Способ электрофоретического разделения нуклеиновых кислот растений

 

Использование: биохимия и молекулярная биология. Сущность: с целью регулирования скорости движения фрагментов нуклеиновых кислот в электрофоретической системе, препарат перед внесением в гель обрабатывают соединением кремния, например метасиликатом натрия в концентрации - М. Следствием этого является уменьшение скорости движения фрагментов нуклеиновых кислот в электромагнитном поле на 20% по сравнению с контролем. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 С 12 N 15/01

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 4 !!ч О (л)

IQl

I Q) (21) 4754649/13 (22) 01.11,89 (46) 23.10,92, Бюл, ¹ 39 (71) Всесоюзн ый научно-исследовательский институт риса (72) Н.Е.Алешин, Э.P.Àâàêÿí, Н.Г.Туманьян и Е.П.Алешин (56) LKB 2012, Maxiphop Submarine

Electrophoresis Unit. Laboratory Manual, LKB, Sweden. (54) СПОСОБ ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКОГО

РАЗДЕЛЕНИЯ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ

РАСТЕНИЙ

Изобретение относится к области биохимии и молекулярной биологии растений и может быть использовано в оценке исходного материала при селекции риса; в решении генно-инженерных задач; в лабораторной и рактике молекул я рно-биологических исследований.

Известен способ электрофореза биологических макромолекул на бумаге, в крахмальных гелях (1), в полиакриламидных гелях (2), Эти способы мало пригодны для электрофореза нуклеиновых кислот (НК), так как не позволяют эффективно разделять макромолекулы последних; в случае их использования затруднено выделение очищенных фрагментов нуклеиновых кислот из самого геля.

Известны также способы электрофоретического разделения нуклеиновых кислот с использованием полиакриламидно-агарозных, агаровых гелей,3), а также агарозных гелей (4).

» Ы 1770358 А1 (57) Использование; биохимия и молекулярная биология. Сущность: с целью регулирования скорости движения фрагментов нуклеиновых кислот в электрофоретической системе, препарат перед внесением в гель обрабатывают соединением кремния, например метасиликатом натрия в концентрации 10 — 10 М. Следствием этого является уменьшение скорости движения фрагментов нуклеиновых кислот в электромагнитном поле на 20% по сравнению с контролем. 1 табл.

Недостатками вышеуказанных способов являются: — невозможность направленно регулировать скорость движения фрагментов нуклеиновых кислот в электрофоретической системе, которая вызвана низкой разрешающей способностью способа; — дополнительные затраты времени и средств, связанные с повторными и последующими операциями по разделению близких по молекулярным характеристикам фрагментов нуклеиновых кислот.

Наиболее близким к предлагаемому является способ электрофоретического разделения нуклеиновых кислот (5), заключающийся в том, что исследуемый препарат НК вносят в лунку горизонтального подводного (затопленного трис-боратным буфером рН 8,0) агаризованного геля (концентрация агарозы 0,9%, толщина геля

2 мм, длина 20 см), после чего на электрофоретическую систему при помощи источника питания воздействуют в течение 5 часов

1770358

Формула изобретения

Сравнительная характеристика результатов электрофореза (5 час) нуклеиновых кислот, проводимого по способу — прототипу и предлагаемому способу г Г=

Показател

Пройденный

; путь. %

Замедление, Скорость зам ления, %/час Р>Р 001 электромагнитными полем с параметрами: сила тока — 194 мА, напряжение — 82 мВ.

Затем процесс прекращают и изучают результатыы на трансиллюминаторе.

Недостатками способа являются: — низкая разрешающая способность относительно фрагментов, близких по молекулярной массе; — невозможность направленного регулирования фрагментов Н К в электромагнитном поле; — дополнительные затраты времени и средств, связанных с повторными и последующими операциями по разделению близких по молекулярным характеристикам фрагментов НК.

Целью изобретения является увеличение разрешающей способности способа за счет снижения скорости движения фрагментов нуклеиновых кислот в электромагнитном поле, Поставленная цель достигается тем, что в известном способе электрофоретического разделения нуклеиновых кислот. заключающемся в помещении препарата НК в затопляемый буфером агарозный гель и воздействии на указанный преперат электромагнитным полем, перед внесением в гель препарат обрабатывают метасиликатом натрия в концентрации 10 — 10 M.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом.

Исследуемый препарат дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) из 12-дневных проростков риса сорта Краснодарский 424 выдер>кивали в оастворе 10 М, 10 М, 10

М, 10 М, 10 М метасиликата натрия, в зависимости от варианта опыта, в течение

24 часов, затем растворяли в 8% растворе сахарозы, содер>кащей 0,1% бромфенологового синего, вносили в лунку горизонтального подводного агарозного геля, Гель затоплен слоем трис-боратного буфера, рН

8,0. Концентрация агарозы в геле 0,9%, толщина геля 2 мм, длина 20 см. Затем в электрофоретическую систему при помощи

5 источника питания воздействовали в течение 5 часов электромагнитным полем с параметрами; сила тока 194 мА, напряжение

82 мВ, За ходом электрофореза следили по движению бромфенолового синего. По

10 окончании процесса гель прокрашивали в растворе этидиум бромида и просматривали на трансиллюминаторе. Результаты электролиза представлены в таблице. Как следует из привеуенных данных, обработка

15 НК 10, 10, 10 М раствором метасиликата натрия приводит к изменению электрофоретических показателей: уменьшению пройденного пути и снижению скорости движения фрагментов НК. Это, в свою оче20 редь, позволяет разделять фрагменты НК, близкие по электрофоретическим свойствам (масса, заряд и т.д,); выделять из совокупности фрагментов тот, который необходим для биохимических и генноин25 женерных целей.

Способ электрофоретического разделе30 ния нуклеиновых кислот растений, включающий внесение препарата нуклеиновых кислот в агарозный гель и воздействие на препарат электромагнитным полем, о т л и— ч а ю шийся тем, что, с целью увеличения

35 разрешающей способности способа за счет снижения скорости движения фрагментов нуклеиновых кислот в электромагнитном поле, перед внесением в гель препарат нуклеиновых кислот обрабаты40 вается метасиликатом натрия в концентрации 10 — 10 М,