Среда для разбавления спермы хряков

 

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к искусственному осеменению сельскохозяйственных животных, преимущественно к средам для разбавления спермы хряков. Цель изобретения -- повышение подвижности и оплодотворяющей способности сперматозоидов. Среда содержит, г/л: глюкоза 40,0-50,0; ЭДТА(хелатон- 3) 2,6-3,3: лимоннокислый трехзамещенный пятиводный натрий 3,8-4,5: аммоний сернокислый 1,8-2,4: двууглекислый натрий 0,5-1,0: спермосан-3 ,250--500 тыс.ед.: молочнокислый литий 0,12-0,32. бидистиллированная вода - остальное, при рН среды 7,0-7,3. При использовании среды подвижность сперматозоидов хряков возрастает в 2,5 раза, оплодотворяемость увеличивается на 17%, многоплодиена 29,.4% по сравнению с прототипом. 1 табл.(Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)ю А 61 D 19/02

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4812102/15 (22) 08.02.90 (46) 30,01,92. Бюл. М 4 (71) Институт биохимии АН БССР, Гродненский сельскохозяйственный институт, Колхоз "Дубна" Мостовского района Гродненской области и Колхоз "Путь к коммунизму" Гродненского района Гродненской области (72) В,M.Áîðèñîâ, Ю.M.oñòðîâñêèé, А.С.Наумов, M.Ã.Âåëè÷êî и А.А.Кравнис (53) 636.082.453,5(088.8) (56) Походня Г.С.. Кононов В.П„Нарижный

А.Г. Достижения и перспективы метода искусственного осеменения свиней. М.: Россельхоэиздат, 1985, с. 21-23. (54) СРЕДА ДЛЯ РАЗБАВЛЕНИЯ СПЕРМЫ

ХРЯКОВ

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к искусственному осеменению сельскохозяйственных животных, преимущественно к средам для разбавления спермы хряков.

Известен разбавитель для разбавления спермы хряков, имеющий следующий состав: на 1 л дистиллированной воды глюкозы — 46 г (или сахарозы — 92 г), сульфата натрия безводного — 2,8 г, спермосана-3

250 000 ед.

Однако семя, разбавленное этим разбавителем, следует использовать в течение 2 ч после взятия, так как при более длительном хранении в известном разбавителе происходят морфофункциональные и физико-химические изменения на клеточном, субклеточном и молекулярном уровнях, что приводит к снижению биологической полно Ы, 1?0832? А1 (57) Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к искусственному осеменению сельскохозяйственных животных, преимущественно к средам для разбавления спермы хряков. Цель изобретения — повышение подвижности и оплодотворяющей способности сперматозоидов. Среда содержит, гlл: глюкоза 40,0-50,0; ЭДТА (хелатон3) 2,6 — 3,3; лимоннокислый трехзамещенный пятиводный натрий 3,8 — 4,5; аммоний сернокислый 1,8 — 2,4; двууглекислый натрий

0,5 — 1,0; спермосан-3 250-500 тыс.ед.; молочнокислый литий 0,12-0,32. бидистиллированная вода — остальное, при рН среды

7,0 — 7,3, При использовании среды подвижность сперматозоидов хряков возрастает в

2,5 раза, оплодотворяемость увеличивается на 17"-,ь, многоплодие — на 29,.4% по сравнению с прототипом. 1 табл, ценности спермиев и их оплодотворяющей способности, а также к уменьшению многоплодия в условиях свиноводческих комплексов.

Наиболее близким к предлагаемому является среда для разбавления спермы хряков (ГХЦС), содержащая глюкозу, ЭДТА (хелатон-3) . лимоннокислый трехзамещенный пятиводный натрий, сернокислый аммоний, двууглекислый натрий, спермосан-3 и бидистиллированную воду при следующем соотношении ингредиентов, г на 1 л бидистиллированной воды:

Глюкоза 40

ЭДТА (хелатон-3) 2,6

Натрий лимоннокислый трехзамещенный пятиводный 3,8

Аммоний сернокислый ",8

Натрий двууглекислый 0,5

1708327

40,0-50,0

2.6-3,3

Пример 1. Берут 1 л бидистиллированной воды, нагревают ее до кипения и в горячей воде растворяют 2,6 г ЭДТА (хелатон-3), 3,8 г лимоннокислого трехзамещенного пятиводного натрия, 1,8 г сернокислого аммония. охлаждают раствор до 40 С, после чего добавляют 40,0 г глюкозы. 0,5 г двууглекислого натрия, 250 тыс. ед, спермосана-3 .и 0,12 г молочнокислого лития при рН среды 7,0, Приготовление среды и разбавление спермы проводят в стерильных

5 условиях. Взятую при помощи искусственной вагины. от хряка сперму фильтруют, определяют известным способом активность и концентрацию сперматозоидов для определения степени ее разбавления и разбавляют, постепенно приливая среду к

Спермосан-3, тыс,ед, 250

Бидистиллированная вода Остальное

Однако известная среда ГХЦС для разбавления спермы хряков не обеспечивает повышение оплодотворяющей способности 5 и подвижности сперматозоидов, по которым оценивают их биологическую полноценность.

Целью изобретения является повышение подвижности и оплодотворяющей спо- 10 собности сперматозоидов.

Указанная цель достигается тем, что в среду для разбавления спермы хряков, включающую глюкозу, ЭДТА (хелатон-3), лимоннокислый трехэамещенный пятиводный 15 натрий, сернокислый аммоний, двууглекислый натрий, спермосан-3 и бидистиллированную воду, дополнительно вводят молочнокислый литий при следующем соотношении компонентов, г/n: 20

Глюкоза 40,0 — 50,0

ЭДТА (хелатон-3) 2,6 — 3,3

Лимоннокислый трехзамещенный пятиводный натрий 3,8-4,5

Двууглекислый натрий 0,5 — 1,0 25

Сернокислый аммоний 1,8-2,4

Спермосан-3, тыс.ед. 250 — 500

Молочнокислый литий 0,12 — 0,32

Бидистиллированная вода Остальное

При значении рН среды 7,0-7,3. 30

Предлагаемую среду для разбавления спермы хряков готовят следующим образом.

Берут 1 л бидистиллированной воды и нагревают ее до кипения. В горячей воде 35 растворяют, г; ЭДТА (хелатон-3) 2,6-3,3; лимоннокислый трехзамещенный пятиводный натрий 3,8 — 4,5; сернокислый аммоний 1,82,4; затем раствор охлаждают до 40 С и добавляют: глюкоза 40,0 — 50,0; двуугле- 40 кислый натрий 0,5 — 1,0; спермосан-3 250500 тыс.ед. и молочнокислый литий 0,120,32, при этом рН среды 7,0-7,3.

Приготовленной средой разбавляют концентрированную сперму в соотношении 45

1:1...3 при температуре среды 37 С.

Приготовленная таким образом среда может использоваться в течение 6 сут от момента приготовления и храниться в холодильнике при 4-.6 С. 50

В предлагаемой среде для разбавления спермы хряков на этапе отработки оптимальных ее параметров было установлено, что наилучший эффект от использования. предлагаемой среды регистрировался при 5 добавлении к известной среде 0.12-0,32 г/л молочнокислого лития и при значении рН среды 7,0 — 7,3, при этом соотношение остальных компонентов в среде следующее, г/л:

Глюкоза

ЭДТА (хелатон-3)

Лимоннокислый трехзамещенный пятиводный натрий 3,8-4,5

Сернокислый аммоний 1,8 — 2,4

Двууглекислый натрий 0,5 — 1,0

Спермосан-3, тыс.ед. 250-500

Бидистиллированная вода Остальное

Увеличение количества вносимого в среду молочнокислого лития 0,32 г/л, а также превышение верхних пределов количеств остальных компонентов среды (глюкоэа, ЭДТА (хелатон-3), лимоннокислый трехзамещенный пятиводный натрий, сернокислый аммоний, двууглекислый натрий и спермосан-3) ведут к повышению осмотического давления среды по сравнению со спермой хряка, для которой предназначена среда, что приводит к значительному снижению подвижности сперматозоидов. Уменьшение количества вносимого в среду молочнокислого лития ниже 0,12 г/л, а также снижение нижних пределов количеств остальных компонентов среды. ведут к снижению осмотического давления среды по сравнению со спермой хряка, т.е. среда не будет изотонической, что приводит к снижению биологической полноценности живчиков в семени из-за нарушения структурной целостности акросомы, определяющей в значительной степени оплодотворяющую способность.

Увеличение водородного показателя рН среды свыше 7,3 ведет к потере подвижности сперматозоидов и снижению оплодотворяемости, а снижение этого показателя ниже 7,0, т.е. при сдвиге рН в сторону кислотности, среда вредно действует на сперматозоиды. при этом снижается их переживаемость, подвижность и биологическая полноценность, Экспериментальные испытания предлагаемой среды на сперме хряков, 1708327 сперме небольшими порциями, тщательно перемешивая при температуре среды 37ОС, учитывая, что температура среды в момент разбавления должна равняться температуре самой спермы, Разбавление приготовленной средой спермы производят в отношении (1:1) — (1;3}. Инкубацию семени в среде ведут при комнатной температуре (20 С) в течение 3 сут, После 3-суточной инкубации определяют подвижность спермиев известным способом по 10-бальной системе с помощью микроскопа, Подвижность сперматозоидов составила 7 баллов.

В качестве контроля использовали известную среду ГХЦС (прототип)., которой разбавляли взятую у этого же хряка сперму и аналогичным образом, как в опыте, определяли подвижность сперматозоидов, которая составила 4 балла, что свидетельствует о превосходстве новой среды над известной (прототип) rio количеству подвижных сперматозоидов через 3-е суток инкубации, Пример 2. Берут 1 л бидистиллированной воды, нагревают ее до кипения и в горячей воде растворяют 3,0 r ЭДТА (хелатон-3), 4,2 г лимоннокислого трехэамещенного пятиводного натрия, 2,1 г сернокислого аммония, охлаждают раствор дс 40 С, после чего добавляют 45.,0 г глюкозы, 0,8 г двууглекислого натрия, 350 тыс.ед. спермосана-3 и

0,24 г молочнокислого лития при рН среды

7,15. Приготовленной средой разбавляют взятую от хряка сперму в отношении (1:1)— (1:3), предварительно определив известным способом активность и концентрацию сперматозоидов, Разбавление спермы средой ведут при температуре последней 37 С. После 3-суточной инкубации семени s среде при комнатной температуре (20ОС) определяют подвижность спермиев известным способом по 10-бальной системе с помощью микроскопа, Подвижность сперматозоидов составила 8 баллов. В контрольной среде

ГХЦС (прототип) подвижность сперматозоидов спермы этого же хряка через 3-е суток инкубации составила 3 балла, Пример 3, Берут 1 л бидистиллированной воды, нагревают ее до кипения и в горячей воде растворяют 3,3 г ЭДТА (хелатон-3), 4,5 г лимоннокислого трехзамещенного пятиводного натрия, 2,4 r сернокислого аммония, охлаждают раствор до 40 С после чего добавляют 50,,0 г глюкозы, 1,0 r двууглекислого натрия, 500 тыс.ед, спермосана-3 и 0,32 г молочнокислого лития при рН среды

7,3. Взятую от хряка сперму фильтруют, определяют известным способом активность и концентрацию сперматозоидов и производят разбавление, приливая среду к сперме. Температура среды в момент раэбавления составляет 37 С. Разбавление приготовленной средой спермы производят в отношении 1:3. Инкубацию семени в среде ведут при комнатной температуре (20"С) в

5 течение 3-е суток, после чего определяют подвижность спермиев известным способом по 10-бальной системе с помощью микроскопа, Подвижность сперматозоидов составила 7 баллов. В качестве контроля

10 использовали известную среду ГХЦС (прототип), которой разбавляли взятую у этого же хряка сперму и аналогичным образом, как в опыте, определяли подвижность сперматозоидов, которая составила 3 балла.

15 Сравнительные испытания контрольной среды ГХЦС (прототип) и предлагаемой среды с граничным и оптимальным содержанием количества компонентов (1, It u III варианты) по оценке подвижности сперма20 тозоидов, как описано в примерах 1-3, проводили на 36 животных по 9 хряков каждой группы (контроль и три варианта опыта). В контрольной группе подвижность сперматозоидов составила 3,0 0,6 балла (307,, rto

25 10-бальной системе); в опытной группе I варианта (содержание компонентов среды в нижних пределах) подвижность сперматозоидов составила 7,5+0,7 балла (75 p); в опытной группе II варианта (оптимальное

30 содержание компонентов среды) подвижность сперматозоидов составила 8,0 0,91 балла (80 ); в опытной группе tll варианта (содержание компонентов среды в верхних пределах) подвижность сперматозоидов со35 ставила 7,7+ 0,4 балла (77 ).

Использование предлагаемой среды для разбавления спермы хряков в условиях свиноводческих комплексов.

Пример 4. Готовят среду для разбав40 ления спермы хряка как опи<.ано в примере

1. В приготовленной среде на 1 л бидистиллированной воды содержится, г: глюкоза

40,0 ЭДТА (хелатон-3} 2,6; лимоннокислый трехзамещенный пятиводный натрий 3,8;

45 сернокислый аммоний 1,8; двууглекислый натрий 0,5; спермосан-3 250 тыс.ед.; молочнокислый литий 0,12, рН среды 7,0, Взятую при помощи искусственной вагины от хряка сперму фильтруют, определяют известным

50 способом активность и концентрацию сперматозоидов и разбавляют приготовленной средой, приливая среду к сперме. при температуре среды 37 С. Разбавление приготовленной средой спермы производят в

55 отношении 1:1. Приготовленную для осеменения сперму фасуют в тонкостенные флаконы вместительностью 150 — 250 мл, в которых она может храниться до 6 сут. Флаконы с разбавленной спермой перед осеменением

1708327 подогрева}от в теплой воде до 35 С, Для осеменения готовят две группы животных (опытная и контрольная) по 60 голоа в каждой, клинически здоровых с нормальной функцией половых органов, Содержание и 5 кормление животных oflb}TIIGA и контрольной групп было одинаковым и cooT" ветствавало санитарно-гигиеническим сл технологическим нормам, Опь:тну}о группу животных асеменя}от приготовленной спер- 10 май, разбавленной предлагаемой средой, а контрольную — спермой, разбавленной известной средой ГХЦС (прототип). ОплодотВарЯ ющу}0 способность 0 цени ва ют fto результатам Опросов, ОплОДОтварЯемасть 15 свиноматок опытной группы при исполLBîВании спермы, разбавленной предлагаемой :редай, составляет 75%, а контрольной— г/ ,сО

Пример 5. Готовят среду для раэбав- 20 ения спермы хряка как описано в примере

В приготовленной среде на 1 л бидистил})ОВВН НОЙ ВОДЫ СОДЕРЖИТСЯ, Г, ГЛ}0}<аэа 5,0, ЗДТА (хелатон-3) 3,0; лиманнокислый аехзамещенный пятивадный натрий 4,2; 25

;рНОКИСЛЫЙ амман}с}Ы 2,1, дыу)сглЕ}<ИСЛЫЙ

;-}атрий 0,8; спермосан-3 350 тыс.ед.; молоч окислый литий 0,24 Г, рН среды 7,15. Раэ..авление пр""ãотавле".H0Й средoй спермhl

}}раизводлт в отношении 11;1. Приготовлен- 30

НУЮ ДЛЯ ОСЕМЕНЕНИЯ Сг}ЕРМУ фас.сЮТ ВО флаконы. Для осемснения готовят две

Гpyrtпbt жиВoт }алых (Опь}тная и кантpoльная) по 60 голов в каждой. Опытную с-руппу жиВотных асеменя,от предварительно подо- 35

° гретой до 35 С спермой, разбавленной предлагаемой средой, а контрольную— спермой, разбавленной известной средой

ГХЦС (прототип), Оплодотворя}ащую способность оценивают по результатам апа: 40 росов. Оплодотворяемость свиноматок

ОПЬ}тНай ГруППЫ ПрИ ИСПаЛЬЭОВВНИИ СПЕРмы, разбавленной предлагаемой средой, составляет 80;ь, что на 17; выше, чем ь контроле (63 g,). 45

П р и м e p 6, Готовят Греду для разбавления спермы хряка как описано в примере

1. В приготовленной среде на 1 л бидистиллированной воды содержится. Г; глюкоза

50,0; ЭДТА (хелатан-3) 3,3; лимоннокислый 50 трехзамещенный пятиводный натрий 4,5; сернокислый амманий 2,4; двууглекислый натрий 1,0; спермасана-3 500 тыс.ед.; молачнакислый литий 0,32, рН среды 7,3. Разбавление приготовленной средой спе})мы 55 производят в отношении 1:1. Для осеменения готовят две группы животных (опытная и контрольная) па 60 голоы и каждой. Опытную группу животных осеменяют предварительна подогретой до 35 С спермой, разбавленной предлагаемой средой, а контрольную — спермой, разбавленной известной средой ГХЦС (про Готип).

0t1л0датв0ря}а}цу1а crIoco6H0cTb Оценивают па результатам or,оросов. Оплодотворяемость свиноматок опытнОЙ Группы при использовании спермь}. разбавленной предлагаемой средой, составляет 7? у „-, что на 13;,ь выше, чем в контроле (64%).

Кроме указанньсх В примерах 4-6 испытаний предлагаемой среды для разбавления

cI=.ep} Ib) хряков Gpoeoäènè сравнительные испытания контрольной среды ГХЦС (прототип) и предлагаемой среды, содержащей

0}т)имальные количества кампо} ентов, г на 1 л: глюкоза 45,0; ЗДТА (хелатан-3) 3,0; лиманнакислый трехзамесценный пятиводH U t)! и ат;) ий 4, 2, сер}}Окисл ы Й а симан}1 Й 2, 1; двууглекислый натрий 0,8; спер,ocaH-3

350 тыс.ед, молочнакисль}Й литий 0,24, при рН 7,15, Всего в сравнительчых испытаниях участва}) а сг) 1 200 cB!4}40MB) 0 }<, r}f) 000 rÎBGB в кot}Tt)onbHOA и Оп ытнОЙ Гp! f)па>, Опладат"

Воряющую способность и мнОГапладие ÎlteНИ})алсЛ Па РЕЭУЛЬтатаМ ОПОРОСОВ, Результаты сравнительного с}спь}танися новой и известной сред предс" зелены в табГсИЦЕ, Как видно иэ данных таблиць}, предлагаeìàB среда превосходит известную (opoтатИП) Па ПР}ЭЦЕН ГУ аплаДОТВОРЯЕМССтИ

СВИНОМВТОК, Та!< ПРИ ИС}IОЛЬЭОБВНИИ СПЕс)" мы, разбавленной предлагаемой средой or)ладатворяемость свиноматок составляет

80;4, ч:о на 17/, выше, чем в конграле, а также по мнагоплодию (11.6 В опыте, 8,2 в

".îíòðîëå) с сохранением живой массы r!сросят при рождени и, Таким образом, предлагаемая среда для разбавления спермы хряков обеспечивает повышение подвижности сперматозоидов да СраВНЕНИЮ С ПратоТИПО}сИ И }10 ПрацЕНту подвижности сперматозоидов через 3-е су) ок хранения в ней превосходит известную

В 2,5 раза, а также повышение оплодотворяющей способности сперматозоидов, оцениваемой г с результатам апоросов.

Формула изобретения

Среда для разбавления спермы хряков, Включак)шая Гл}О. <Оэу, хелатан 3, лимонно" кислый трехэамесценный пятиводный натрий, сернокис ый амманий, двууглекислый натрий, спсрмосан-3 и бидистиллированнук) воду, о т л и «a o щ а я с я тем, что, с целью повышения подвижности и оплодотВор}}ющеЙ спОсОбнОсти сперматозоидоВ, оНа дополнительно сад" ажит малачнакислый литий при следуюсцем соотношении компонентов, г/л;

1708327

40.0 — 50,0

2,6 — 3.3

Составитель Е. Кузнецова

Редактор Т. Лазоренко Техред М.Моргентал Корректор М, Демчик

Заказ 377 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035. Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Глюкоза

Хелатон-3

Лимоннокислый трехзамещенный пятиводный натрий 3.8-4,5

Сернокислый аммоний 1,8-2,4

Двууглекислый натрий 0,5 — 1,0

Спермосан-3 250-500

Литий молочнокислый 0,12 — 0,32

Бидистиллированная вода Остальное

5 при значении рН среды 7,0-7,3.