фосфорномолибденой кислоты и выдерживается в термостате при 110—

120 С в течение 1 — 2 мин для проявления 15 пятен желчных кислот.

Подвижность отдельных фракций при хроматографии характеризуется так называемой величиной Rf, представляющей собой отношение расстояния между центром 20 пятна вещества и стартом к расстоянию между фронтом растворителя и стартом. На пластине фракции желчных кислот располагаются в следующей последовательности, соответственно Rt (см. табл.1). 25

Затем фракции денситометрируются и рассчитывается содержание отдельных фракций желчных кислот в исследуемой пробе по сопоставлению величин пиков денситограмм по сравнению со стандартами. 30

В табл.2 представлены данные по содержанию отдельных фракций желчных кислот желчи.

Из данных, приведенных в табл.2. видно, что использование способа позволяет 35 улучшить точность определения гликодезоксихолевой кислоты на 34 — 35 (,, а также точность отделения гликолитохолевой кислот от лецитина.

Пример. На пластинки наносятся

10 мкл экстракта липидов желчи (в 95 этаноле) и проводят двухкратное элюирование в системе растворителей: хлороформ — этанол — ледяная уксусная кислота (120:60:30) с целью разделения на отдельные фракции желчных (конъюгированных) кислот. После окончания процедуры элюирования пластины опрыскиваются насыщенным спиртовым раствором фосфорномолибденовой кислоты и выдерживаются в термостате при 110—

120 С в течение 1 — 2 мин для проявления пятен желчных кислот. Гликолитохолевая кислота отделяется от лецитина, а гликодезоксихолевая жестко отделена от фронта растворителя, что повышает точность денситометрического определения количественного определения последней на 34—

35/.

Формула изобретения

Способ хроматографического анализа конъюгированных желчных кислот путем нанесения спиртового экстракта желчных кислот на тонкослойную пластину, элюирования смесью органических растворителей, денситометрирования разделенных веществ, отличающийся тем, что, с целью повышения точности анализа и снижения токсичности элюента, проводят двойное элюирование в безводной системе растворителей; хлороформ — этанол — ледяная уксусная кислота в следующем соотношении компонентов, мл: 120:60:30.

1672353

Таблица 2

Название желчных кислот

-850,3 ч 36,7

-823.6 ч- 33,4

-415.7 + 2,28

Не оценивается

-232,6 -37.7

-86,4 + +43.1

Составитель М.Рождественская

Редактор С.Патрушева Техред М.Моргентал Корректор В,Гигняк

Заказ 2836 Тираж 368 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035. Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Таурохолевая

Тауродезоксихолевая

+-таурохенодезоксихолевая

Лецитин

Гли кол итохолевая

Гликохолевая

Гликодезоксихолевая

Система растворителейхлороформ-этанол-ледяная кс сная кислота (4 2:1, мг

Следы

-236.4 + 40,5

-116,0 + 28.7

Хлороформ метанол-ледяная уксусная кислота вода

13:5;2:1 количество, мг

-428,2 "- 21,6

Не оценивается в связи с наложением лецитина

Способ хроматографического анализа конъюгированных желчных кислот Способ хроматографического анализа конъюгированных желчных кислот Способ хроматографического анализа конъюгированных желчных кислот 

 

Похожие патенты:

Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано в биологической, химической и других отраслях промышленности при радиоиодировании белков и нуклеотидов изотопами иода

Изобретение относится к химическому анализу и может быть использовано для определения содержания аминов воздухе, в частности этилендиамина (ЭДА), β - оксиэтилэтилендиамина (β-ОЭЭДА) И N, N<SB POS="POST">1</SB>-БИС-Β-ОКСИЭТИЛЭТИЛЕНДИАМИНА (N, N<SB POS="POST">1</SB>-БИС-Β-ОЭЭДА)

Изобретение относится к способам определения ионов металлов и может быть использовано при анализе природгтых объектов, сточных вод с целью повышения чувствительности, точности, селективности определения кобальта6 никеля и цинка

Изобретение относится к гетероциклическим соединениям, в частности к применению 5-Хлор-4,6-дшнптробензофуразана в качестве реагента для проявления пятен в тонкослойной хроматсграфии ароматических аминов 5- хлорб-динктробензофуразан в ацетонитриле позволяет по окраске проявленных пятен проводить качественную идентификацию пер ччных ароматических аминов в присутствии вторичных и третичных , а также в ряде случаев обнаруживать изомерные и замещенные соединения 5-Хлор-4,6-динитробензофуразан получают нитрованием 5-хлор-6- нитробензофуразана

Изобретение относится к анализу органических веществ - полинитроаренов, широко применяемых в народном хозяйстве в качестве полупродуктов органического синтеза , полимерных материалов и пластмасс, лекарственных препаратов и химичесгих средств защиты растений, являющихся по бочными продуктами в синтезе бризантных взрывчатых веществ Цель изобретения - повышение точности анализа и определение ориентации нитрогрупп в молекулах полинитроаренов

Изобретение относится к способам разделения селена (TV), теплура (IV) и золота (III) методом тонкослойной хроматографии (1СХ) в водных растворах и может быть использовано на предприятиях цветной металлургии

Изобретение относится к анализу органических соединений-арен-(алкан)-сульфонилариламидов, используемых в качестве полупродуктов органического синтеза, красителей, пигментов, лекарственных препаратов, химических реактивов, добавок к полимерам

Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано агрохимическими, ветеринарными, санитарно-эпидемиологическими службами при контроле химических средств защиты растений в объектах окружающей среды

Изобретение относится к способам определения германия, позволяет повысить предел его обнаружения в неорганических материалах и может быть использовано на предприятиях редкометаллической промышленности

Изобретение относится к определению остаточных количеств гербицида в продуктах животного происхождения

Изобретение относится к области химического анализа и может быть использовано для определения концентраций о-хлорфенола и 2,6-дихлорфенола в воздухе при санитарно-гигиенических исследованиях на содержание хлорфенолов

Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано в металлургии, химической индустрии, экологии, медицине, пищевой промышленности

Изобретение относится к аналитической химии и может найти применение в аналитических лабораториях
Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии и дерматологии

Изобретение относится к области медицины, а именно к биохимии

Изобретение относится к аналитической химии органических соединений и может быть рекомендовано для идентификации гидроксисульфокислот (2-нафтол-6-сульфокислоты, 1-нафтол-3,8-дисульфокислоты, 2-нафтол-6,8-дисульфокислоты, 1-амино-2-нафтол-4-сульфокислоты, 1-амино-8-нафтол-3,6-дисульфокислоты, 5-аминосульфосалициловой) при анализе сточных вод производства азокрасителей

Изобретение относится к области химического анализа и может быть использовано для определения качественного состава органических веществ в объектах на основе органической матрицы: в осадках избыточного активного ила промышленных и коммунальных биологических очистных сооружений, в донных отложениях водных объектов, в органоминеральных удобрениях и почвах при экологических и санитарно-химических исследованиях

Изобретение относится к биологии, токсикологической и ветеринарной химии, а именно к способам определения N-(бензимидазолил-2)-O-метилкарбамата в биологическом материале, и может быть использовано в практике санэпидстанций, химико-токсикологических и ветеринарных лабораторий

Изобретение относится к области исследования материалов химическими способами, а именно путем хроматографии, и может найти применение при оценке качества антоциановых красителей, полученных безкислотным способом из растительного сырья, в фармацевтической, ликероводочной и других отраслях пищевой промышленности
© Патентный поиск, поиск патентов на изобретения - FindPatent.RU 2012-2024
Политика конфиденциальности 2013-03-28T03:37:48
Наверх