Штамм бактерий viвriо nag 082 серовара, используемый для приготовления моноварной диагностической сыворотки
Использование: медицина, диагностика микробиология - получение сыворотки с целью идентификации патогенных вибрионов . Сущность изобретения: культуру штамма Vibrio Nag 082 серовара Vibrio Nag КМ-52 (2) высевают в 1%-ную пептонную воду при рН 7,6 и выращивают при 37°С в течение 4 ч. Инокулят пересевают на агар, содержащий настой сердечной мышцы. Полученную биомассу суспендируют в физиологическом растворе. Кроликов иммунизируют суспензией трехкратно с трехдневными интервалами: первую и вторую инъекции подкожно по 20 млрд. вибрионов , третью - внутривенно 5 млрд. вибрионов. На седьмые сутки после последней инъекции кроликов обескровливают. Сыворотку консервируют мертиолатом натрия , диагностический титр сыворотки 1:400, сыворотка специфична, высокоактивна, гетерологических антител не содержит. 2 табл. Штамм Vibrio Nag KM-52 (2) обладает всеми свойствами, характерными для рода Vibrio (табл.1). Морфологические признаки. Подвижные , слегка изогнутые палочки, спор и капсул не образует, грамотрицательные. Культуральные признаки. На плотном агаре образуют гладкие, круглые, прозрачные, с ровными краями колонии диаметром 2-2,5 мм. В жидких средах вызывает равномерное помутнение, образует на поверхности пленку. Физиологические свойства. Оксидазоположительный. относится к I группе Хейберга ферментирует глюкозу до кислоты (Л С vl CJ СО О 00
СОКОВ СОВЕТСКИХ
СО((ИЛЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4856625/13 (22) 12.06,90 (46) 15.05.92. Бюл. N 18 (71) Всесоюзный научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" и Ростовский-на-Дону научно-исследовательский институт эпидемиологии, микробиологии. паразитологии и гигиены (72) А.К.Адамов. И,И. Шуркина, И,Т.Андрусенко, А,П.Шепелев. О,В,Фрунзе, Е.А,Корешкова, Ю,Ю,Елисеев. Ю.Б,Резников.
Г.А,Сомова и Г.И,Белоногова (53) 576.851.31(088.8) (56) Sakaraki R. et al. Sегоlogical stadies on
the cholerae. group, of vibrios. — Jnp. J, Medicine Science Biology, 1970, v, 23. N 1, р.
13-20. (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ VIBRIO NAG 082
СЕРОВАРА, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ МОНОВАРНОЙ ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ СЫВОРОТКИ
Изобретение относится к медицинской микробиологии. а именно к серологической идентификации патогенных вибрионов.
Целью изобретения является штамм
Vibrio Nag нового 082 серовара, используемый для приготовления моноварной диагностической сыворотки для идентификации патогенных вибрионов.
Штамм Vibrio Nag KM — 52 (2) 082 серовара хранится в коллекции Музея живых культур
Всесоюзного научно-исследовательского противочумного института "Микроб" под номером КМ-52 (2).
„., . Ы„„1733468 А1
КМ вЂ” 52 (2) высевают в 17;-ную пептонную воду при рН 7 6 и выращивают при 37 С в течение 4 ч. Инокулят пересевают на агар, содержащий настой сердечной мышцы. Полученную биомассу суспендируют в физиологическом растворе. Кроликов иммунизируют суспензией трехкратно с трехдневными интервалами: первую и вторую инъекции подкожно по 20 млрд. вибрионов, третью — внутривенно 5 млрд, вибрионов, На седьмые сутки после последней инъекции кроликов обескровливают. С Сыворотку консервируют мертиолатом натрия, диагностический титр сыворотки 1:400, сыворотка специфична, высокоактивна. гетерологических антител не содержит. 2 табл. 4 :(л) (гд Штамм Vibrio Nag KM-52 (2) обладает ;0с всеми свойствами, характерными для рода:(ф Vibrio (табл.1), Морфологические признаки. Подвиж- 3 » ные, слегка изогнутые палочки, спор и капсул не образует. рамотрицательные. Культуральные признаки. На плотном аг аре образуют гладкие, круглые. прозрачные, с ровными краями колонии диаметром 2-2,5 мм. В жидких средах вызывает равномерное помутнение, образует на поверхности пленку. Физиологические свойства. Оксидазоположительный, относится к.! группе Хейберга. ферментирует глюкозу до кислоты 1733468 45 55 без газа. не ферментирует инозит и салицин, образует индол. ферментирует маннит. декарбоксилирует лизин и орнитин, не дегидрирует аргинин. не фосфоресцирует, обладает диастазной активностью, не растет в 1 %-ной пептонной воде с добавлением 7 и 10%-ного хлорида натрия, Не агглютинируется сыворотками О, Инаба, Огава, RO, ОН и диагностическими сыворотками против вибрионов 02 — 081 сероваров. Не лизируется фагами зльтор. ХДФ 3, ХДФ 4, ХДФ 5 ти ТЭП — 1, ТЭП — 2, ТЭП — 3, ТЭП — 4, ТЭП — 5, ТЭП — 6, ТЭП — 7. Лизируется . фагом С в разведении 10 -2 Обладает специфическим О-антигеном. При иммунизации кроликов О-антигеном данного штамма образуются специфические антитела. Пример 1. Для приготовления моноварной диагностической сыворотки используют О-анти-ev. штамма Vibrio Nag КМ-52 (2) 082 серовара. Культуру штамма Vibrio Nag KM — 52 (2) высевают в 1%-ную пептонную воду, рН 7 6, и выращивают при 37 С в течение 4 ч. затем пересекают на свежескошенный агар, содержащий настой сердечной мышцы рН 7.6, Посевы инкубируют при 37 С в течение 18-20 ч, Выросшую культуру смывают с агара физиологическим раствором рН 7.2, Полученную микробную 0 взвесь кипятят при 100 С в течение 2 ч с момента закипания в 10%-ном растворе хлорида натрия. Затем взвесь дважды отмывают физиологическим раствором рН 7,2 путем центрифугирования, После контроля на специфическую стерильность микробную взвесь используют для иммунизации кроликов. Кроликов породы шиншилла весом 2— 2.5 кг иммунизируют трехкратно с трехднев5 ным интервалом: первую и вторую иммунизацию делают подкожно по 20 млрд. м.т., третью инъекцию — 5 млрд. м.т. внутривенно. На седьмые сутки после последней инъекции кроликов обескроливливают, Сы10 воротку консервируют путем добавления мертиолата натрия 1:10000. Титры сывороток составляют 1:3200, 3а диагностический титр принято разведение сыворотки 1:400. Сыворотку применяют в реакции агглю15 тинации с вибрионами, Реакцию агглютинации ставят объемным методом в пробирках, Сыворотку используют в одном разведении — диагностическом титре. Для разведения сывороток и приготовления взвесей культур 20 используют физиологический раствор рН 7,2. Положительной считают реакцию с оценкой 2-4 "+". Сыворотка против вибрионов 082 серовара строго специфична и высокоактивна. 25 Положительная реакция отмечалась только с гомологичным штаммом (табл,2), Использование предлагаемой сыворотки при диагностике кишечных заболеваний имеет большое практическое значение, так 30 как расширяет возможности дифференцирования патогенных вибрионов. Формула изобретения Штамм бактерий ibrio Nag 082 серовара 35 KM-52 (2), используемый для приготовления моноварной диагностической сыворотки. 1733468 Таблмца 1 — и Подвив- Фос Ферментация Проба Хью-Лейфсоня Лекарбоксилаза ЛигидроСеровар ЦитоОкраска по ГраШтамм реа ция - лвта - аргинихромоксиОкисление на раза кн-Э2 082 (2) + + Образование Фаголизабельность фагами Рост на 1Э-ной пептонной воде с добавлением ТЭПВ-3 ° й.Э,Е Эльтор ХЛФЗ ХЛФч ХЛФ5 ТЭПВ-1 ТЭПВ-2 индо- серовола дорода О Огавз Инабл RO Таблнца2 30 40 50 Составитель М. Поманская Техред М.Моргентал Корректор М. Максимишенец РЕдактОр М.циткинз Заказ 1639 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открьетичм при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35. Рэушская наб.. 4/5 Производстве н но-издательский комбинат" Патент".г.Ужгород.уд. Гагарина.101 12-ного 7%-ного 102-ного хлорида хлорида хлорида натрия натрия натрия лизина (орннти на Агглютинабельность холерными диагностическими сыворотками Группа Хейберга нанни- ино та ra зи- сали- пакт цина зы ность о-(крах(мала
