Способ определения т-и в-лимфоцитов на цитологическом препарате

 

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии. Целью изобретения является повышение точности способа. Цель достигается тем, что на препарате выявляют клетки с кольцевым и диффузно расположенным хроматином. При этом в качестве красителя используют акридиновый оранжевый в концентрации 1:500000, а окрашивание проводят в течение 1-2 мин. При наличии в клетках кольцевого хроматина определяют ее как Т-лимфоцит, а при наличии в клетках диффузно расположенного хроматина - как В-лимфоцит. Способ позволяет точно и быстро выявить эти две разновидности клеток.Способ относится к медицине, в частности к иммунологическим методам исследования, и может применяться в клинической и лабораторной практике для количественной оценки популяций Т- и В- лимфоцитов.Целью изобретения является повышение точности способа.Способ осуществляют следующим образом.Мазки крови или мазки отпечатки на холоде обрабатывают раствором акридинового оранжевого в разведении 1:500000 в течение 1-2 мин. Влажные мазки накрывают покровным стеклом и исследуют с водной иммерсией при увеличении в 900 раз (ок. 15, об. 60) на люминесцентном микроскопе МЛ-2. Т-лимфоциты дифференцируют по кольцевой крупноглыбчатой организации хроматина, а В-лимфоциты определяют по диффузной, мелкоглыбчатой организации Последнего.Пример 1. 8 белых крыс интактных и 10 крыс на 7 сут после введения им 20 млрд. микробных тел Staphylococcus aureus штамм 75 забивали под легким эфирным наркозом. Отпечатки селезенки на холоде обрабатывают раствором акридинового оранжевого 1:500000, в течение 1-2 мин, накрывают покровным стеклом, помещают на предметный столик микроскопа МЛ-2.При рассмотрении препарата под водой иммерсией Т-лимфоциты определяют по кольцевому крупноглыбчатому расположению хроматина, а В-лимфоциты - по диффузному, мелкоглыбчатому. Параллельно проводят определение Т-лимфоЦитов* и В- лимфоцитов по известному способу, а также путем определения Е- и ЕАС-розеткообра- Зующих клеток.Дополнительно был проведен контроль распределения клеток на Т- и В-лимфоциты по организаци хроматина в тесте с ЕА- и ЕАС-розеткообразованием с эритроцитами-*^^ГО 00^>&

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (5!)5 G 01 N 1/28

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4430506/30 (22) 23.05.88 (46) 15.02,92. Бюл. N. 6 (71) Киевский медицинский институт им. акад. А.Богомольца (72) В.Д.Дышловой, В,Г,Бордонос, Г.Б,АФонина, Е.Г.Гаркавая и П.П.Марцинюк (53) 616-0.88,8 (088.8) (56) Нарциссов Р.П, Прогностические возможности клинической цитохимии. M., 1984, с. 267. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ Т- И В-ЛИМФОЦИТОВ НА ЦИТОЛОГИЧЕСКОМ ПРЕПАРАТЕ

Способ относится к медицине, в частности к иммунологическим методам исследования, и может применяться в клинической и лабораторной практике для количественной оценки популяций Т- и Влимфоцитов.

Целью изобретения является повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Мазки крови или мазки отпечатки на холоде обрабатывают раствором акридинового оранжевого в разведении 1:500000 в течение 1-2 мин, Влажные мазки накрывают покровным стеклом и исследуют с водной иммерсией при увеличении в 900 раз (ок. 15, об, 60) на люминесцентном микроскопе МЛ-2. Т-лимфоциты дифференцируют по кольцевой крупноглыбчатой организации хроматина, а В-лимфоциты определяют по диффузной, мелкоглыбчатой организации последнего.

„„. Ж,,„1712817 А1 (57) Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии. Целью изобретения является повышение точности способа.

Цель достигается тем, что на препарате выявляют клетки с кольцевым и диффузно расположенным хроматином. При этом в качестве красителя используют акридиновый оранжевый в концентрации 1:500000, а окрашивание проводят в течение 1 — 2 мин.

При наличии в клетках кольцевого хроматина определяют ее как Т-лимфоцит, а при наличии в клетках диффузно расположенного хроматина — как В-лимфоцит. Способ позволяет точно и быстро выявить эти две разновидности клеток;

Пример 1. 8 белых крыс интактных и

10 крыс на 7 сут после введения им 20 млрд. микробных тел Staphylococcus aureus штамм 75 забивали под легким эфирным наркозом. Отпечатки селезенки на холоде обрабатывают раствором акридинового 3 оранжевого 1:500000, в течение 1-2 мин, накрывают покровным стеклом, помещают . ) на предметный столик микроскопа МЛ-2. QQ

При рассмотрении препарата под водой д иммерсией T-лимфоциты определяют по кольцевому крупноглыбчатому расположению хроматина, а В-лимфоциты — по диффузному, мелкоглыбчатому. Параллельно проводят определение Т-лимфоцитов и Влимфоцитов по известному способу, а также путем определения Е- и ЕАС-розеткообразующих клеток.

Дополнительно был проведен контроль распределения клеток на Т- и В-лимфоциты по организаци хроматина в тесте с EA- u

ЕАС-розеткообразованием с эритроцитами

1712817

Составитель Л.Стебаева

Техред M.Mopãåí Tàë Корректор M.Màêcèwèojèíeö

Редактор 3.Слиган

Заказ 530 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 барана и в тесте с анти- О-сывороткой, После обработки препарата анти- О-сывороткой крупноглыбчатая организация хроматина выявилась в 1-4 случаев, а клет.ки с мелкоглыбчатой, полиморфной организацией при увеличении в 900 раз (об, 60, ок.

15) на люминесцентном микроскопе или микроцитофлуориметре при 530 и 640 нм.

Т-лимфоциты дифференцируют по наличию крупноглыбчатой организации хроматина в ядре, а В-лимфоциты — по мелкоглыбчатой, полиморфной . Определяют параметры интенсивности свечения ядер Т- и В-лимфоцитов в зеленой и красной областях спектра и вычисляют для них в отдельности индекс метаболической активности.

Таким образом, предлагаемый способ повышаетточность определения Т-и В-лимфоцитов эа счет специфичности связывания красителя с исследуемой структурой — хроматином, поскольку акридин оранжевый соединяется с нуклеиновыми кислотами.

Кроме того, разрешающая способность метода флуоресцентного зондирования на порядок и более превышает чувствительность методов микроскопии в видимых областях спектра, что также повышает точность исследования.

Способ может быть использован в

5 лабораторной и клинической практике как экспресс-методдля определения Т- и В-лимфоцитов при различных состояниях с целью диагностики нарушений в системе иммунитета и их коррекции.

10 Формула изобретения

Способ определения Т- и В-лимфоцитов на цитологическом препарате путем инкубации мазков с красителем и определением клеток по организации хроматина, о т л и15 ч а ю шийся тем, что, с целью повышения точности способа, на препарате выявляют клетки с кольцевым и диффуэно расположенным хроматином, при этом j качестве красителя используют акридиновый оран20 жевый в концентрации 1:500000, а окрашивание пооводят 8 течение 1-2 мин и при наличии в клеткахкольцевого хроматина определяют Т-лимфоциты, а при наличии в клетках диффузно расположенного хромэ25 тина — В-лимфоциты.