Способ определения чистоты и гибридности семян подсолнечника

 

Использование биотехнология, селекционно-генетические исследования, сельское хозяйство, селекция и семеноводство. Сущность изобретения1 проводят электрофоретическое разделение эстераз родительских и гибридных форм, полученные спектры сравнивают со стандартными и по сопоставлению судят о чистоте и степени гибридное™. 1 з.п.ф-лы, (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 А 01 Н 1/04

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4810547/13 (22) 06,04.90 (46) 30,07,92, Бюл, К 28 (71) Всесоюзный селекционно-генетический институт (72) Б.ri. Íeöeeòàåe, И, С. Крестинков, Ф.А,Попереля, В,Р .Бурлов и В,И.Крутько (56} Инструкция по апробации сортовых посевов. M.; Колос, 1972, Kahler А.1 ., Lay СЛ . Genetics of

electrophoretic variants in the..annual

sunflower. The Jorna) of Heredity, 76;.335340, 1985 (прототип).

Peacock А.С., Bunt!no Я L„Queen К.G, Serum protein electrophoresis!и acrilamlde

gel: Patterns from гormal human subjects, Science, ч.147, No 366.4, р. 1451 — 1453, 1965.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в селекции и семеноводстве подсолнечника, а также на предприятиях системы хлебопродуктов, Основным методом сортового контроля у подсолнечника является полевая апробация. Сортовой контроль непосредственно по анализу семян не проводят и о сортовой чистоте и степени гибридности семян, поступающих на хлебоприемные предприятия, судят на основе сортового удостоверения, выписываемого на каждую партию сортовых семян.

Идентификацию материала проводят на основании морфологических прйзнаков, сильно подверженных влиянию внешнихусловий. Необходимы надежные генетические методы сортового контроля качества семен- ного материала, „„Я2 „„1 750509 А1 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧИСТОТЫ И

ГИБРИДНОСТИ СЕМЯН ПОДСОЛНЕЧНИКА (57) Использование: биотехнология, селекционно-генетические исследования, сельское хозяйство, селекция и семеноводство, Сущность изобретения: проводят электрофоретическое разделение эстераз родительских и гибридных форм, полученные спектры сравнивают со стандартными и по стопоставлению судят о чистоте и степени гибридности. 1 з,п.ф-лы.

Такие методы могут быть разработаны на основе принцйповт и подходов биохимической генетики путем использования электрофоретических способов разделения ферментных белков семян. В прототипе эта С1 задача решается путем определения ал- (у лелькой изменчивости локусов, кодирующих различные изозимы пероксидазы, малатдегидрогеназы, 6-фосфоглюконатдегидрогеназы, фосфоглюкомутазы, глюкозофоофатизомаразы 11 »т изоцитратдегидрогеназы, выделенные из проростков. Аналогичные методы работают только при отличиях электрофореграмм отцовской от материнской формы гибрида, При оценке чистоты и гибридности растений некоторых гибридов метод может не работать из-за отсутствия полиморфиэма по данным ферментным системам у родительских форм гибрида подсолнечника, союзного селекционно-генетического института, Линии Одесский 1036А, Одесский

1036Á, Одесский 3369А, Одесский 3369Б, Одесский 58 имели тип зстеразных электрофореграмм. Электрофореграммы эстераз

c !! типом характерны для линий подсолнечника Одесский 18 и Одесский 48. Соответственно гибридные семянки гибрида

Одесский 105 (Одесский 1036 Х Одесский

18) имеют эстеразы обоих родителей, а следовательно, их можно отличать rio электрофореграммам как от одного, так и от другого родителя, Анализ отдельных семянок с последующим подсчетом гибридных и родительских типов электрофореграмм позволяет определить процент гибридности данной партии семян гибрида Одесский ным методом установить нельзя, так как оба родителя (Од.3369 и Од.58) по злектрофореграммам эстераз не отличаются, Формула изобретения

1. Способ определения чистоты и гибридности семян подсолнечника, включающий выделение ферментов, их электрофоретическое разделение, получение изоферментных спектров, анализ и сопоставление их со стандартными спектрами родительских и гибридных форм, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью повышения точности оценки, в качестве исследуемых ферментов анализируют эстеразы, выделение их проводят из семян и электрофоретическое разделение осуществляют в полиакриламидном геле в трис-боратной среде рН 8,3.

2. Способ по п.1, о т л и «а ю шийся тем, что, с целью упрощения зкстракции, выделение эстераз проводят 0,2%-ным раствором двууглекислой соды, содержащим

20% сахарозы.

Составитель 8.!Одемкин

Техред M.Ìoðãåíòàë

Корректор С,Черни

Редактор Т,Пилипенко

Заказ 2630 Тираж Подписное

8НИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35., Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101

Цель изобретения — повышение точности способа определения чистоты и гибридности семян подсолнечника, а также упрощение экстракции..

Поставленная цель достигается тем, что определяется изоферментный состав эстераэ, каталиэирующих реакций расщепления сложн 6tx эфиров, которые содержатся в значительных количествах в семенах подсолнечника. При электрофоретическом разделении получают четкие генотипические различия, Чистота материала характеризуется типичностью иэоферментных спектров эстераз различных семян данной линии. Гибридность семян определяется по наличию в изоферментном спектре характерных для отцовской и материнской форм, аллеломорфов фермента.

Пример осуществления способа. СемянКу подсолнечника гомогенизировали

0,2 /,-ным раствором двууглекислои соды, содержащей 20% сахарозы. Супернатант

:: и осл е центри фуги ров а н ия и ри 5 ты с, об/мин в течение 15 мин при +2 С использовали в качестве сырого экстракта эстераз.

Разделение проводили в 7,5%--ном полиакриламидном геле, используя трис-боратный буфер рН 8,3 (3).

После электрофореза гели инкубировали в среде ацетатного буфера рН 6,0, содержащей 10 мг 1-нафтилацетата, 20 мг

2-йафтйлацетата и 50 мг прочйого голубого

РР (конечный объем смеси 100 мл) до появления зон с эстеразной активностью. Электрофореграммы эстераз исследуемого материала сравнивали с злектрофореграм"мами ранее изученных форм подсолнечника:. Чистоту материала определяют по типичности электрофоретических спектров эстераз различных семян данной линии, Гибридные семена выявляют йо наличию в изоферментном спектре характерных для отцовской формы аллеломорфов фермента, Указанным способом анализировались

Семена линий подсолнечника селекции Бсе105, Аналогично можно определять уровень гибридности гибридов Одесский 122 и Одес20 ский 123, Гибридность Одесского 128 дан