Штамм coxiella вurnеттi, используемый для получения гипериммунных сывороток
Использование: медицина, диагностика , микробиология - получение гипериммунных сывороток с целью идентификации коксиелл Бернета в первой фазе. Очищенную дифференциальным центрифугированием яичную культуру коксиелл в разведении с: интервалом в 3 дня вводят внутрибрюшинно кроликам. Первую инъекцию в объеме 0,5 мл, вторую 1 мл, третью 2 мл. Через 10 дней после последней иммунизации получают гипериммунную сыворотку . Сыворотка не реагирует с антигенами риккетсиальной природы (риккетсии Провачека, риккетсии Сибирина), не теряет своей чувствительности в течение 2-х лет.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (я)5 С 12 N 1/00, А 61 К 39/40
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
«4
М фа
СО
6д
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4834757/13 (22) 04.06,90 (46) 07.04,92. Бюл, N 13 (71) Ленинградский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера (72) Н.К, Токаревич. А .Б.Дайтер и Н.А.Рыбакова (53) 576.851.71 (088.8) (56) Вопросы инфекционной патологии и иммунологии.— М.: Медицина, 1976, с. 171-186, Асте virology, 1987, т. 31. с. 156-157. (54) ШТАММ COX1ELLA BURNETTI, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ГИПЕРИММУННЫХ СЫВОРОТОК
Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано в вакцинно-сывороточном производстве для приготовления диагностических препаратов.
Известны зарубежные штаммы коксиелл Бернета "Найн Майл", "Хензерлинг" и др., однако они выделены более 30 лет назад, многократно пассировались на развивающихся куриных эмбрионах, что приводило к снижению их антигенной активности и возможному переходу фазового состояния.
Известен штамм "М-44", используемый для производства живой вакцины и сухого корпускулярного антигена для реакции связывания комплемента, однако в результате длительного пассирования на куриных эмбрионах перешел во второе фазовое состояние, т.е. утратил некоторые антигенные
„„ Ы„„1724683 А1 (57) Использование: медицина, диагностика, микробиология — получение гипериммунных сывороток с целью идентификации коксиелл Бернета в первой фазе. Очищенную дифференциальным центрифугированием яичную культуру .коксиелл в разведении 10 7 с. интервалом в 3 дня вводят внутрибрюшинно кроликам. Первую инъекцию в объеме 0,5 мл, вторую 1 мл, третью 2 мл. Через 10 дней после последней иммунизации получают гипериммунную сыворотку, Сыворотка не реагирует с антигенами риккетсиальной природы (риккетсии
Провачека, риккетсии Сибирина), не теряет своей чувствительности в течение 2-х лет. субстанции и не может вызывать образование антител к антигенам первой фазы коксиелл, Цель изобретения — получение штамма, обладающего выраженными антигенными свойствами и оЬусловливающего получение сыворотки с высоким содержанием антител к антигенам коксиелл первой фазы, Предлагаемый штамм коксиелл Бернета, названный "Вологда", выделен от овец в
Вологодской области. Депонирован во Всесоюзном музее риккетсиальных культур научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии им, Н.Ф.Гамалеи АМН СССР под М 105 от 25 мая 1989 r.
Морфология и. культуральные свойства.
Коксиеллы находятся в первом фазовом состоянии,. при окраске по РомановскомуГимзе и Гименец — морфология типичная, 1724683
Составитель Н. Токаревич
Техред М.Моргентал Корректор М. Кучерявая
Редактор Н. Яцола
Заказ 1150 Тираж;, Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.. 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", r, Ужгород, ул,Гагарина, 101
Культивируются в развивающихся куриных эмбрионах или в селезенках белых мышей. Наибольшее накопление возбудителя в оболочке желточного мешка при заражении 5-дневного куриного эмбриона получают при инфицировании их материалом, содержащим риккетсии в больших концентрациях (+++), в разведении 10 -10 в объеме 0,4 мл.
Патогенные свойства. При подкожном заражении морских свинок массой 300350 r 1,0 мл яичной культуры в разведении
10 вызывает развитие лихорадочной реакции продолжительностью не менее 3 сут.
Антигенность. Антигенная активность штамма выражена: в ответ на однократное внутрибрюшинное введение кроликам массой 3 — 3,5 кг 1.0 мл яичной культуры (+++) в разведении 10, уже на седьмой день после иммунизации выявлялись с помощью реакции связывания комплемента (РСК) антитела к антигену первой фазы в титрах
1:20 — 1:40. Максимальная концентрация антител наблюдается на 21-23 дни после однократной иммунизации, в этот период титр антител составляет к антигену первой фазы
1;163-1:320. В дальнейшем концентрация антител постепенно снижается, однако и че-. рез 1 год после заражения (срок наблюдения) у - большинства животных определяются антитела к первой фазе коксиелл (в титре 1:10-1:20).
Пример. Для получения гипериммунных сывороток частично очищенную от тканевых примесей дифференциальным центрифугированием яичную культуру (+++) коксиелл штамма "Вологда" в разведении
5 10 последовательно с интервалом 3 дня внутрибрюшинно вводили кроликам массой
3-3,5 кг в объеме 0,5; 1 и 2 мл. Через 10 дн после последней иммунизации получали гипериммунную сыворотку. Титры антител у
10 животных, зараженных коксиеллами штамма "Вологда", к антигену первой фазы коксиелл составили 1:640 — 1:1280. Сыворотка не реагировала с другими антигенами риккетсиальной природы (риккетсии Проваче15 ка, риккетсии Сибирика). Сыворотка, хранившаяся в замороженном состоянии при -20 С не теряла своей активности на протяжении двух лет (срок наблюдения)..
Для сравнения антигенных свойств предла20 гаемого штамма с международным штаммом, аналогичным образом получали . сыворотку от кроликов, зараженных штаммом "Хензерлинг". Титр антител у этих животных к антигену первой фазы коксиелл
25 составил 1:80 — 1:320, т.е. был значительно ниже, чем у животных, иммунизированных коксиеллами штамма "Вологда".
Формула изобретения
Штамм Сох1еПа burnetti "Вологда" НИ30 ИЭМ М 105, используемый для получения гипериммунных сывороток.
