Способ контроля аллергенности живых гриппозных вакцин

 

Изобретение относится к медицинской промышленности, биотехнологии, оакцинно-сывороточному проИхЗводству и может быть использовано при производстве вакцинных препаратов на основе куриных эмбрионов . Целью изобретения является повышение точности и ускорение способа. Для этого испытуемые вакцины в виде аэрозоля вводят собакам, предварительно сенсибилизированным овальбумйном. При определенной пороговой концентрации овальбумина в препарате живой гриппозной вакцины (ЖГВ) у собак не развивается приступа бронхоспазма. При содержании овальбумина в ЖГВ выше пороговой вели-, чины у собак развивается бронхоспазм, что выражается в виде реакции затрудненного выхода. Выбор экспериментального животного обусловлен тем, что собаки не болеют гриппом. Изобретение может быть использовано для контроля различных вакцин с аэрозольным способом введения, в технологии производства которых используют куриные эмбрионы. 4 табл.., ....;; С «ч О СО векЗ

рф Афф

СО!ОЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (и)з А 61 К 39/145

ГОСУДАРСТВЕИСЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

К АВТОРСКОМУ .СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 4711040/13 (22) 26.06.89 (46) 07;01.92. Бюл. М 1, (71) 1-й Ленйнградский медицинский инс гитут им. акад. И.П.Павлова и Ленинградский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток (72) В.И.Трофимов, А.И.Крашенюк. Л.Н.Данилов, В;С.Сергеев, В.П.Бондаренко, 3.Г.Лукьянова, БЛО.Трекало и М.Л.Филип: пова (53) 576.8.097.2(088.8) (56) Перадзе Т.В. и др. Противогриппозные профилактические препараты. - M,: Медицина, 1986, с. 186.

Авторское свидетельство СССР

" -" M 1334080, кл. G 01 N 33/48, 1987, ОачЬ R. Pepys D. Egg. allergy, Influenza

vaccine and IrnrnunoglobuIIne antibodys. — J.Allergy, 1976, v. 57, t4 4, р. 373-383. (54) СПОСОБ КОНТРОЛЯ АЛЛЕРГЕННО СТИ ЖИВЫХ ГРИППОЗНЫХ ВАКЦИН г

Изобретение относится к медицинской промышленности„биотехнологии, вакцин. но-сывороточноллу производству и может быть использовано при производстве вак: .: цинных препаратов на основе куриных эмбрионов.

Известен способ оценки аллергизирую-щих свойств инактивиронанных гриппозных

° вакцин путем сснсибилизации морских сви«ок ональбумином с последующим введением им инактивиронанной гриппозной вакцины (ИГВ). При содержании в образцах

Ы 1703121 А1

2 (57) Изобретение относится к медицинской промышленности, биотехнологии, вакцинно-сывороточному производству и может быть использовано при производстве вакцинных препаратов на основе куриных эмб.рионов. Целью изобретения является повышение точности и ускорение способа, Для этого испытуеллые вакцины в виде аэрозоля вводят собакам, предварительно сен: сибилизированным овальбумином. При определенной пороговой концентрации ональбумика в препарате живой гриппозной вакцины(ЖГВ) у собак не развивается приступа бронхоспазма. При содержании овальбумина в ЖГВ выше пороговой величины у собак развивается бронхоспазм, что выражается в ниде реакции "затрудненного выхода". Выбор экспериментального >кивотного обусловлен тем, что собаки не болеют гриппом, Изобретение может быть исполь. зовано для контроля различных вакцин с аэрозольным способом введения, в технологии производства которых используют куриные эмбрионы. 4 табл.

ИГВ овальбумина в концентрации выше 5 мкг/мл у морских свинок возникает выраженная анафилактическая реакция при парентеральном введении препарата.

Известен также способ определения аллергенных свойств сорбированных гриппозных вакцин, содержащих овальбумин. Суть изобретения состоит в .определении гомоцитотрог1йых реагийоных антител, которые выявляютея у экспериментальных жинотных на 7-8 сут после введен я испытуемых препаратов.

1703121

ПослеДнии способ является базовым. ПневмотахОГрафу ПРДкл, у подключают самописец, - едостатком известных способов явля- на котором регистрирую и уют показатели функется то, что они не могут быть применены ции дыхания, Показа я, оказателем нарушения

Для Оценки аллерг «зирующ™х свойств жи бронхиальной прохОДимости AB р ходимости является сни- .- гриппозньй вакцин, поскольку.все ИГВ 5 жение объемной c oрости потока выдоха за. вводя «= . парентерально {подкожно или 1 с более, чем 20-25" р по сравнению с исвнутрикожно), Все ы.=,вестные методы про- ходной Для исключен лючения неспецифических верки аллергенностя вакцин явля отсл через- возд йствий на бро ронхиальную проходивычайно трудоемкими и длительными. мость и индивидуа

С, видуализацию этого показатеЯ уществуют подходы по Оценке аллер- 10 ляусобакзаписываю ис р : ют исходные показатели гизации L I В по полалснию антител к оваль- проходимости бронхов. Затем проводят инумину у привитьгт экспериментальных галяцию 5 мл физиологическо о ического раствора и животных или flQ появлению-в сыворотках регистрируют в течение 15 мин, показатели . таких животчых имиуноглобулинов Š— igE проходимости брон . 3, б

«Ъ ронхов. то время выбрано однако прил1еняемие при этом методы яв- 15 эксперименталь но с учетом воздухообмена ля|отся сложными v. Длительными, что за- и полнОГО использова и льзования ингалируемого . трудняет определение качества ИГВ по вещества. После этого собакам проводят аллергенности. ингаляци о овальбумином различных конЦель изобретения — повышение точно- центраций, приготовленных на физиологисти и ускорение способа. - . 20 ческом растворе. Используют следующйе

Для этого испытуемые вакцины вводят: концентрации овальбумина в 5 мл физиолособакам, предварительно сенсибилизиро- гического раствора: 100, 200, 500, 1000 и ванным овальбумииом, в виде аэрозоля. 2000 мкг {табл. 1).

При определенной пороговой концентра- .. Как следует из табл. 1 собаки обладают ции-Овальбумина в ггрепарате живых грип- 25 индивидуальнойспособностью реагировать позных вакцин (ЖГВ) у собак не на овальбумин, что учитывают при испытаразвивается приступа бронхоспазма. При нииаллергизирующихсвойствЖГВ.,Вместе содержании овальбумийа в ЖГВ выше по- с тем установлено, что минимально провороговой величины у собак развивается цирующая доза составляет 100 мкг в 5 мл, т. спазм бронхов, что вьражаетсяв виде реак- 30 е, концентрация овальбумина 20 мкг/мл, ци 1« "затруд.енного выдоха". Выбор экспе- Предварительные опыты с использованием риментального животного Обусловлен тем, меньших доз(25-50 мкг в 5 мл) не выявляют что собаки не болеют гриппом.. реакции у всех собак. Кроме того, как следур и м е р 1. Оценка чувствительности ет из табл. 1, максимальное удлинение прособак к овальбумину..-:- 35 должительности выдоха на ингаляцию

Использу от бесгюродн«ых собак — сам- плацебо (физиологический раствор) не прецов в возрасте 3-4 лет, весом 20-25 кг. Сен- - вышает 25 j от исходного уровня. сибилиза,HIQ овальбумином (препаратом При проведении опытов по испытани о

ПО "Олейне" пятикратной кристаллиза- различных серий ЖГВ получены результации) проводят по следующей схеме: началь- 40 ты, представленные в табл. 2. ная доза 4000 мкг на каждую собаку подкожно вхолку, каждыедвенедели дозу . Пример 2. Условия эксперимента увеличивалина400мкгдодостижения2000 Описаны ранее в примере 1, Собаке М 2 мкг, т, е. 5 иньекций с интервалом в 2 неде- производят ингаляцию ЖГВ производства ., ли. Затем вводят трюкды подкожно ежене- 45 Одесского предприятия и ЛенНИИВС со1 дельно по 2000 мкг, после чего собак держащих различные концентрации овальиспользуютвэксперименте.Для поддержа- бумина в 1 мл, и изучают реакцию ния уровня сенсибип«:зации за две недели бронхиального дерева на ингалируемые до проведения эксперимента собак сенси- ЖГВ (табл. 2). билизируют, вводят 1 раз в неделю по 400 50 мкг овальбумина, Из табл. 2 следует. что зкспериментальЗксперимейт проводят Следующим Об- ный препарат ОЧИЩЕнной ЖГВ ЛОННИИВС не вызывает бранхоспастичаской реакции раэом, Собчак наркотизируют введением внут- сенсибилизировэннай собаки (/выд.<25%). ривеннотиопентала иатрия 1;ь-ного 50 — 100 55 В то же время вэкцина Одесского IIðåäïðèмл На собаку. По дос-.*.жении нгркоза собак ятия вызывая у эксперемантального живоинтубируют, с помогцью у образной трубки тного четко выраженное снижение подключают к ультразвуиваму ингалятору показателей бронхиальной проходимости

U J-50 (ГДР) и пневчотахографу с трубой фЧв лд > 67,7) к 15 мин) и клинически ы"А" Флейша (Швейцас::я) объемом 1 л/с; к раженный бронхоспазм.

17О3121 .;-.„4

: *=тР ф

" .е

° " М

- . . д.,:

"„Ц i ,У $

В

Таблица 1

Ход эксперимента

П ока за тели и роходимости бронхов (Чвдоха/Чвыдаха), л/с

Собака-, %

Доза овальбумина, мкг

Изменения показателей (л к исходным),%. - = Р

0,33/0,17.

0.33/0,16

Фон

Контроль

Опыт

5мин10 мин

15 мин

0,6

100мкг

-12/О

-6/+12

+9/+23. 0,29/0,17

0,31/0,19

0,36/0,21

500 мкг

0,3/0,17

0,34/0,2

0,22/0, 13

-9/О

+2/-18

-33/-23,5

5 мин—

10 мин

15 мин

1000 мг

0,14/0,06

0,1/0,03.

0,14,/0.,08

0,16/0,07

0,28/0,22

0,26/0,2

-52/-65

-70/-82 . -58/-53

-52/-59

5 мин

10 мин

15 мий

20 мин

Фан

-Контроль

-7/-9

100 мг

Ойыт

5 мин

10 мин

15 мин

0,21/0,16

0.21/0,16

0,35/0,26

-25/-27

-25/-27

+25/+18

500 мкг

0,24/0.22

0,31/0.3

0,24/0,156

-14/О

+11/+36

-14/-29

5 мин

10 мин

15 мин

1000 мкг

5 мин

10 мин

15 мин

-25/-32

-36/-45

-38/-45

0,21/0,15

0,18/0,12

0,17/0,12

Г} р и м е р 3. Изменение показателей бранхиальной проходимости после ингаляции ЖГВ приведены в табл. 3.

Условия эксперимента описаны ранее в примере 1.

Как следует из табл. 3, у сенсибилизированнай собаки М2 экспериментальный пре, парат очищенной ЖГВ ЛенНИИВС не вызывает бронхоспастической реакции (Чвыд.<25Я. В то. время как у собаки М 3 .вакцина -Одесского предприятие вызывала резкое снижение показателей проходимости бронхов (Ь давыд.=69% на 10 мин}, что сопровождается клиническими признаками бронхаспазма (удлиненный .выдох}. Сухие хрипы при аускультации.

° Пример 4. Условия эксперимента описаны ранее в примере 1, Из табл, 4 следует, чта эксперименталь: ная вакцина ЖГВ ЛенНИИВС не вызывает значительного изменения показателей про. 6 ходимасти бронхов (Чвыд. 25%) у сенсибилизированной собаки N. 5. После ингаляции

ЖГВ Одесского предприятия отмечаются значительные изменения показателей про5 ходимости бронхов у сенсибилизированной собаки М 4 (Л Y=39%), которая нерезко

: реагировала и на ингаляцию чистого овальбумина (табл, 1).

Формула изобретения

10 Способ кон;роля аллергеннасти живых гриппозных вакцин, включающий введение вакцины в организм животного, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью повышения точности и ускорения способа, из животных

15 используют собак, предварительно сенсибилизираванных овальбумином, введение осуществляют ингаляцианным способом, об аллергеннасти судят по снижению бронхиальнай проходимости более, чем íà 25% по

20 отношению к исходному значению этого показателя.

1703121

0,5/0,29

0,47/0,23

-6/-20 ия

4ИН

1ИН

0,57/0,27

0,42/0,18

0,65/0,47

+14/-.7

-16/-38

+30/+74

500 мкг

ИН

ИН

ИН

+10/О

-16/-17

-16/-34

0,55/0,29

0,42/0,24

0,42.0,19

1000 мкг

+4/-3

-16/-20

-38о

-19/-54

-25/-65

-25/-69

-19/-46

500 мкг

-25/-54

-25/-65

-25/-65

1000 мкг

-25/-54

-25/-54

-25/-69

-6/-36

100 мкг

-19/-42

+19/-8

+50/+16

0,1 /0,07

0,19/0,11

0,24/0,14

500 мкг

О/-29

-6/-33

-19/-50

1000 мкг

-19/-33

-19/-45

-501-81

-45/-63

100 мкг

-35/-44

-40/-60

-60/-68

500 мкг

-60/-64

-50/-61

0 08/С,О58

0,1/0.062

1000 мкг

-35!-53

-50!-64

-60/-73

ИН

ИН

ИН

Н

Оль

ИН ин

Ш

ИН

ИН

Н аль ят

4Н

ИН

VH аль т.

И 3H

0,391/0,18

100 мкг

0,52/0,28

0,4 0,23

0,391/0,18

0,16/0,13

0,13/0,06

0,12!0,045

0,12/0,04

0,13/0,07

0,12/0,06

0,12/0,045

0,12!0,045

0,12/0,06

0 12/0,06

0,12/0,04

0,16!0,12

0,15/0,077

0,16/0,085

0,15/0,08

0,13/0,06

0,13/0,08 "

0,13/0.066

0,0810,023

0,2/0,16

О;11/0,06

0,13/0,09

0,12/0,064

0,08/0,052

0,13/0,075

0,1/0.058

0,08/0,44

Продолжение табл. 1

1703121

10.

Продолжение табл. 1

Таблйца 2

1703121

Таблица 3

Таблица 4

Состаэитель И. Тарееаа

Техред M.Уоргентал Корректор Л. Бескид

Редактор Г. Гербер

Произаодственно-издательский комбинат "Патент", r-. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 12 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретенилч и открытилм при ГКНТ СССР

113035, Уоскаэ, Ж-35, Раушскал наб„4/5