Способ консервации сыворотки против сальмонеллеза животных

 

Область использования: ветеринарная микробиология, консервация сывороток, хранение сывороток, гипериммунные сыворотки . Сущность изобретения: способ консервации сыворотки против сальмонеллеза животных основан на добавлении к сыворотке вещества-консерванта. В качестве консерванта используют раствор димерэтиленэмина, который добавляют к сыворотке по окончании процесса дефибринации плазмы, вводя его в дефибринатор при включенной мешалке.

COIO3 СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (5Н5 А 61 К 39/40

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ "

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

{21) 4860873/13 (22) 12.07.90 (46) 30.11.92. Бюл. ¹ 44 (75) А.П.Медведев (56) Патент США ¹ 4058599. кл. А 61 К 39/02, 1977, Инструкция по изготовлению и контролю антитоксической поливалентной сыворотки против сальмонеллеза телят, поросят, ягнят, овец и птиц. Утв. ГУВ СССР, 1971, (54) СПОСОБ КОНСЕРВАЦИИ СЫВОРОТКИ

ПРОТИВ САЛЬМОНЕЛЛЕЗА ЖИВОТНЫХ

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к способам консервации сывороток для их последующего ,использования.

Известны различные способы консервации сывороток и других. биопрепаратов, например, способ консервации эритроцитарных диагностикумов путем добавления

4 -ного раствора формалина в фосфатнобуферном растворе. Ха каждые 10 мл диагностикума добавляют 1 мл раствора формалина.

Недостатками такого способа являются разбавление препарата консервантом и снижение его активности иэ-за токсичности формалина, значительная сложность техпроцесса приготовления консерванта.

Известен также и используется в микробиологической промышленности наиболее близкий к предлагаемому способ консервации сыворотки против сальмонеллеза животных, полученной от крови волов-продуцентов, гипериммунизируемых поливалентным сальмонеллезным формалантигеном путем добавления к сыворотке

5%-ного раствора фенола из расчета 10 см. Ю „, 1777886 А1 (57) Область использования: ветеринарная микробиология, консервация сывороток, хранение сывороток, гипериммунные сыворотки. Сущность изобретения: способ консервации сыворотки против сальмонеллеза животных основан на добавлении к сыворотке вещества-консерванта, В качестве консерванта используют раствор димерэтиленэмина, который добавляют к сыворотке по окончании процесса дефибринации плазмы. вводя его в дефибринатор при включенной мешалке. раствора на 90 см сыворотки. Однако и

3 этот способ имеет существенные недостатки: добавление к сывооотке раствора фенола разбавляет ее íà 10% и тем самым уменьшает концентрацию в препарате противосальмонеллеэных антител, фенол обладает сильным раздражающим действием, высокотоксичен, отрицательно влияет на специфическую активность иммуноглобулинов.

Цель изобретения — повышение активности сыворотки за счет уменьшения ее разбавления, упрощение способа.

В описываемом способе консервации сыворотки против сальмонеллеза животных путем добавления к дефибринированной сыворотке консерванта.

Это достигнуто тем, что в качестве консерванта используют водный раствор димер этилензмина.

Способ осуществляется следующим образом.

По окончании процесса дефибринации плазмы к сыворотке в дефибринатор при включенной мешалке добавляют 0,4% вод1777886 ного раствора димер этиленэмина — 1,2 аминоэтил-азиридина — (ДЭ И).

Мешалку оставляют включенной на 57 мин для равномерного распределения вещества в сыворотке, Затем сыворотку 5 перекачйвают из дефибринатора в отстойник и подвергают отстою. В дальнейшем полученный препарат подвергают необходимой обработке в соответствии с действующей технологической инструкцией. 10

Водный раствор димера этиленэмина (структурная формула)

СН ,. N-СНз-СН2 1Н2.

СН 15 элементарная формула Cpk>oNz по внешнему виду — прозрачная бесцветная жидкость.

Массовая доля димерэтиленэмина в растворе не менее 15, водородный показатель не более 13. 20

Предлагаемый способ консервации сыворотки ДЭИ прост, доступен, преемлем для биофабричного производства, не требует затрат на приобретение оборудования. высокой квалификации работников, не ус- 25 ложняет технологический процесс производства сыворотки.

Пример 1. От 10 волов-продуцентов брали кровь из расчета 16 см на 1 кг массы з животного, Кровь от каждого продуцента 30 смешивали в общей емкости и затем путем сепарации от плазмы отделяли форменные элементы. Г1лазму дефибринировали. Полученную сыворотку разделили на две равные части по 23 л. Одну часть сыворотки 35 законсервировали 5 /-ным раствором фе3 чола, добавив его из расчета на 90 см" сыворотки 10 сМ раствора по известному способу-прототипу, а другую часть препарата — 20 Д-ным водным раствором димерэти- 40 ленэмина, добавив 4 см раствора на з

99,6 см препарата. После двухмесячного отстоя сыворотку подвергли стерилизующей фильтрации.

Затем сыворотку, обработанную фено- 45 лом и димерэтиленэмином, в параллельном опыте испытали на стерильность, безвредность и активность методами предусмотренными ТУ 46-21-45-74.

В результате было установлено, что сы- 50 воротка, консервированная предложенным способ, т.е. путем добавления к препарату

0,4 раствора димеоэтиленэмина, оказалось стерильной, безвредной, активной,т.е. отвечала требованиям ТУ и не уступала по 55 качеству сыворотке, обработанной фенолом, Пример 2. Из сырья, предназначенного для изготовления производственной серии препарата, взяли две пробы сыворотки по 1 л каждая. Одну пробу(М1) законсервировали существующим способом-прототипом, а другую пробу (N2) предложенным способом, т.е. к сыворотке добавили 20g,ный водный раствор димерэтиленэмина из расчета 0,47: на 99,6 см сыворотки 4 см консерванта, Сыворотку обоих проб после двухмесячного отстоя простерилизовали путем фильтрации и проверили на стерильность, безвредность и активность.

Стерильность сыворотки проверяли путем высева на питательные среды; МПЛ, МПБ, МППБ, среду Сабуро. Среды выдерживали при 37 — 38 С 10 сут. В течение этого срока в средах не было роста микроорганизмов. Сыворотка проб ММ 1,2 оказалась стерильной.

Для проверки на безвредность сыворотку вводили подкожно, белым мышам массой

16 г в дозе 0,5 см и мозоским свинкам массой 350 г в дозе 10 см, На каждую пробу сыворотки использовали по 5 мышей и 3 свинки. За подопытными животными вели наблюдение в течение 10 сут. Морские свинки и мыши остались клинически здоровыми и-живыми, т,е. сыворотка проб N 1 и N 2 была безвредной.

Контроль активности сыворотки проводили на голубях и белых мышах, Голубям сыворотку вводили внутримышечно в дозах:

0,5; 0,1; 0,02; 0,004 и 0,0088 см . Мышам препарат иньецировали подкожно в дозах:

0,1; 0,02; 0,004; 0,0008 и 0,00016 cM . На каждую дозу использовали не менее пяти голубей и мышей.

Спустя 2 ч после введения сыворотки проб N.1 и М2 опытных животных заражали минимальной смертельной дозой сальмонелл соответствующего серотипа. Одновременно заражали контрольных животных, которые не получили сыворотки. За опытными животными вели наблюдение в течение

20 сут, учитывая павших и выживших, Затем по методу Кербера в модификации Ашмарина рассчитали величину 50%,-ной иммунизирующей дозы сы воротки (ИД50) для лабораторных животных. Было установлено, что ИД о сыворотки пробы N. 1 соответствовала в отношении S.ch.suis 0,022 см, S.dublin 0,023 см, Я.т.murium 0,019 см, сыворотки пробы N 2 0,014; 0,012; 0,015 и

0,013 см соответственно. Следовательно з сыворотка, консервированная раствором димерэтиленэмина (проба М2) активнее, чем сыворотка, консервированная фенолом (проба М1), Пример 3, К 2100 л сыворотки добавили в качестве консерванта 0,4 (8,4 л) раствора димерэтиленэмина. Для равномерного распределения консерванта в сы1777886

Составитель А. Медведев

Техред М.Моргентал Корректор А. Долинич

Редактор 3. Ходакова

Заказ 4150 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 воротке включали механическую мешалку на 5-7 мин. Затем сыворотка отстаивалась при 2-15 С два месяца. После отстоя сыворотку фильтровали и исследовали на стерильность, безвредность, активность методами, предусмотренными ТУ 46-21-4574. Было установлено, что сыворотка стерильная, безвредная, активная, отвечает требованиям ТУ, годна к практическому применению.

Таким образом, использование в качестве консерванта димерэтиленэмина по предлагаемому способу позволяет значительно (в 25 раэ по сравнению с прототипом) уменьшить разведение сыворотки и повысить ее активность, упростить технологию консервации. Способ обеспечивае надежную консервацию сыворотки, 5 ©ормула изобретения

Способ консервации сыворотки против сальмонеллеза животных путем добавления к дефибринированной сыворотке консерванта при перемешивании, о т л и ч а ю10 шийся тем, что, с целью повышения активности сыворотки за счет уменьшения ее разбавления и упрощения способа, в качестве консерванта используют водный раствор димерэтиленэмина.