Способ определения биологической активности метаболитов гриба тriсноdеrма lignоruм

 

Использование: биохимия, определение биологической активности грибов. Сущность изобретения: проводят культивирование гриба, экстракцию культурэльной жидкости хлороформом, разделение метаболитов осуществляют на пластинах silufo в системе 1-28% этанола в хлороформе, биоавтографию осуществляют на тех же пластинах.1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (si>s А 01 N 63/00

ГО СУДА Р СТВЕ ННЫ Й КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4816709/13 (22) 11,03,90 (46) 23.08.92. Бюл. М 31 (71) Институт физиологии Уральского отделения АН СССР (72) С.Н,Пестовский, И.Н.Алексеев и Л.И,Антипов (56) Tetrahedron I etters, 1986, voI. 27, М 6, р.

735-738.

Сейкетов Г,Ш, Грибы рода Триходерма и их использование в пра ктике. — Алма-Ата:

Наука, 1982, 248 с.

Изобретение относится к области изучения биологически активных веществ микроорганизмов и биохимии, Известен способ определения токсических веществ Asperg illus fumigatus, включающий культивирование гриба, экстракцию и концентрацию экстракта, разделение веществ тонкослойной хроматографией на пластинах Merck F-254 в системе 57 метанол в метиленхлориде.

Недостатки известного способа заключаются в том, что он не использовался для определения биологической активности метаболитов с использованием операции биоавтографии; он не пригоден для проведения биоавтографии в связи с тем, что система разделения 5;4 метанол в метиленхлориде на. других аналогичных типах пластинок не делит метаболиты, разделяемые ею на пластинках Merck 60 F-254; а пластинки Merck

60 F-254 не пригодны для биоавтографии вследствие того, что они обладают собственной антибиотической активностью, Наиболее близким по технической сущности является способ определения биоло,,5LI„„1755758 А1 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ 1АЕТАБОЛИТОВ

ГРИБА TRICH0DERMA LIGNORUM (57) Использование: биохимия, определение биологической активности грибов. Сущность изобретения: проводят культивирование гриба, экстракцию культуральной жидкости хлороформом, разделение метаболитов осуществляют на пластинах silufol в системе 1-280/, этанола в хлороформе, биоавтографию осуществляют на тех же пластинах, 1 табл, гической активности метаболитов

Trichoderma tignorum, предложенный, включающий культивирование гриба, экстракцию и концентрацию экстракта, разделение веществ бумажной хроматографией в 10 системах растворителей, предложенных Всесоюзным институтом антибиотиков с последующей биоавтографией хроматограмм на Bacillus subtIIIIs.

Недостатком известного способа является низкая эффективность каждой из предложенных систем, так как ни в одной из них не удалось удовлетворительно разделить индивидуальные вещества способом, большое количество операций, в сочетании с их низкой эффективностью, а от этого большая длительность процесса; ограниченность применения способа, определяемая более низкой чувствительностью бумажной хроматографии по сравнению с тонкослойной хроматографией, Целью заявляемого изобретения является повышение эффективности способа.

Поставленная цель достигается тем, что по способу, включающему культивирование гриба, экстракцию культуральной жидкости

1755758

0,22

0,27

0,17

0,37

0,37

0,42

0,25

0,50 хлороформом, концентрацию экстракта, разделение и биоавтографию метаболитов, разделение ведут методом тонкослойной хроматографии на пластинках Silufoi в системе 1 — 28% этанола в хлороформе, биоав- 5 тографию метаболитов осуществляют с использованием пластинок Sllufol, Способ осуществляют следующим образом, — Гриб Trichaderme lignorum культивиру- 10 ют глубинным способом в течение 5 суток.

Культуральную жидкость (КЖ) фильтруют и зкстрагируют хлороформом трижды (100, 400 и 400 мм хлороформа на каждый литр фильтрата). Экстракт концентрируют.упари- 15

- ванием под вакуумом, Индивидуальные вещества разделяют тонкослойной хроматографией (ТСХ).

Пример !. Для экспериментальной проверки заявляемого соотношения компо- 20

Нентов смеси разделения концентрат культуральной жидкости разгоняют на пластинках Silufol UV-254 в заявляемой смеси.

i. оотношения компонентов смеси и ре- 25 зультаты указаны в — àáëèöå.

Вывод. удовлетворительное разделение и выделение индивидуальных ксмпонентов можно проводить при составе смеси

Π— 28% этанола в хлороформе. 30

Пример 2. Для экспериментальной проверки заявляемого способа концентрат хлороформиого экстракта КЖ разгоняют в системе 5% этанола в хлороформе на пластинках Silufol UV-254, Пластинки; разоеза- 35 ют вдоль для грубой проверки биологической активности; из пластинок вырезают полоски, соответствующие выявленным индивидуальным веществам для Goлее тонкой проверки; пластинки, 40 . полученные по пп, 1 и 2, помещают на !апек-агар с тест-организмом (Бас!!!оз

subtiltiз), Результаты четко проявлялись после 2 суток выращивания в термостате при температуре 28"С, 45

Выводьь Заявляемый способ пригоден для проверки веществ хлороформного экстракта КЖ Trlchoderma llgnorurn на биологическую активность, Пластинки Silufol UV254 не обладают собственной антибиотической активностью. Система 5% этанола в хлороформе (как показала биоавтография) разделила все наличные биологически активные вещества хлороформного экстракта, П р и м е. р 3, Для экспериментальной проверки соотношения компонентов смеси, предложенной австралийскими авторами (5% этанола в метиленхлориде), вещества хлороформного экстракта наносили на пластинки Merck 60 F-254 и Siiufo!UV-254. Разделения веществ на пластинках Siiufol не произошло.

В ы вод. Предложенная австралийскими авторами смесь для разделения не работает на пластинках Sllufoi 1И-254, не обладающих собственной биологической активностью.

Пример 4. Для проверки пригодности способа разделения, предложенного австралийскими авторами для биоавтографии,. пластинки Merck 60 F-254, полученные, как в примере 3, наносили на среду с

Вас,subtlllis, как в примере 2, Результаты калибровались по стрептомицину, Обнаружено, что и в контроле пластинки Merck 60

iF-254 обладают собственной биологической (антибиотической) активностью, Вывод, Пластинки Merck 60 F-254 обладают собственнол антибиотической активностью, в отличие от пластинок Siiufol

UV-254. Вследствие этого пластинки Merck

60 F-254 не пригодны для проведения биоавтографии.

Формула изобретения

Способ определения биологической активности метаболитов гриба Trichoderma

iignorum, включающий культивирование гриба, экстракцию культуральной жидкости хлороформом, концентрацию экстракта, . разделение и биоавтографию метаболитов, отличающийся тем, что, с целью повышения эффективности способа, разделение ведут методом тонкослойной хроматографии на пластинках в системе 1 — 28% этанола в хлороформе, а биоавтографию метаболитов осуществляют с использованием пластинок 3!!МОГ, 1755758

Продолжение таблицы

Составитель С. Пестовский

Редактор М. Кузнецова Техред М.Моргентал Корректор Н. Гунько ,Заказ 3032 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r, Ужгород, ул.Гагарина, 1Î1