Способ получения иммуноглобулинов

 

Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано для изучения иммунной системы КРС, а также в биопромышленности при изготовлении реагентов, используемых в скотоводстве для генетической паспортизации и контроля воспроизводства племенных животных. Цель изобретения - повышение титра и увеличение выхода иммуноглобулинов. Животных КРС иммунизируют смесью эритроцитарных антигенов, связанных с препаратом, состоя щих из клеточных фрагментов пекарских дрожжей. Sacharomyces cevevlslae). Данный способ позволяет повысить титр антител в сыворотках крови КРС, снизить себестоимость выпуска реагентов в 1,5-2 раза. 3 табл. Ё

COIO3 СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (н)з А 61 К 39/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4680988/15 (22) 18.04,89 (46) 15.01.92. Бюл. N. 2 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт животноводства (SU), Научно +исследовательский институт животноводства, r. Нитра и Национальное предприятие по разработке и производству ветпрепаратов

"Биовета", г, Нитра (CS) (72) Н,Г.Букаров, Душан Краварик, Петер Ковач, Йозеф Булла, Петер Графенау, А.В.Овчинников (CS) и П.Ф,Сороковой (SU) (53) 619:615,37 (088.8) (56) Петров P.В. и др. Иммуногенетика и искусственные антигены. М: Медицина, 1983, с, 255.

Zefrancler P., Myramul — peptldes. Pure

and appl, Chem, 1987, Ч,3, р.449-454.

Изобретение относится к иммунобиологии и может быть использовано для изучения иммунной системы крупного рогатого скота, а также в биопромышленности при изготовлении реагентов, используемых в скотоводстве для генетической паспортизации и контроля воспроизводства племенных животных.

Цель изобретения — повышение титра и ,величение выхода Рммуноглобулинов.

Поставленная цель достигается тем, что аллоиммунизацию крупного рогатого скота проводят смесью эритроцитарных антигенов, связанных с корпускулярным препаратом, полученным иэ пекарских дрожжей—

Нитра 1.

Для приготовления препарата Нитра-1 один килограмм пекарских дрожжей (Sacharomyces cevevlslae) (200 г сухого ве„„ Ы „„1704787 А1 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ (57) Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано для изучения иммунной системы КРС, а также в биопромышленности при изготовлении реагентов, используемых в скотоводстве для генетической паспортизации и контроля воспроизводства племенных животных. Цель изобретения — повышение титра и увеличение выхода иммуноглобулинов. Животных

KPC иммуниэируют смесью эритроцитарных антигенов, связанных с препаратом, состоящих из клеточных фрагментов пекарских дрожжей, Sacharomyces

cevevlslae). Данный способ позволяет повысить титр антител в сыворотках крови КРС, снизить себестоимость выпуска реагентов в

1,5-2 раза. 3 табл. ществв) размешивают в 3 л дистиллированной воды. С помощью раствора гидроокиси натрия доводят рН суспензии до 6,2. Полученную смесь нагревают в ферментере до

73 С и в нем же быстро охлаждают до 10 С.

После этого температуру суспензии доводят до 53 С и при этой температуре ее выдержи- 4 вают в течение 24 ч для протекания аутоли- Q0 эа. Полученную смесь центрифугируют при

2000 об/мин в течение 20 — 25 мин, Поверхностную жидкость центрифугата (супернатана) удаляют, а к осадку (седименту) добавляют 820 мл 6 -ной гидроокиси натрия и после центрифугирования в течение

20 мин при 3000 об/мин добавляют 750 мл

10 фосфорной кислоты и еще раэ центрифугируют также 20 мин при 3000 об/мин.

Центрифугат промывают дистиллированной водой до достижения рН 6,5. В результате

1704787

1О

25

35

Таблица1

«р< 0,01 получают корпускулярный препарат, состоящий из клеточных фрагментов дрожжей (препарат Нитра-1), Препарат используют в качестве иммуностимулятора.

Для аллоиммунизации крупного рогатого скота препарат Нитра-1 с помощью физиологического раствора доводят до концентрации 2,5 К 10 мл крови, взятой у животного-донора, добавляют 5 мл 2,57ьного препарата Нитра-1, встряхивают и выдерживают в течение 30 мин при комнатной температуре. После этого смесь инъецируют животным — реципиентам три раза с недельным интервзлом внутримышечно.

Для приготовления иммуноглобулиновой сыворотки у реципиентов отбирают в нужном количестве кровь, из нее выделяют сыворотку, определяют титр сыворотки.

Полученная сыворотка содержит преимущественна иммуноглобулины типа М, которая используется для получения из нее реагентов.

Пример. Опыт проводят на откормочных быках, а также на монозиготных двойнях крупного рогатого скота, полученных после деления эмбриона и последующей пересадки половинок в Биоцентре НИИЖ г.

Н итра.

Иммунный ответ на инъекцию смеси, связанный с препаратом зритроцитарных антигенов (10 мл крови + 5 мл 2,5 -ной корпускулярной суспензии клеточных фрагментов дрожжей), исследуют на 10 быках черно-пестрой и красно-пестрой пород весом 450 кг. Смесь инъецируют внутримышечно три раза в течение трех недель.

Контрольных быков (10 гол.) иммунизируют

10мл крови без добавки препарата. Остальные условия одинаковы.

Анализ сывороток на содержание иммуноглобулинов проводят через 0,3 и 4 недели в процессе иммунизации, а также спустя 2 недели после прекращения иммунизации (табл.1-3). Осмотр участков тела, в которых делается внутримышечные инъекции, не выявляют. какие-либо побочные явления. От животных получают сыворотки в количестве

0,8 л от каждого. Абсорбционными и гемолитическими тестами из них выделяют 12 моноспецифических реагентов, Влияние иммуностимулятора Нитра-I на уровень иммуноглобулинов в сыворотке крови быков представлено в табл.1

Титры гемолитических поликлональных антител у контрольных быков даны в табл,2

Титры гемолитических поликлональных антител у быков при иммунизации с использованием адъюванта даны в табл.3.

Затем укаэанный иммуностимулятор испытывают на двойнях — двух быках чернопестрого скота, полученных путем деления эмбриона и последующей пересадки двум реципиентвм. Иммуногенетический анализ подтвердил идентичность происхождения данных монозиготных близнецов й» 1 и йя 2.

Моноэиготы близнецы представляют ценность, так как уровень иммунного ответа, как количественный признак имеет низкую наследуемость (порядка 0,1-0,2). а поэтому одна пара монозигот может заменить примерно 20-25 голов обычных животных.

Быков-близнецов инъецируют первому только этироциты, а второму эритроциты в смеси с адъювантом (10 мл + 5 мл 5 (-ного адъюванта). В результате после второй иммунизации (спустя 7 дней) близнец, получивший инъекцию с иммуностимулятором вырабатывает антитела в титре 1:32, а у контрольного быка отмечают начальную слабую реакцию толька в неразведенной сыворотке.

Таким образом, указанный препарат

Нитра-1 повышает уровень иммунного ответа и может быть использован при промышленном производстве реагентов, Данный способ позволяет путем повышения титра антител в сыворотках крови крупного рогатого скота снизить себестоимость выпуска реагентов 1,5-2 раза, повысить продуктивности животных, Формула изобретения

Способ получения иммуноглобулинов для определения групп крови крупного рогатого, скота. включающий иммунизацию животных иммуностимулятором и получение аллоиммунныхсывороток,отличающийся тем,что, с целью повышения титра и увеличения выхода иммуноглобулинов, иммунизацию животных производят смесью эритроцитарных антигенов, сенсибилизированных с корпускулярным препаратом пекарских дрожжей Sacharomyces

cevevlslae.

1704787

Таблица2

Твблицв3

Составитель Е,Дмитриченко

Редактор М.Недолуженко Техред M.Моргентал Корректор M.Äåì÷èê

Заказ 143 Тираж .Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открь:тиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101