Способ получения 1-карбацефалоспориновых соединений

 

Изобретение относится к гетероциклическим соединениям, в частности к получению 1-карбацефалоспориновых соединений ф-лы COOR2 we «IN с- ,, , 9Rp-CH-i NH R1 где Rx- Н, трет-бутилоксикарбонильная, аллилоксикарбонильная или тритильная защитные группы; Ry - низший а л кил, бензил, хлорбензил, карбоксиметил, причем карбоксигруппа может быть защищена в форме бензгидрилового сложного эфира, или аминоэтил, где аминогруппа может быть защищена трет-бутилоксикарбонильной группой; Rp - фенил или . бензотиеч;3-ил; Rq - Н, трет-бутоксикарбонильная или аллилоксикарбонильная защитная группа, или 4-этил-2,3-диоксипиперазиноюарбонил; RI - Н или метоксигруппа; R2 - Н, А-ОН, Ci - С4 алкоксил, аллилоксил, бензилоксил илиСНз, которые являются антибиотиками. Цель - разработка способа получения более активных соединений. Получение ведут деэтерификацией соединения ф-лы (I), где R2 - трет-бутил или ал л ил. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 С 07 О 487/04

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ!,:« -!:Р!:=9 8!

E ! К„с" ;.. q,-, l !, "l !! ! . I! ° .

" " " !-* сФ ) к:! iА

К ПАТЕНТУ г1 гдеR g С р,— ñí-, l

R

О (r)

С вЂ” A i

cooR> (21) 4203667/04 (62) 4028724/04

;22) 17.11,87 (23) 29.12.86 (31) 814943 (32) 30,12.85 (33) US (46) 07.10.91. Бюл, (Ф 37 (71) Эли Лилли энд Компани (US) (72) Джон Эдвин Манрой (0$) (53) 547,233.07 (088.8) (56) Hetегоcycles, 1977, ч.7, hh 2.

Патент США М 3994885, кл. 260-243, 1978. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 1-КАРБАЦЕФАЛОСПОРИНОВЫХ СОЕДИНЕНИЙ (57) Изобретение относится к гетероциклическим соединениям, в частности к получению 1-карбацефалоспориновых соединений ф-лы

R1-С-ИН

Изобретение относится к способу получения новых производных 1-карбацефалоспориновых соединений, которые представляют собой антибиотики широкого спектра действия, особенно эффективные против грамположительных бактерий.

Целью изобретения является способ получения новых соединений в ряду цефалоспориновых производных, обладающих более высокой активностью, „„SU „„1683499 АЗ гдеЯх — Н, трет-бутилоксикарбонильная, аллилоксикарбонильная или тритильная защитные группы; ИУ вЂ” нИзший алкил, бензил, хлорбензил, карбоксиметил, причем карбоксигруппа может быть защищена в форме бензгидрилового сложного эфира, или аминоэтил, где аминогруппа может быть защищена трет-бутилоксикарбонильной группой; Rp — фенил или . бензотиен 3-ил;

Rq — Н, трет-бутоксикарбонильная или алли- " локсикарбонильная защитная группа, или

4-зтил-2,3-диокси пи пера зинока рбонил;

R1 — Н или метоксигруппа; Rg — Н, А-ОН, С1 — С4 алкоксил, аллилоксил, бензилоксил или СНз, которые являются антибиотиками.

Цель — разработка способа получения более активных соединений. Получение ведут деэтерификацией соединения ф-лы (l), где Rz— трет-бутил или аллил. 2 табл.

Пример 1. 7 Р -(2-тиенилацетиламино)-3-метоксикарбонил-1-ка рба-3-цефем-4

-карбоновая кислота.

Смесь трет-бутил-7 В-трет-бутилоксикарбониламино-3-метоксикарбонил-1-карба-3цефем-4-карбоксилата (180 мг; 0,4541 ммоль) и 2 мл трифторуксусной кислоты перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. К раствору добавляют диэтиленовый эфир, выделяется осадок в виде белого твердого вещества. Смесь переносят в.пробирку и помещают в центри1683499 фугу. Верхний слой жидкости декантируют, добавляют свежий диэтиловый эфир, смесь обрабатывают ультразвуком и вновь центрифугируют. Эфир декантируют и твердую

7 Р -амина-3-метоксикарбонил-1-карба-3 . цефем-4-карбоновую кислоту растворяют в смеси 1 мл ацетонитрила, 2,5 мл тетрагидрофурана и силилируют BSTFA(337 мг; 1,31 ммоль; 53 мкл). Твердое образование растворяют и раствор охлаждают до О С. К охлажденному раствору добавляют пиридин (52 мг;

0,6548 ммоль; 41 мкл), после чего добавляют 2-тиофенацетилхлорид (53 мг). Смесь перемешивают на холоду и вливают в смесь

40 мл диэтилового эфира .и 20 мл воды.

Смесь сначала дважды экстрагируют порциями по 40 мл диэтилового эфира, а затем продукт экстрагируют из смеси 15 (изопропанола в хлороформе. Экстракт хлороформа высушивают над сульфатом магния, отфильтровывают и выпаривают под вакуумом с получением продукта в виде твердого вещества. Продукт перетирают три раза со смесью диэтиловый эфир/гексан и сушат с получением 45 мг целевого соединения.

Вычислено, : С 52, 74; Н 4,43; N 7,69;

S 8,80;

С16Н 3606S

Найдено, 7;; С 52,53; Н 4,50; и 7,49;

S 8,62.

Пример 2, 7Р-(2-фенил-2-аминоацетилами но-3-метоксикарбонил-1-карба-3-цефем-4-карбоновая кислота;

Аллил 7 P -(2-фенил-2-аллилоксикарбониламиноацетиламино)-3-метоксикарбонил

-1-карба-3- цефем-4-карбоксилата в виде белого твердого вещества(266мг; 05346ммоль) в 3 мл ацетонитрила, содержащего 1 мл диэтилового эфира, добавляют трифенилфосфин (28 мг; 0,1069 ммоль) и диацетат палладия (5,25 мг; 0,0214 ммоль) и смесь перемешивают в течение 10 — 15 мин при

О C. К охлажденному раствору затем добавляют гидрид три(н-бутил)олова (318,9 мг;

1,099 ммоль) и смесь перемешивают 2030 мин, нагревая раствор до комнатной температуры, К смеси добавляют концентрированную соляную кислоту (1,6 мкл) ci помощью микрошприца, вызывая осаждение продукта в виде белого вещества, Смесь разбавляют 2 мл ацетонитрила и 2 мл диэтилового эфира в переносят в пробирку центрифуги. Суспензию центрифугируют и верхний слой жидкости декантируют. Белое твердое вещество промывают центрифугированием и декантированием три раза с использованием 25 мл смеси (1-1) ацетонитрила и диэтилового эфира и три раза пор50

Пример 3. 7 Р-(2-фенил-2-аминоацетиламино)-3-этоксикарбонил-1-карба-3-цефем-4-карбоновая кислота.

Аллил 7 Я2-фенил-2-аллилоксикарбониламиноацетиламино)-3-этоксикарбонил

-1- карба-цефем-4-карбоксилата (199,2 мг;

0,3894 ммоль) в 5 мл сухого ацетонитрила, содержащего 2 мл дизтилового эфира, добавляют трифенилфосфин (20,4 мг; 0,07788 ммоль) в диацетате палладия (3,82 мг; 0,015576 ммол ь) циями по 25 мл диэтилового эфира. Твердый продукт сушат в вакууме при комнатной температуре с получением 165 мг целевого соединения в виде беловатого твердого ве5 щества (выход 82,65 ).

Полученный продукт очищают следующим образом: в 15-милилитровой пробирке центрифуги 123,5 мг (0,3307 ммоль) продукта смешивают с 3 мл ацетонитрила.

10 К смеси добавляют 1 н.соляную кислоту с помощью пипетки и смесь взбалтывают до тех пор, пока твердое вещество большей частью не перейдет в раствор. Затем смесь центрифугируют и прозрачный верхний

15 слой жидкости отделяют от нежелательного твердого осадка и переносят с промывочной порцией ацетонитрила в другую пробирку центрифуги. Прозрачный раствор обрабатывают 1,5 н. гидроокисью аммония до тех

20 пор, пока рН недоводятдо значения 4-4,5.

Прозрачное масло отделяют от раствора и маточную жидкость отбирают пипеткой в другую пробирку центрифуги. К маслу добавляют 7 мл ацетонитрила и масло

25 отверждается. Твердое вещество дважды промывают порциями по 8 мл ацетонитрила и центрифугируют и промывочные растворы добавляют к маточной жидкости, Из маточной жидкости осаждается вторая

30 часть продукта. Первую часть продукта промывают 8 мл этилового эфира, центрифугируют и эфир декантируют. Твердый продукт затем сушат в вакууме при комнатной температуре с получением 92,3 мг первой час35 ти вещества в виде белого твердого вещества. Чистота вещества на этой стадии составляет 87 . Вторую часть вещества промывают таким же способом, центрифугируют и сушат в вакууме при комнатной

40 температуре с получением 13 мг продукта в виде белого вещества. Чистота продукта составляет 97ф,. Получают также третью часть вещества (5 мг). Первую и третью части вещества обьединяют и промывают как

45 описано с получением трех частей: первая часть 84,4 мг (чистота 93 (,); вторая часть 13 мг (чистота 98 ) и третья часть 6,0 мг (чистота 95®.

1683499

45

55 и смесь перемешивают в течение 20—

25 мин. Затем реакционную смесь охлаждают до 0 С и добавляют с помощью шприца к реакционной смеси гидрида три(н-бутил)олова 233 мг; 0,8005 ммоль). Реакционной смеси позволяют нагреваться до комнатной температуры и перемешивают в течение 20 мин. С помощью шприца при перемешивании к реакционной смеси добавляют концентрированную соляную кислоту (12 н. 0,066? мл), Из желтого мутного раствора осаждается мелкий белый осадок.

Смесь энергично перемешивают в течение нескольких минут и затем переносят в 40миллилитровую пробирку центрифуги, содержащую несколько миллилитров смеси ацетонитрила и диэтилового эфира (1:1).

Твердое вещество центрифугируют и маточную жидкость декантируют. Твердый продукт промывают и верхний слой жидкости декантируют три раза порциями в 25 мл смеси ацетонитрила и диэтилового эфира.

Промытое твердое вещество сушат в вакууме при комнатной температуре с получением

144 мг промытого целевого соединения.

Продукт перекристаллизовывают следующим образом. 144 мг продукта вносят в

40-миллилитровую пробирку центрифуги и добавляют 3,3 мл ацетонитрила. С помощью пипетки в пробирку центрифуги добавляют один эквивалент 1 н.соляной кислоты и пробирку взбалтывают до тех flop, пока большая часть твердого вещества не переходит в раствор. Нерастворенное коричневатое твердое вещество центрифугируют и верхний слой жидкости переносят в другую пробирку емкость 15 мл. В эту пробирку центрифуги добавляют по каплям при взабалтывании хлористый аммоний до тех пор, пока рН раствора не достигнет величины 4—

4,5. Из раствора кристаллизуется белый продукт, смесь центрифугируют и маточный раствор декантируют, Твердое вещество три раза промывают порциями по 7 мл эцетонитрила и один раз 7 мл диэтилового эфира и после каждой промывки центрифугируют, причем промывочную жидкость добавляют к маточному раствору, Промытое вещество (первую часть) сушат в вакууме при комнатной температуре при комнатной температуре с получением 119,8 мг целевого соединения, После добавления промывочных жидкостей к маточному раствору осаждается вторая часть продукта. Вторую часть продукта промывают и центрифугируют по описанной методике, используемой для первой части продукта, с получением

16,6 мг целевого соединения, Общий выход составляет 136,4 мг. Чистота продукта первой и второй частей составляет 97 .

Пример 4. 7 )3-(2-(2-а мин отиа зол-4-ил)2-метоксииминоацетамидо-3-ацетил-1-кар5 ба(детиа)- 3-цефем-4. карбоновая кислота.

К раствору 60 мг (0,1647 ммоль) аллил

7 В -(трет-бутилоксикарбониламино)3-ацетил-1-ка рба(детиа)-3-цефем-4-карбоксилата в 5 мл этилового спирта добавляют 32 мг

10 (0,1679 ммоль) моногидрата пара-толуолсульфокислоты и смесь выпаривают при

45 С на роторном испарителе. Когда тонкослойная хроматография показывает только одно новое пятно (10;ь-ный метиловый

15 спирт — этилацетат), то остаток дважды обрабатывают 6 мл толуола и выпаривают после каждой обработки. Продукт, аллил-?Р-амино3-ацетил-1-карба-(детиа)-3-цефем-4карбоксилат толилсульфонилатной соли, 20 растирают с 3 мл диэтилового эфира и сушат под вакуумом. Получают 71,5 мг продукта.

Раствор 78,2 мг (0,274 ммоль) 2-(2-эллилоксикарбониламинотиазол-4-ил)-2-метоксииминоуксусной кислоты в 2 мл хлористого

25 метилена охлаждают до 0 С и добавляют

48,1 мг (0,274 ммоль) 2-хлор-4,6-диметокси-1,3,5триазина и й-метилморфолина (0,274 ммоль).

Смесь перемешивают в течение 1 ч и дополнительный эквивалент N-метилморфолина

30 (0,274 ммоль) добавляют к смеси, после чего добавляют раствор аллил-7-амино-3-эцетил-1-карба(детиа)-3-цефем-4-карбоксилат толилсульфонилатной соли (полученной как описано) в 1 мл хлористого метилена. Смесь перемешивают в течение 20 ч, нагревая до комнатной температуры. Реакционную смесь вливают в смесь 75 мл этилэцетэта и

40 мл 1 н. соляной кислоты, органический слой отделяют, промывают последовательно 40мл 1 н. соляной кислоты, дважды порциями по 35 мл воды, дважды порциями по

36 мл насыщенного водного раствора бикарбонэта натрия, сушат над сульфатом магния, фильтруют и выпаривают до масл ообраз ного твердого остатка. Остаток (150 MI ) хроматографируют на 10 г силикагеля с использованием смеси 60;40 (по объему) этилацетат:гексан, и фракции, содержащие продукт (тонкослойная хроматография), объединяют и выпаривают досуха. Получают

70 мг продукта N-ацилирования, эллил-7j3

-2-(2-аллилоксикарбониламинотиэзол-4-ил)

-2-метоксииминоацетамидо-3-ацетил- 1карба(детиа)-3-цефем-4-карбоксилат.

К раствору 5 I мг (О;096 ммоль) указанного диблокированного 3-ацетил-1-карба-3-цефема в 1 мл . хлористого метилена и 1 мл диэтилового эфира добавляют 9,95 мг (0,38

1683499

Продукт, 200 мг (0,410 ммоль), растворяют в 3 мл диметилформамида и 300 мг (1,23 ммоль) пивалоилоксиметилиодида и 1,30 мг (0,144 ммоль) N-метилморфолина .добавляют к раствору, Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи и затем вливают в смесь 50 мл этилацетата и 30 мл 1 н. соляной кислоты.

55 ммоль) трифенилфосфина и 1,18 мг (0,005 ммоль) диацетата палладия и смесь перемешивают в течение 15-20 мин. Смесь охлаждают до 0 С с помощью шприца добавляют гидрид три (н-бутил)олова 5 (0,1968 ммоль). Смеси позволяют нагреться до комнатной температуры и перемешивают в течение 45 мин, С помощью шприца добавляют концентрированную соляную кислоту (16,4 мкл) и образуется тон- 10 кий осадок. К подкисленной смеси добавляют диэтиловый эфир (8 мл), твердое вещество переносят в пробирку центрифуги, .емкостью 15 мл и центрифугируют. Верхний слой жидкости декантируют и добавляют 8 15 мл свежего диэтилового эфира и твердое вещество снова центрифугируют. Процесс повторяют три раза и твердое вещество сушат под вакуумом с получением 36 мг целевого соединения, с чистотой более 20

95 .

Пример 5. Пивалоилоксиметил-7

Р (О-фенилглициламино)-3-этоксикарбонил-1-ка рба(1-детиа)-3-цефем-4-карбоксилат гидрохлоридная соль. 25

К раствору 250 мг(0,474 ммоль) аллил 7

ЯО-а -(третбутилоксикарбониламино)фенилацетил амин о)-3-этоксикарбонил-1-ка рба(1-детиа)-3-цефем-4-карбоксилата в 3 мл ацетонитрила и 2 мл диэтилового эфира 30 добавляют 25 мг (0,095 ммоль) трифенилфосфина и 5,8 мг (0,0237 ммоль) диацетата палладия и смесь перемешивают в течение

20 мин. Смесь охлаждают до 0 С и добавляют 0,134 мл (0,49 ммоль) гидрата три(н-бу- 35 тил)олова. Холодную баню удаляют и, перемешивая смесь, позволяют ей нагреться до комнатной температуры. К смеси добавляют один эквивалент 1 н, соляной кислоты (0,498 мл) и продукт, 7P -(D- а-(трет- 40 бутилоксикарбониламино)фенилацетиламино-3-этоксикарбонил-1-карба (1-детиа)Зцефем-4-карбоновая кислота, осаждается в виде белого твердого вещества. Затем смесь разбавляют 10 мл диэтилового эфира 45 и продукт осаждается дополнительно, Продукт отделяют центрифугированием, промывают смесью диэтилового эфира и гексана и сушат. Получают 200 мг продукта (выход 86,67,). 50

Органический слой отделяют, дважды промывают порциями по 25 мл 1 н. соляной кислоты и один раз 30 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия, сушат над сульфатом магния, фильтруют и выпаривают досуха. Получают 240 мг сырого пивалоилоксиметилового сложного эфира. Сырой продукт хроматографируют на 20 г силикагеля, элюируя смесью (40:60 по объему) этилацетата и гексана, Фракции, содержащие продукт, объединяют и выпаривают с получением 155 мг (выход 63 ) пивалоилоксиметилового сложного эфира.

Пивалоилоксиметиловый сложный эфир добавляют к 4 мл смеси (1:1) трифто уксусной кислоты и хлористого метилена и раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч. Раствор выпаривают досуха и остаток растворяют в диэтиловом эфире. Когда продукт осаждается, то эфир декантируют и твердое вещество добавляют к смеси хлороформа и воды. рН смеси доводят до 7 фосфатным буфером и слой хлороформа отделяют и сушат над сульфатом натрия. Высушенный слой хлороформа выпариваютдосуха и остаток растворяют в диэтиловом эфире. Эфирный раствор хлористого водорода добавляют к реакционному раствору до завершения осаждения соли, Соль отделяют и промывают центрифугированием и перекристаллизовывают из хлористого метилена путем разбавления раствора гексаном. Перекристаллизованную соль промывают диэтиловым эфиром и сушат. Получают 70 мг(выход 62 ) целевого соединения в виде беловатого твердого вещества.

Аналогично получают и другие соединения формулы о я,-с-нн

„r C(Q)-A о соотг

Полученные 1-карбацефалоспорины подавляют рост микроорганизмов. Эти вещества представляют собой антибиотики широкого спектра действия, которые особенно эффективны против грамположительных бактерий.

В табл.1 приведены минимальные ингибирующие концентрации (МИК) предлагаемых соединений в отношении инфекционных бактерий. Эти величины ингибирующих концентраций получены в стандартных испытаниях вне организма, которые осуществляют методом разбавления агаром, В табл.2 приведены сравнительные данные для соединений, полученных по предлагаемому и известному способам.

1б83499

Численные значения, приведенные в табл.2, представляют собой МИК в микрограммах на 1 мл, полученные для испытываемых соединений при помощи стандартного испытания In vitro с разбавлением агара. В 5 качестве микроорганизмов используют стандартные испытываемые организмы, которые являются патогенными и которые . обычно используются для оценки противобактериальных свойствP лактамовых анти- 10 биотиков.

В качесте испытываемых используют следующие соединения формулы

Нгм S

ОСН3 ооон

Х А где R1—

l4 -Сy !!

R„NH э NOR>, где Rx — водород, трет-бутил-оксикарбо нильная, аллилоксикарбонильная или три.тильная защитные группы;

R)! — низший алкил, бензил, хлорбензил, карбоксиметил, причем карбоксигруппа может быть защищена в форме бензгидрилового сложного эфира или аминоэтил, в котором аминогруппа может быть защище25 на трет-бутилоксикарбонильной группой;

RI) — фенил или бенэотиен-3-ил;

Rq — водород, трет бутоксикарбонильная или аллилоксикарбонильная зашр тные группы или 4-атил-2,3-диоксипиперазинокарбонил;

30 Й1 — водород или метоксигруппа;

R2 — водород;

А — гидроксил, С1 — С4-алкоксил, аллилоксил, бензилоксил или метил, о тл и ч а ю щи и с я тем, что соединение общей формулы (1), где R2 — трет-бутил или аллил, подвергают деэтерификации.

Соединение

Таблица 1

Данные ИИК> мкг/>лл, соединения

Органнэм

Т ) t L Г Г

Sraphylocuccus aureus XI,I 4 2

Srapbylococcus epidermidis г>

222 4 4

Srrepcococcus pyogenes

0,125 0,015

0, 125

0,015

0,0!5

О,ОО8

0,008

С203 0,125

ЕС14 4

0>03

Esheticbia coli

o,îç

0,5

Klebsiella

gal monel 1 a

Proreus marganii

О,OOE о,оз

0,125

0,5

0 125 0 125

Х26 0,5

Х514 0,5

РР15 .128

0,5 о,оэ

Э2

З2

Entегоbacter aегоgenus

0,25

0 > 125

СЗ2 128

Соединение 1 -7Я-(D-фенилглициланнно)-3-метокснкарбонил-3-цефем-1-карбд-(1-детиа)-4-карбоновая кислота> соединение 2 — - 78-(D-фенилглнцилаиино)-3-бенэилоксикарбонил-3-цефем-1-карба(1-детин)-4-карболовая кислота; соединение 3 — 7j3-(О-феннлглнциланиио)-3-н-бутнлоксикарбонил-3-цефем-1-карба(1-детна)-карбонавая кислота; соединение 4 - Щ-(D-бенэотиен-3-илглнцнлаинно)-3-метоксикарбонил-3-цефем-1-õàðnà-(1-детиа)-4-карбоновая кислота; соединение 5—

711-(D-фенилглнцмламнно)-3-этокснкарбонил-3-цефем-1-карба(1-детиа)-4-карболовая кислота; соединение 6 — 773-(2-(2-амннотназол-4- л)снн-2-метоксн>илиноацетамндо)-3-матокснкарбоннл-3цефем-1-карба(1-детка)-4-карбоновая кислота.

1 -S- -ОСНэ

2 -СН2 -ОСНз

3 $- -ОСН2СНэ

4 -СН2- -ОСН2СНЗ причем соединения 2 и 4 — предлагаемые соединения, соединения 1 и 3 — известные цефалоспориновые соединения. (Как видно иэ табл.2, по МИК для соединения 2 его ингибиторные концентрации, обычно ниже, чем соответствующие ингибиторные концентрации для соответствующего соединения 1 цефалоспорина. Это особенно верно для грамотрицательных организмов в испытании с организмами, начиная от Е.Coli, представленными в табл.2.

Аналогичная картина установлена для соединения 4 по сравнению с соответствующим соединением 3 цефалоспорина.

Предлагаемые 1-карбасоединения обладают более высокой стабильностью в растворе, чем соответствующее цефалоспориновое соединение, в котором атом серы находится в 1-положении.

Формула изобретения

Способ получения 1-карбацефалоспориновых соединений общей формулы 1

06 0

R1-С-b!H -Г-1 н >) о (cooR2

1683499, Таблнца 2

Данные 181К, мкг/мл, соедмненнн!

1нкроорганнэм

2 2

8 4

128 128+

Sraphylococcus nereus

16

Ч41

128+

128+

Х-400

32

128

128+

9!ЗЕ

Sraphylococcus epider-

midis

16

270

О. 15 .06. 015

222

Бссгерсососсив А С 203.015,06

0.15 о ARR

128+, 64

128

128

Огаирн D х 66

9960

2041!

1aemophilus influenzae сЬ

0,15 .06

0,15 .03 .06 .5

Zb. 125

Echerihia coli N 10. 015.03 .25 .03 .5.25

El 14. 125

ТЕМ.03.008. 008.125

Klebsulla pucumoriae

Х 26

128+

128

1 28+

ХАЕ.015.25.03

Х-68

Еисегоbacrer avrogenes С- 32.125.125.25

2817. 125

865

Eurегоbaccer dacae .

32

128+

265А.125.015.03 х 514

Salmonella ryphe

06. 125

1335.125 х 99

Serraiia marcesens.25

SE3,125.06.25

N 9

PR1 5.25.06

PR33,25

С 24

Корректор С. Черни, Редактор И.Дербак

Заказ 3423 Тираж Подписное.

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул,Гагарина, 101

Shigella sonuei

Proteus morganii

Prot.eus in cvnstans

Ю

Proteus rettgeri

Составитель Л.Иоффе

Техред М.Моргентал

) г.015 . 015