Способ микроклонального размножения грецкого ореха
Изобретение относится к биотехнологии , в частности к способам микроклснзльиого размножения растений в культуре ткани , и может быть использовано в питомниководст е и при селекции ценных древесных растений. Целью изобретения является повышение ь;,;хода рпстэний-регенерантов, Микроклональн.сзе размножение осущестпляют путем использования о качестве материнского растения сеянцев или привитых саженцев, которые предварительно культипг.оуют в темноте до образования травянистых этиолированных побегов. С этих побегов вычленяют эксплантаты, которые затем высаживают на питательную среду Мурасиге-Скугя и культивируют до получения рзстений-реген.ерчнтов. Способ позволяет увеличить выход посадочного материала в 3-4 раза за счет уменьшения количества потемневших эксплантатов. Способ может быть рекомендован для микроклонального размножения других дрепосных культур. 3 табл. t г
(: )» А01 Н 1/ÎII
Г
1
« Х
К АБ13гL 1«0, < (У СВ1)ДЕ(ЕД(,С1РУ (21) 4707 .)5Э/13 (22) ig.б().89 (16) 23.01 92. Ьюл. 1 /. 3
171) Отделение клеточной биологии и инжеii" р«;1 Инсти)ута ботаники им. H,Г. Холодн(.) (72) H.i
exls ап4 seedling з1)оot tip culture of Juglans
nlgro L, — Plant СС11, Tissue and Organ
Culture. 1986, — 6, 13< 2б,189-196, Liu S., Нал В. In vitro prnpagation of
walnut ()ugl-"ns regia 1.) - Acta Agriculturae
UnIveI sitatis Ре,inesis. 1986, -12, N 2, 143148. (54) СПОСОБ г .1И1:РОЕ,)ОНАrlh!-1010 РАЗ1ч1НОЖЕНИ!(1 ГРЕЦ1 .ОГО ОРЕХА (57) Изобретен«е относ((тся к биотехнологи«. в астнОсти к спÎcобам м«кроклональИзобретение относится к б«отехнолои)1, В частности к спасо. .„ 11 м(lк1)оклонального f .I змнй.ке(3«я растений (3 культуре тка(311, и может быть «!сno II<30ва 30 в питОмн«ководстве и пр«селекции (teil!It древесНЬ(, Р,",СТЕН«и, Известен способ r11 к1)ор/)зм!30 ен«ч орехоплодны«1!уTei» I)n;(у Ill 1 О Д I I ° < «О t I 3 I ) < 111 1 х:) i 3 (I, . х К у < I » 1 п <1 р 0 в г< I!3m r3t3n 31i;;!)::(3eсi« ix t3 (ас)uo:1«о1)сх,". I l е)tкогo, ОРO .;схо ",« i iI()1(к»i i(3< I".:. «11(.1 i)Gз 1«а
Способ гло:кет быть ðå«o.ленqoaaII для rëèêрокло пал ь но ГО ра 311HO)I»c H«53 дрч(их древесныхх культур. 3 табл. побегов и растений. Известно, ч о потемнение связа. о с !)акоплением фоно)ьных спединений, I(OTopt!e, в зависимости от концентрации, уг(Зета!От развитие зксплантатов в культуре, На«более бл! ° =)(«M к про/3л,)гаемому ревени!О является способ размножен!1я Ill vitro Ооех<3 Г 1. . t ОГО, f! „ I! !.OTn;)nr» до()ол 1311 тельн. I(,побеги /»()ф(1)е.;)cI3! I«p», ютс . 3 верх) йс<)1« t. ë Гlобс Го в, К»<л ьт(1131;1) еht t< I! 33 среде f;Iyf )с(11(1-Скуга «/ «cpe 0 Вуда с добав;<."-м« г1УК (0,1- 0,5/ )м(/л; 1 А () .) - 2,11 r. ã, Д-nal!To!0 <одой к«слпты 1 1.. < )Л(!(.еой кисло I ь(1 I
15 п0 55! Я fG 7-fi ; г., ICTi;>- н"< 1 :-.", и стр "
;; <) г>: т:<
Г)г)т;; г,: ..и .;,.;>- „:),, . «Пт))О> .С)1,с>а){тс>« Око..". ;-.: -.;< Ки:>«--,а. <.">{Ор>э{л)ОЦи){ >;i. 1. ">,У .:. -« Ii )тI> -!, < <1L)5!II;JI>а{{){ь!!< Д;-Е.- «,«. 1 /го;:, ); jig! >I/) Г!ЕДО.) < ОМ ИЗГ>ЭС >1)ОГО СПОСО J3, у)лсь{ь!а.. щlë кс "еч ., и ь) fort расс.lli.é, ЯС{ЛЯЕгСЛ L .Cl)O; .Э<О= -!HИЬ <10>ЕГОП., СОДОРХСа{17{лх r; 4< f..in !T>, 1<>е фс{){с.,!ь.{ых соед неН и,ю Ч Л i < <, >!" ю " f Å! Г )Л г >;; ° > Е а:i H r- > X. Цель нээб : нил — г)ос>!!ie:-.Ие выхода paCTC { .!;! 1 йс Г<г, < e
П р и {л e p 1. 7-летние сеянцы r количсст ае 10 в;ту . а =" реле )леся.<е r.!!ca){.ивают в cocyp,,I с::I..-:-й и аь ра).;.,=э.ю в теплице в темнoте. I,Онтролегл cr)y. .!CT 50 растений, содсрхкас).:.и:-.ся; теплице. «О при освеще;;! и. Когда новые этио)ир ванные травянистые пэеги достигают дл.:ны 10-15 см, а СОдсг);КаНИЕ фЕНОЛЬНЫХ ССЕдИНЕНИй В НИХ по сраенени О . Эел"I«;;«1 с){ижгется с 8,0 до 2,0 мг íà 100 r сухо О сеса. верхушечные и боковь<е почки в количестве 50 шт, из этиолироганнь" побегов и -00 Ii". иэ зелеНЫХ Ств<)ИЛИЗу>ОТ „;-<г ТНЬ< .1 СПОСОбом, ВЫ сэжив От на агар.:зоеа {ную питательную среду !7урас!)ге-Скуга (1С). в которой концентраци о.лакросолей уменьшают в 4 раза (! этап культив!.рования, табл. 1) и выдержисают в темноте. Через неделю эксплантаты переносят на питательную среду МС, содержащу{о половинную концентрацию макросолай (I! этап:.:.:;.1.-;.o !ðoeç:.-ия) и наряду с opra;{I ческ!" "., ". Рка{ли фито< 0 io> )ОН ы: ЮЛ К,".,.) i — гэ.г>2) мг< r< и Ь Р! { 1 )лг/и (табл. 1). 2.. плэ .таты псмеща)от в условия низкой освсс генност!) (1;0-200 лк). Через три недели к.льтиьирования используют среду с полной концентрацией макросолей(!!! этап, табл. 1). а осве;цение эксплантатов увеличивают до 500 лк. В про <ессе культивирования выбраковывают почерневшие зксплантаты, Чсрез )-)есяц в варианте с этиолированным почками осталось 90 не потемневших эксплантатое, тогда K3K fl варианте с зелеными — 88,2,ь (табл. 2). Черезтри месяца в варианте с зт))олироеа<н:)ыми почками было 20,0 (, начавшими рост побегов. а в вар ганте с зелеными — 5,8, т. е. в 3,4 раза меньше. . Пример 2. 3-л<етн{)е привитые саженцы в количестве 10 ш "(к в апреле высаживают в сосуды с зел;:зй и выращивают в теплице без освещения. Контролем с{)ужат 5 рас геннй, со,;с р >ка{! 7иxcя в теплице при освещении. Когда новые этиолированные побеги достига.с д:;;)ны 10-15 см. а содсржание фc»or)oHvx соединений с них по с а.;ненг){О r зел-,:нь{)л{л с {и кается с 8,7 до г и;< 1 QG г с хог О в, ;! ()е! у<ь)е пОчки в количесгг<с. 5< li!T. иэ этиплировлг));){к и J шт. из з леных по эегов с)ег)и{{!)эу)от излсстн.„{1 спссобо.л и высаХ;<ИС )ОТ Нr) «I dР!Л i>I>С>llllgЮ Питат"..ЛЬ) - <О С! ду MC (I "т- I) культ )г{:)рос; { {>){) в которой ;О){ < )О! !1 !>-" <.,, »О мг-, к!Зоc РЕЗ тРИ ь)ЕС.ЯЦа В ВЛРИаНтЕ С ЭтИЛИРОВаННЫми по I,:.ë{)è было 10.0 Iia«ac!i)L, рост побе Ов. а в варианте с зелеными — 2.5 )<., т. е. в 4 раза меньше. Состав питательных сред, используемых при микроклональном размножении ореха грецкого, представлен в табл. 2 Количество развившихся эксплантатов при кулис)лвиpоваH! почек из этиолироаанных и зеленых побегов сеянцев представлено в табл. 2. Количество развившихся эксплантатов при культивировании почек их этиолированных и зеленых побегов привитых саженцев представлено в табл. 3, Способ позволяет увеличить выход размножаемого рас гител ьного глатериала в 3 — 4 раза и более f)o сравнению с L13!:ecTHIM. Кроме того. при этом уменьшаются затраты руда и средств, поскольку уменьшается количество потемневших эксплантатов, на культивирование которых затрачивалась питательная среда и рабочее время. Предлагаемый способ может быть рекомендован и г.)я микроклонального размножения других древесных растений с высоким содержанием фенольных соединений в тканях. Формула изобретения Способ MHKðoêëoíàëüíoãо размножения грецкого Ореха, включающ{лй вычленение эксплантата от материнского растения, высадку е) О на пита гольную среду Мурасиге — Скуга и культ )лвирование до получения псбегз, о т л и ч а ю ьц и и с я тем, что, с цепью повышения выхода рас < ений-рсгснерантов, в качес<ве материнскс>го растения испопь6 1 (ОГ4- 11 1аблиuа11 1,оь;по, нть1 ш ) 1650 1"ОО 370 . j0 82 22 18 412,5 92,5 Г,83 6,3 22,3 8,6 0,025 0,025 37,3 27,8 0,8 G, 22 8, О,О 0,0 37 0,83 6,3 22.3 8,6 0,025 0.025 37,3 27.8 100 0.5 0,5 0,01 — 0,02 0.5 О 7000 О, О, 0,01— 7/ О Сахароза Агар рН 57 габлица2 культив11ро нед. 4 "c "":Iel :H I bl . Е>1.11 .10 с КИОз аС з бН",О Я01, Н;0 ГНРР01 роал ем -.11ть1: KJ НзВОз п 31 4HzO 3!. 1Н О Б0,1 5Н;О о80л 6 Г 20 е — хеллат; Naz - . -1ДТА е801,7r/zO МИНЬ, ГОРМО11Ь1 и др. ез..инозит ГЛИ ilH àми 1 НЕГ идп ксин Н С! и11с пал кислота И Л„; t;„ I Tl;.I: лиисть1х по . егере 1с,а с !I.II(ско; 1 пас1еНИ,Г Г1; Р < . Ь11О ЬРj ) It!Ь!Х 11 ТЕМ1 О О. СОСТа1» epe "iz l Ë(Иа Ка. ., i .Ii1 =.i < Пс V, /!ЬТИЕ ПО1. СЕ" З, 11Г/Л ! 1706478 ТаблицаЗ ч .:..тво рззвиии ихся зксплантатов, О/ ": )Oi33HI>bl Из зеленых побегов рования Редактор Н. Химчук корректор M. Муска Заказ 212 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва. iK-35, Р, ушс зя, аб., 4/5 Производственно-издательский ком5инат "Патент", г. Ужюрод, ул.Гагарина, 101 0,0 0.0 0,0 Составитель С.Куваева Техред М.Моргентал 72,6 42,9 
