Способ определения устойчивости картофеля к резиновой гнили

 

Использование: сельское хозяйство. Сущность изобретения: получают инфекционный материал путем культивирования гриба Geotrlchum candidum на картофельноглюкозном отваре в течение 3-4 сут при 2б°С, инфицируют клубни путем помещения их в марлевую салфетку, смоченную в культуральной среде, или методом укола клубня культуральной средой с помощью шприца. Затем инкубируют инфицированные клубки при 26-40 С и оценку заболевания осуществляют по характерным признакам проявления болезни на клубнях: эластичности и резиноподобности парахимы, появления поверхностных коричневых пятен с черной каймой через 1-4 дня после инфицирования . К восприимчивым образцам относят образцы с указанными признаками заболевания , к устойчивым те, у которых эти признаки отсутствуют. Способ позволяет провести оценку картофеля на устойчивость к резиновой гнили в течение 1-4 сут. против 6-21 по известному способу. 5 табл. сл С

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАН И Е. ИЗОБРЕТЕ Н И я

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 4719777/13 (22) 17.07.89 (46) 23.06,92. Бюл. М 23 (71) Научно-исследовательский институт картофельного хозяйства Научно-производственного объединения Ro картофелеводству (72) В.Н .Сергеева и А.С.Воловик (53) 581.57:576.8(088.8) (56) "Plant Pathology", 1969, 18 N. 4, с.186197. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ УСТОЙЧИВОСТИ КАРТОФЕЛЯ К РЕЗИНОВОЙ ГНИЛИ (57) Использование: сельское хозяйство, Сущность изобретения: получают инфекционный материал путем культивирования .гриба Geotrlchum candidum на картофельноИзобретение относится к области сельского хозяйства, преимущественно к картофелеводству, и может быть использовано в селекции картофеля при получении устойчивого селекционного материала к резиновой гнили.

Известен способ искусственного заражения клубней путем погружения их в суспензию спор возбудителя резиновой гнили на несколько часов, приготовленную из 714-дневной культуры гриба на твердой питательной -среде.. После этого клубни закладывают в плотные полиэтиленовые пакеты с проавтоклавированным увлажнен-, ным песком.и выдерживают в термостате.

6-21 день при 18, 20, 22, 24 С.

Цель изобретения — ускорение способа.

Способ заключается в том, что получают инфекционный материал путем культивирования гриба Geotrlchum candldum на картоSU < 1741I705A1 (я)з А01N 63/00, С12 и 1/14 С 120 1/00 глюкозном отваре в течение 3-4 сут при

26 С, инфицируют клубни путем помещения их в марлевую салфетку, смоченную в культуральной среде, или методом укола клубня культуральной средой с помощью шприца.

Затем инкубируют инфицированные клубни. при 26 — 40 С и оценку заболевания осуществляют по характерным признакам проявления болезни на клубнях: эластичности и резиноподобности парахимы. появления поверхностных коричневых пятен с черной каймой через 1-4 дня после инфицирования. К восприимчивым образцам относят образцы с указанными признаками заболевания, к устойчивым те,.у которых эти признаки отсутствуют. Способ позволяет провести оценку картофеля на устойчивость к резиновой гнили в течение 1-4 сут. против

6-21 по известному способу. 5 табл. фельно-глюкозном отваре в течение 3-4 сут. при 26 С, инфицируют клубни путем помещения их в марлевую салфетку,.смоченную в культуральной среде, или методом укола клубня культуральной средой с помощью шприца, затем инкубируют инфицированные клубни при 26 — 40ОС и оценку заболевания осуществляют по:характерным признакам проявления болезни на клубнях эластичности и резиноподобности па ренхимы, появления поверхностных коричневых пятен с черной каймой через 1-4 дня после инфицирования, K восприимчивым образцам относят образцы с указанными признаками заболевания, к устойчивым те, у которых эти признаки отсутствуют.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Получение инфекционного начала.

1741705

Питательную среду получают путем приготовления картофельного отвара (на 1. л воды 200 г измельченно-нарезанных клубней), добавляют 20 г глюкозы и автоклавируют при 1,7 атм 40 мин, Жидкий отвар разливают в колбы и охлаждают. Посев гриба осуществляют в жидкую питательную среду. Исходный инокулум патогена берут из колоний гриба, выросших на твердой питательной среде в чистой культуре. После посева гриба.инокулированную жидкую питательную среду в колбах обьемом 0,5-2,0 л . выдерживают 3 — 4 сут. 3а 1-2 сут не происходит достаточного накопления биомассы гриба и выделяемых им ферментов. На 3 — 4 сут вся поверхность среды покрывается белым налетом спороношения возбудителя, что свидетельствует о зрелости среды. Среда на протяжении 10 — 15 дней остается стабильной.

Пример 2. Инокуляция клубней картофеля.

Полученную по примеру 1 культуральную среду используют для инокуляции картофеля. Продолжительность экспозиции от заражения до получения признаков заболевания составляет 3 — 4 дня в зависимости от температуры Мытые и стерилизованные спиртом клубни обворачивают в марлевые тампоны, смоченные в культуральной.среде.

После инокуляции клубни термостатируют при влажности воздуха 90-100% и 2640 С. При инфицировании в марлевых салфетках инокулируемые клубни приобретают типичные свойства резиновой гнили: эластичность и резиноподобность паренхимы, появление поверхностных коричневых. пятен с черной каймой. При разрезании больного клубня пораженная ткань окрашивается в грязно-розовый цвет, затем постепенно буреет, чернеет с образованием спороношения возбудителя. Оценку устойчивости клубней проводят на 1 — 4 день инкубирования.

В табл.1 приведены результаты различных способов инфицирования клубней: по известному способу (прототипу) намачивание в водной суспензии спор с дальнейшим выдерживанием в автоклавируемом песке и по предложенному способу- путем обворачивания клубней в марлевую салфетку, смоченную в культуральной среде гриба, Из табл.1 видно, что по предлагаемому способу можно определять устойчивость сорта в 2-3 раза быстрее, чем по известному, кроме того, повышается степень достоверности; устойчивость можно определйть по вегетирующим растениям.

10 среднеустойчивостью 37 — 50 по сравне15

20 также для оценки устойчивости вегетирую25

35

45

В табл.2 приведена оценка 62-х образцов различных сортов гибридов картофеля на устойчивость к резиновой гнили.

Иэ табл.2 видно, что ранние сорта картофеля сильно восприимчивы к резиновой гнили и составили 43, среднеранние 14Я, среднеспелые 15 Среднепоздние и поздние сорта обладают повышенной относительной устойчивостью до 50 и нию с ранними сортами картофеля (до 13;4).

Поэтому при выращивании картофеля необходимо обращать внимание на группу спелости сорта, что оказывает влияние на развитие болезни.

При инокуляции клубней методом укола проявляются такие же признаки, как описано выше, но более локально расположенные, что дает возможность использовать его щих растений, Способ осуществляется введением иглой медицинского шприца в клубень 0,1 мл жидкой культуральной среды на глубину 11,5 см, Место укола заклеивают расплавленным парафином.

Этот метод позволяет провести наблюдения за временем проявления и поражения картофеля в период вегетации. Первые симптомы поражения в зависимости от степени заражения проявляются довольно рано. Образуются большие выпады растений в месте посадки больных клубней. Инфекция передается от больного клубня к соседнему, поражая ростки, которые темнеют и загнивают. Если ростки не погибли, то взошедшие растения угнетены, отстают в росте и развитии. В процессе вегетации на стеблях образуются коричневые пятна, на нижней части- стебля иногда со слабым спороношением возбудителя, в месте которого стебель надламывается и загнивает.

От потемнения до загнивания проходит

3 — 5 дней.

Пример 3. Изоляция патогена в чистую культуру, Целые или разрезанные пополам клубни помещают в эксикатор при 20-24 С на

36 — 48 ч. По истечении данного периода на пораженных участках клубней развивается белый мицелий гриба в виде отдельных скоплений подушечек. Спороношение быстро исчезает и плохо проявляется на стеблях и ростках.

Гриб трудно изолируется при помещении органов растений во влажную камеру, которые быстро зарастают мукоровыми грибами и бактериями. Учитывая это обстоятельство, производят изолирование, производя посев на агаровые среды.

1741705

Таблица1

Эффективность различных способов инфицирования клубней

Основными правилами работы для успешного изолирования возбудителей грибов Geotrlchum candldum являются следующие. Поверхность стеблей, столонов, клубней отмывают проточной водой, дезинфицируют спиртом, промывают стерильной водой, высушивают (промакают) фильтровальной бумагой, разрезают на кусочки 2-4 см, расщепляют вдоль пополам зону пораженного участка и помещают в чашки Петри с питательной средой. Рост и идентификацию производят в течение 2-5 дней при 20-26 С.

В табл.3 показана интенсивность роста мицелия гриба на различных питательных средах, а в табл.4- рост различных штаммов гриба при различной температуре на 7-й день культивирования.

fl р и м е р 4. Влияние концентрации инокулюма и метода заражения на развитие резиновой гнили картофеля на клубнях.

Инокуляцию клубней проводят так, как описано выше. Результаты инокуляции приведены в табл.5.

Учет поражения клубней по разработанной шкале для резиновой гнили картофеля:

0 — отсутствие болезни;

1 — начальное появления пятен;

2 — поражена 1/4 часть клубня;

3 — поражена от 1/3 до 1/2 части клубня;

4 — поражено более 1/2 части клубня;

5 5 — размягчение всего клубня;

6 — клубень сгнил.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет провести оценку картофеля нэ устойчивость к резиновой гнили в течение

10 1 — 4 сут против 6 — 21 по известному способу.

Формула изобретения

Способ определения устойчивости картофеля к резиновой гнили, включающий

15 дезинфекцию поверхности клубней картофеля, инфицирование клубней грибом

Geotrlchum candldum, инкубирование и оценку устойчивости по характерным при-. знакам проявления болезни, о т л и ч а ю щ и20 и с я тем, что, с целью ускорения способа, инфицирование осуществляют путем помещения клубней в марлевый тампон, смоченный культуральной средой, полученной при выращивании гриба на картофельно-глю25 козном отваре в течение 3 — 4 сут при 26 С, а инкубирование инфицированных клубней осуществляют при 26 — 40 С;.1741705

Таблица2

Распределение сортов и гибридов картофеля разных групп спелости по устойчивости к резиновой гнили

ТаблицаЗ

Интенствность роста мицелия гриба на различных питательных средах

Таблица4

Рост различных штаммов гриба Geotrichum candidum при различных температурах, мм

1741705

Продолжение табл. 4

Инок ля ия с спензий спо, балл

Ва ианты

2,4

Контроль

10-20 шт. спор. в поле зрения микроскопа

50-60

100-110

Клубни, помещенные в тампоны с культуральной жидкостью:

25 мл культуральной среды

+ 75 дистиллированой воды 1:2

50 мл культуральной среды

+50 мл дистиллированной воды 1:1

100 мл к льт альной с е ы

3,6

4,0

3,0

4,0

5,0

Составитель fO.Ðîãà÷åâ

Техред М.Моргентал

Редактор Т,Иванова

Корректор Л.Бескид

Заказ 2231 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Проиэеодстеенно-иэдательскиа комбинат "Патент", г. Уигород, ул.Гагарина, 101

Таблица5.

Влияние концентрации инокулюма м метода заражения на развитие резиновой гнили картофеля на клубнях, балл